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姜永萍: 作品数：152 被引量：349H指数：11; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生政治法律更多>>

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对醌类与N,N'-二氮杂萘二氧化物化合物对重离子(<'12>C<'6+>)治疗小鼠移植性肿瘤(S180)的影响: 选用160只小鼠在同等条件下就马蔺子甲素(M<,1>)、叔丁基苯醌(M<,2>)、2-乙酰基-N,N'-二氮杂萘二氧化物(M<,3>)和2-乙醇基-N,N'-二氮杂萘二氧化物(M<,4>)对重离子(<'12>C<'6+>...; 姜永萍; 关键词：小鼠移植性肿瘤抑瘤作用

H7N9禽流感荧光报告病毒的构建及初步应用: 2021年; 为实现对H7N9禽流感病毒(AIV)感染过程的动态可视化示踪,本研究构建了重组报告质粒pHH21-NS-Venus、pHH21-NS-Apple 和包含 H7N9 AIV CK/SD008 株的 8 个基因节段的重组质粒 pHH21-PB2-627E、pHH21-PB2-627K(来自 CK/SD008-627K 株)、pHH21-PB1、pHH21-PA、pHH21-HA、pHH21-NA、pHH21-NP、pHH21-M。上述质粒均经测序鉴定。利用12质粒反向遗传操作系统,构建2株荧光报告病毒SD008-627EVenus、SD008-627E-Apple,及E627K 对哺乳动物嗜性的 2株荧光报告病毒 SD008-627K-Venus、SD008-627KApple。将这4株报告病毒感染A549细胞后在荧光显微镜下均可见相应荧光且病毒主要定位在细胞核中;将其中两株报告病毒SD008-627E-Venus/Apple经鸡胚传2代,2株SD008-627K-Venus/Apple在小鼠体内传3代后均感染A549细胞,经倒置荧光显微镜观察均可见相应荧光。上述结果表明4株报告病毒正确构建,且其可以在鸡胚或者小鼠体内传代(即SD008-627K-Venus/Apple为小鼠适应性报告病毒)。将4株报告病毒与亲本病毒分别感染C57BL/6小鼠,进行小鼠致病性试验。结果显示,报告病毒SD008-627E-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627E的MLD_(50)均>5 log_(10)EID_(50)/mL,且均对小鼠不致死;报告病毒SD008-627K-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627K的MLD_(50) 分别为1.6 log_(10)EID_(50)/mL、2.3 log_(10)EID_(50)/mL 和 1.8 log_(10)EID_(50)/mL;报告病毒 SD008-627E-Venus/Apple 与其亲本病毒SD008-627E感染小鼠的鼻甲、肺、脑、脾和肾的病毒滴度均<10^(2) EID_(50)/mL;SD008-627K-Venus/Apple及其亲本病毒SD008-627K的鼻甲和肺的病毒滴度均>10^(6) EID_(50)/mL,脑、脾和肾的病毒滴度均<102EID_(50)/mL。上述结果表明,构建的4株报告病毒均未改变亲本病毒对小鼠的致病性。利用噬斑试验,将报告病毒SD008-627K-Venus感染MDCK细胞,结果可见其能够引起细胞病变和表达荧光蛋白且荧光斑数量与噬斑数量相近。分别将报告病毒SD008-627K-Venus感染小鼠,3 d后取其肺脏研; 于晓菲万晓朋李继清姜永萍; 关键词：荧光蛋白

鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统及构建方法和应用: 本发明涉及一种鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统，其特征在于所述系统包括多个粘粒，每个粘粒中克隆有鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段，所述鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段含有相互重叠的区域，并拼接覆盖鸭病毒性肠炎病毒疫苗株全基...; 陈化兰柳金雄步志高姜永萍

禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表达核酸疫苗质粒的构建及其在体外的表达被引量：7: 2004年; 为了获得既能对 H5亚型又能对 H7亚型 AIV攻击产生保护的核酸疫苗 ,设计构建了含有双顺反子的真核表达载体 ,用限制性内切酶从 PCIH7HA载体上切得 AIV H7HA基因的c DNA,此 c DNA含有 CMV启动子和 Poly(A)终止序列 ,使用 DNA 连接酶引入载体PCIH5HA中 ,最后获得双顺反子真核表达载体PCI-H5HA-H7HA,其中 H5HA和 H7HA基因都带有自己的 CMV启动子和 Poly(A)终止序列。选用 2 93 -T真核表达细胞系 ,用脂质体转染法导入细胞进行瞬时表达 ,转染后 48h用荧光标记的兔抗鸡 Ig G进行间接免疫荧光试验。结果表明双顺反子真核表达载体构建正确 ,且在真核表达细胞系中 H5HA和 H7HA基因都能获得表达 ,且 H5HA 基因的表达效果优于H7HA。; 张芳芳刘光亮姜永萍陈化兰陈怀涛; 关键词：禽流感病毒基因表达核酸疫苗质粒间接免疫荧光

表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达: 2012年; 为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。; 常晓飞赵双成田石柳金雄王靖飞曾显营胡永浩姜永萍陈化兰; 关键词：H5亚型禽流感病毒

用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DNA疫苗体外表达研究: 不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/Guang...; 姜永萍李呈军张洪波步志高张芳芳于康震陈化兰; 关键词：HA基因重叠延伸PCR 间接免疫荧光 DNA疫苗; 文献传递

五株H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究: 本研究从安徽省的不同地方分离了五株不同宿主来源的禽流感病毒,在农业部动物流感重点开放实验室进行血清学鉴定为H5N1亚型.为了全面了解五株安徽分离株对哺乳动物的潜在危害,进行五株禽流感病毒人工感染BALB/c小鼠的试验,旨...; 朱启运魏建忠李雁冰姜永萍邓国华田国斌陈化兰; 关键词：禽流感禽流感病毒血清学鉴定分子生物学特性; 文献传递

SYBR Green I荧光RT-PCR方法检测禽流感病毒被引量：14: 2006年; 为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测,试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明:此次建立的检测AIV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV,对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%(9/169),而普通RT-PCR方法检出率为6.51%(11/169),病毒滴定检出率为5.62(9/160)。对其他病毒(NDVI、BDVI、BV、VA)则未检测到,且整个检测过程只需4 h,表明该方法特异、准确、快速。; 刘丽玲姜永萍王秀荣陈化兰魏萍; 关键词：禽流感病毒 SYBR

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒PCAGGOPTIHA5对金定鸭的免疫保护效力: H5亚型禽流感DNA疫苗质粒PCAGGOPTIHA5对SPF鸡具有良好的免疫保护效果,为探讨其对鸭的免疫保护效果,本研究将PCAGGOPTIHA5以100μG剂量加强免疫4周龄金定鸭,同时设油苗免疫对照组和空白对照组,加...; 姜永萍张洪波张平静赵有淑乔传玲王秀荣陈化兰; 关键词：禽流感 DNA疫苗免疫保护; 文献传递网络资源链接

一种检测禽流感病毒不同亚型cDNA的基因芯片及其制备方法: 本发明公开了一种新的检测禽流感病毒不同亚型cDNA的方法，步骤如下：分别制备覆盖禽流感病毒H5、H7、H9亚型及M基因的DNA片段，将所制备的DNA片段点到氨基包被的玻璃载体上制备成基因芯片备用；通过反转录将被检病毒样品...; 王秀荣于康震陈华兰邓国华刘丽玲孔宪刚乔传玲姜永萍; 文献传递

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