随着对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)研究的深入,其功能已涉及细胞癌变进程以及表观遗传学等领域.近期研究显示,NIRF能与HBc(hepatitis B virus core protein)相互结合,但其对乙型肝炎病毒(HBV)抗原表达的影响尚不明确.本文通过转染pAAV-HBV1.3质粒和高压水动力法尾静脉注射BALB/C小鼠,建立乙型肝炎病毒的细胞和动物模型,研究NIRF对乙型肝炎病毒抗原表达的影响.ELISA检测细胞上清和小鼠血清中HBsAg、HBeAg的分泌和表达情况,Western印迹或免疫组化染色技术检测HBcAg.结果显示,乙型肝炎病毒抗原分泌的细胞以及小动物模型建立成功,并且无论在体内外,NIRF都能对它们的表达起抑制作用,期待能为后续的HBV致病机理以及治疗药物的研究提供支持与帮助.
目前对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)的研究正朝着细胞癌变进程以及表观遗传学的方向发展,但在体内NIRF对乙型肝炎病毒(HBV)的复制及表达的影响,目前尚不明确.通过高压水动力法转染HBV小鼠模型,不同时间点收集血液和肝组织标本,荧光定量PCR检测血清及肝组织中病毒载量,WesternBlot检测肝组织HBc(hepatitis B virus core protein)表达,ELISA检测血清HBeAg表达,并通过免疫组化染色检测HBsAg、HBcAg在肝组织中的定位及表达.小鼠转染pAAV-HBV1.3和NIRF以后,血清及肝组织病毒载量降低(n=3,P<0.05),HBc蛋白及HBV相关抗原的表达受到抑制,说明在水动力法转染HBV小鼠模型中NIRF对HBV的复制及表达起到抑制作用,期待能为后续的HBV致病机理及治疗药物的研究与开发提供支持与帮助.
为研究NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的复制以及与乙型肝炎病毒共价环状闭合DNA(HBV cccDNA)结合的组蛋白H3乙酰化的影响,采用脂质体转染将pGEM-HBV1.3+pFLAG、pGEM-HBV1.3+pFLAG-NIRF、pGEM-HBV1.3质粒分别转入HepG2细胞,Western blot检测NIRF蛋白的表达,用ELISA结合RT-PCR检测HBsAg、HBeAg以及HBV cccDNA的量并同时说明HBV在细胞内是完成完整复制表达的,采用染色质免疫共沉淀(ChIP)的方法检测与HBV cccDNA结合的组蛋白H3以及H3乙酰化水平的动态变化。结果显示,NIRF蛋白下调HBV标志物HBeAg、HBsAg的分泌以及HBV cccDNA的表达,表明其对HBV复制具有抑制作用;组蛋白H3及乙酰化的组蛋白H3都与HBV cccDNA的动态变化水平呈现相似的平行性,而NIRF蛋白也明显抑制组蛋白H3的表达水平和乙酰化水平。结论证实NIRF不仅能抑制HBV在肝癌细胞中的复制,而且能下调与HBV cccDNA结合的组蛋白H3和乙酰化组蛋白H3的表达。期待NIRF能为后续的HBV致病机理、HBV复制表观遗传学水平研究及有效抗病毒药物的研究与开发提供理论上的支持与帮助。
