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温州地区汉族人群CYP2C19和CYP2C9基因多态性分析被引量：7: 2014年; 目的:研究温州地区汉族人群CYP2C19、CYP2C9基因多态性分布。方法:采用聚合酶链式反应和测序方法,对287例健康人群CYP2C19、CYP2C9基因多态性进行分析。结果:温州地区汉族人群的CYP2C19*1、CYP2C19*2和CYP2C19*3三种等位基因的频率分别为65.16%、29.27%和5.57%;CYP2C19*1/*1、CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*3、CYP2C19*2/*2和CYP2C19*3/*3基因型的频率分别为44.95%、33.45%、6.97%、4.18%、10.45%和0.00%,弱代谢率为14.63%;CYP2C9*1和CYP2C9*3等位基因频率分别为97.74%和2.26%,CYP2C9*1/*1和CYP2C9*1/*3的基因频率为95.47%和4.53%,未发现CYP2C9*3/*3。结论:温州地区汉族人群CYP2C19和CYP2C9弱代谢率与已报道的汉族人群基本一致,与日本人群相近,显著高于欧美人群。; 周怀彬王金丹胡理怀温超玮吕建新; 关键词：P450 CYP2C19 CYP2C9 多态性汉族

一种锌离子诱导重组蛋白表达体系、其诱导方法和应用: 本发明公开了一种锌离子诱导重组蛋白表达体系、其诱导方法和应用，属于基因和蛋白工程领域；本发明通过将大肠杆菌锌耐受操纵子znt的启动子序列PzntA和重组蛋白的编码基因进行融合，并利用pUC57‑Kan载体转化到zntA基...; 王伍李江辉周易周怀彬谭国强周晓峰; 文献传递

IscU2对非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制的研究: 2020年; 该文通过shRNA干扰技术敲低IscU2干扰细胞IscU2的表达,研究了干扰IscU2对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NCI-H520增殖、迁移及侵袭能力的影响。构建了稳定低表达IscU2的非小细胞肺癌细胞系NCI-H520;采用CCK-8和平板克隆实验检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡、ROS、线粒体膜电位变化情况;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot检测相关蛋白的表达。结果表明,干扰IscU2后,非小细胞肺癌细胞的增殖及克隆形成能力降低;细胞周期停滞在G1/G0期,同时伴随有p-AKT和Cyclin D1蛋白含量的下降;细胞晚期凋亡率明显增加,凋亡蛋白Cleaved-caspase3和Cleaved-PARP表达上调;细胞迁移和侵袭能力降低,上皮标志物E-Cadherin表达上调,间质标志物N-Cadherin和Snail表达下调;细胞ROS积累和线粒体膜电位下降。该研究结果表明,干扰IscU2显著抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移、侵袭能力和上皮–间质转化,这为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供了新的潜在靶点和视角。; 韩琴霞孙倩倩孙倩倩周怀彬周怀彬; 关键词：非小细胞肺癌增殖迁移

人线粒体DNA缺失宫颈癌细胞及其转线粒体细胞的建立与初步分析被引量：2: 2015年; 目的:探讨溴化乙锭(EB)诱导法建立人线粒体DNA(mtDNA)缺失宫颈癌Hela S3细胞,以及再转入线粒体构建融合细胞的可行性,并对转线粒体细胞进行初步分析。方法:采用低剂量(100 ng/m L)EB诱导法建立mtDNA缺失的ρ0 Hela S3细胞,通过普通PCR、荧光定量PCR(qPCR)进行mtDNA缺失鉴定。采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合法,以正常人血小板为mtDNA供体转入ρ0 Hela S3细胞,构建转线粒体细胞(transmitochondrial cybrids),并通过PCR、qPCR和透射电镜观察进行初步分析和鉴定。结果:普通PCR和qPCR结果证实EB诱导法能够成功建立ρ0 Hela S3细胞,同时结合透射电镜证明转线粒体细胞能够恢复线粒体正常结构。结论:采用EB诱导法可成功建立ρ0 Hela S3细胞,且通过细胞融合构建的转线粒体细胞能够恢复mtDNA复制和正常线粒体结构,为研究mtDNA突变与线粒体功能异常相关疾病的关系提供可靠的实验基础。; 温超玮叶薇周怀彬吕建新李伟

秀丽线虫mfn-1 RNAi通过依赖于ATFS-1途径激活线粒体未折叠蛋白反应: 2014年; 目的:研究mfn-1 RNAi对线粒体未折叠蛋白反应的激活作用及其机制。方法:分别对线虫SJ4058和SJ4100(指示线粒体未折叠蛋白反应)、TJ375(指示细胞质未折叠蛋白反应)、SJ4005(指示内质网未折叠蛋白反应)进行mfn-1 RNAi处理,观察后代中能否激活相应分子伴侣表达;将SJ4058线虫分别与haf-1基因功能缺失线虫RB867及atfs-1基因功能缺失线虫VC3201杂交,然后对获得的纯合子线虫进行mfn-1RNAi,观测后代中是否有荧光激活,即验证分子伴侣的激活是否依赖于HAF-1及ATFS-1。结果:Mfn-1 RNAi特异性激活线粒体分子伴侣HSP-6及HSP-60的表达,而没有激活细胞质分子伴侣HSP-16.2及内质网分子伴侣HSP-4;通过杂交获得基因型为hsp-60::gfp/haf-1(ok705)IV和hsp-60::gfp/atfs-1(gk3094)V的线虫并经过PCR验证。进一步对这两种基因型的线虫进行mfn-1 RNAi处理发现,线粒体分子伴侣HSP-60的激活依赖于ATFS-1而不依赖于HAF-1。结论:Mfn-1 RNAi特异性激活线粒体而非细胞质及内质网未折叠蛋白反应,提示MFN-1蛋白的表达降低对线粒体蛋白稳态有影响,而对细胞质及内质网蛋白质稳态影响不大;Mfn-1 RNAi对线粒体未折叠蛋白反应的激活依赖于转录因子ATFS-1而不依赖于线粒体膜蛋白HAF-1。; 姚秀萍陈思希任亚光周怀彬吕建新; 关键词：秀丽线虫

一种检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株的构建: 2020年; 目的:构建一种能够检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株。方法:首先采用交叉PCR将增强型绿色荧光蛋白与铜离子“外排泵”基因copA的启动子融合构建响应铜离子的CopAp::gfpmut2-pET28a感应元件。然后利用Red重组系统分别敲除野生型大肠杆菌(E.coli)MC4100体内负责外排转运铜离子的基因,并将感应元件转化至突变菌中完成菌株的构建。最后优化出最佳检测条件,并将其初步应用于检测水环境中铜离子。结果:相对野生型菌株,E.coliΔcusA-ΔcopA-ΔcueO突变菌对铜离子的敏感性提高了64倍,从而使报告菌株的荧光信号显著增强,且荧光信号强度与铜离子浓度呈剂量依赖关系;报告菌株的线性检测范围为0.05~2.5μmol/L(0.0032~0.16 mg/L)Cu2+;与原子吸收光谱法相比,其对生活饮用水中0.05 mg/L和1 mg/L铜离子的回收率分别为87.90%和104.37%。结论:本研究构建报告菌株的灵敏度能够有效覆盖国标中针对生活饮用水和污水中铜离子的限制,从而为报告菌株的应用奠定了技术基础。; 周怀彬王娟娟赵建国洪旭芬庞一林李江辉谭国强; 关键词：增强型绿色荧光蛋白 RED重组系统

一株检测砷的大肠埃希氏菌: 本发明涉及一种检测水体中类金属砷的微生物学方法，具体涉及利用基因工程改造的大肠埃希氏菌报告菌株构建方法，及建立其在检测水体中砷的方法。本发明所述检测菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除野生型大肠杆菌MC4100砷抗性的...; 吕建新纪松军周怀彬杜璟郑美琴; 文献传递

一种检测水体类金属砷的微生物学方法: 本发明涉及一种检测水体中类金属砷的微生物学方法，具体涉及利用基因工程改造的大肠埃希氏菌报告菌株构建方法，及建立其在检测水体中砷的方法。本发明所述检测菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除野生型大肠杆菌MC4100砷抗性的...; 吕建新纪松军周怀彬杜璟郑美琴; 文献传递

C.elegans中clk-1基因对寿命的影响被引量：4: 2017年; clk-1[clock(biological timing)abnormality-1]是泛醌合成所必需的,参与电子传递过程,从而影响线粒体呼吸功能,其突变是已发现的第一个寿命延长的线粒体基因突变。该文通过对线虫表型、线粒体功能的相关检测来研究clk-1突变和clk-1 RNAi(RNA interference)对线虫寿命的影响。结果表明,clk-1突变线虫MQ130寿命延长,线粒体中活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平升高而胞质中ROS水平下降,总ATP含量升高;clk-1 RNAi线虫寿命缩短,线粒体中ROS水平下降而胞质中ROS水平升高,总ATP含量下降。ROS作为细胞的一种信号分子,与线虫的衰老密切相关;ATP是能量代谢的一个重要指标,其含量的升高代表着能量代谢缓慢。由此可见,clk-1突变线虫和clk-1RNAi线虫寿命的差异可能与线粒体和胞质中ROS的不同功能以及能量代谢速率的不同有关。; 章丛婕王科洁刘振亚黄佳涛周怀彬吕建新; 关键词：秀丽线虫 ROS ATP

Mitoferrin RNAi延长秀丽线虫寿命的初步研究: 背景：　　铁是所有生物生存所必需的微量元素，它主要在线粒体被用来合成铁硫簇，血红素及其他辅基，参与多种生理过程。自由铁可通过Fenton反应产生自由基，影响细胞正常功能。铁代谢紊乱与许多疾病的发生有关，如缺铁性贫血(缺铁...; 周怀彬; 关键词：秀丽线虫 RNAI技术

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周怀彬

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