刘龙
- 作品数：104 被引量：346H指数：10
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学理学更多>>
- 利用环糊精糖基转移酶转化合成AA-2G的研究被引量：2
- 2018年
- 利用环糊精糖基转移酶(CGT-SL)对转化合成2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的条件进行考察。反应产物通过HPLC/LC-MS分析确定含有AA-2G。以便宜易得的可溶性淀粉和VC作为底物,在初始反应条件下AA-2G的产量为1.23 g/L。通过转化条件优化初步确定了转化反应的最优条件:最适温度15℃,最适pH 4.0,转化反应时间32 h,底物VC和可溶性淀粉的比例为2∶4,VC质量浓度为16 g/L,酶浓度为79 U/m L时,AA-2G的产量达到6.23 g/L,VC转化率为19.93%。
- 单丽媛刘龙李江华堵国成陈坚
- 关键词：环糊精葡萄糖基转移酶L-抗坏血酸
- L-氨基酸脱氨酶全细胞转化L-苯丙氨酸生产α-苯丙酮酸
- 苯丙酮酸是一种多功能有机酸,广泛应用于制药、食品、化学工业.传统化学合成法污染严重,能耗高,产率低.L-氨基酸脱氨酶(EC1.4.3.2,L-AAD)催化L-氨基酸氧化脱氨基,生成相应α-酮酸和氨,多为黄素蛋白.Prot...
- 侯颖刘龙李江华堵国成
- 关键词：催化剂L-苯丙氨酸
- 文献传递
- 环糊精糖基转移酶-淀粉酶CBM区域嵌合酶的构建以提高2-O-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的合成效率
- 本文基于融合PCR技术,以来自于Alkalimonas amylolytica 的α-淀粉酶碳水化合物结合区域(CBMAmy)与来自于Paenibacillus macerans 的环糊精糖基转移酶(CGTase)为基础...
- 韩瑞枝刘龙李江华堵国成陈坚
- 基于自组双亲短肽与环糊精糖基转移酶融合改善其在糖基化维生素C合成中的底物特异性
- 韩瑞枝刘龙李江华堵国成陈坚
- 不透明红球菌转化合成α-酮异己酸培养基优化被引量：1
- 2011年
- 利用基于统计学的方法对不透明红球菌(Rhodococcus opacus)DSM 43250转化合成α-酮异己酸(KIC)的培养环境进行优化。采用Plackett-Burman(PB)设计筛选获得对KIC产量具有显著影响的关键营养因子:(NH4)2SO4、麦芽膏和NaNO3。通过最陡爬坡实验、Box-Behnken实验设计和SAS软件回归分析建立了KIC产量关于3个关键营养因子的二次多项式模型,并以模型求解确定最佳培养条件(g/L):(NH4)2SO4 0.23,麦芽膏2.42,NaNO3 1.43。在此培养条件下,KIC的理论最高产量为23.98 mg/L,在验证实验中KIC最高产量为23.93 mg/L,比优化前(3.72 mg/L)提高了6.43倍。
- 祝玉洪刘龙周景文房峻李江华堵国成陈坚
- 添加保护剂促进碱性果胶酶的工业保藏稳定性被引量：1
- 2012年
- 保藏稳定性对于商品酶具有重要的实际意义。通过对碱性果胶酶的保护剂进行研究,最终筛选得到最优复合保护剂配方为:Tween 20 1 mL/L,六偏磷酸钠1.5 g/L,明胶5g/L,甘油5%(v/v),CaCl_2 2g/L;热稳定性提高18倍。此外在常温保藏时,在酶液中添加0.3‰山梨酸钾和0.3‰苯甲酸钠,能有效提高保藏效果,减少酶液染菌、混浊和发臭,最终常温保藏90 d后酶活保留率为84.5%,达到工业化保藏的要求。
- 王辉林李江华刘龙堵国成陈坚
- 关键词：碱性果胶酶稳定性保护剂防腐剂
- Red同源重组敲除nagE和manX对大肠杆菌发酵生产氨基葡萄糖的影响被引量：10
- 2012年
- 氨基葡萄糖(GlcN)又称氨基葡糖或葡糖胺,是葡萄糖的一个羟基被氨基取代后的化合物,在医药和保健领域具有广泛应用。在前期研究中,我们构建了一株可高效合成GlcN和其乙酰化衍生物N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的重组大肠肝菌Escherichia coli-glms-gna1(在下游提取过程中用弱酸进行脱乙酰化即可将GlcNAc转化为GlcN)。但研究发现,发酵过程中GlcN和GlcNAc能被转运至胞内作为碳源利用,导致胞外产量显著减少。为阻断胞外GlcN和GlcNAc向胞内的转运,利用Red同源重组技术将E.coli-glms-gna1的乙酰氨基葡萄糖磷酸转运子编码基因nagE和甘露糖磷酸转运子编码基因manX敲除,获得nagE基因敲除的工程菌E.coli-glms-gna1-nagE和nagE/manX基因双敲除的工程菌E.coli-glms-gna1-nagE-manX,并在7 L发酵罐上利用构建的工程菌进行GlcN和GlcNAc的发酵生产。实验结果表明:培养对照菌株E.coli-glms-gna1至12 h时GlcN产量达到最大值4.06 g/L,GlcNAc产量达到最大值41.46 g/L;而培养单基因敲除菌株E.coli-glms-gna1-nagE至12 h时GlcN产量达到最大值4.38 g/L(是对照菌株的1.08倍),GlcNAc产量达到最大值71.80 g/L(是对照菌株的1.7倍);培养双基因敲除菌株E.coli-glms-gna1-nagE-manX至10 h时GlcN产量达到最大值4.82 g/L(是对照菌株的1.2倍),GlcNAc产量达到最大值118.78 g/L(是对照菌株的2.86倍)。这表明nagE和manX基因的敲除可显著降低GlcN和GlcNAc向胞内的转运,进而提高其在胞外的积累。研究结果对最终实现GlcN的工业化生产具有一定的指导意义。
- 陈欣刘龙李江华刘杰堵国成陈坚
- 关键词：氨基葡萄糖
- 不透明红球菌转化合成α-酮异己酸的培养条件优化被引量：4
- 2011年
- 利用基于非完全平衡块原理的Plackett-Burman法和响应面法对不透明红球菌(Rhodococcus opacus DSM 43250)转化合成α-酮异己酸(KIC)的培养条件进行优化,以提高KIC的产量.首先采用Plackett-Burman(PB)设计对影响KIC产量的6个因素的效应进行评价,筛选出具有显著影响的关键因素——接种量、装液量和初始pH,然后通过最陡爬坡实验和Box-Behnken实验设计对关键因素的最佳水平范围进行研究,并利用SAS软件回归分析建立了二次多项式模型,通过模型求解确定最佳培养条件为:接种量6.93%,装液量33.38 mL,初始pH 7.6.在优化后的培养条件下,KIC的理论最高产量为31.08 mg/L,在验证实验中KIC最高产量为30.97 mg/L,比初始产量23.93 mg/L提高了29.42%,为进一步的发酵放大奠定了基础.
- 祝玉洪刘龙周景文房峻李江华堵国成陈坚
- 关键词：响应面法
- L-氨基酸脱氨酶的分子改造及其用于全细胞催化法生产α-酮戊二酸条件的优化被引量：1
- 2019年
- 酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)是谷氨酸脱氨基的酮酸产物,作为一种重要的有机酸广泛用于食品、医药、精细化工等领域。为提高L-氨基酸脱氨酶全细胞催化法合成α-KG的效率及产量,首先通过优化全细胞催化剂制备条件及全细胞转化反应条件,包括发酵过程中的温度、诱导剂浓度、诱导剂添加时刻、诱导时间等;全细胞转化过程中的温度、pH、细胞量、转化时间。各个条件优化后以200g/L谷氨酸钠为底物时,产量最终提高了54. 9%,摩尔转化率为39. 6%。其次,通过定点饱和突变对L-氨基酸脱氨酶进行定向进化以提高其催化能力。经过多次突变、筛选,最优突变体E. coli BL21-pET-20b(+)-pm1152催化200g/L谷氨酸钠生成α-KG最高产量为100. 9g/L,摩尔转化率为64. 7%,较最初对照菌株提高了66. 3%。结果表明,条件优化和饱和突变可有效提高重组大肠杆菌全细胞转化合成α-KG的能力。
- 王越李江华堵国成刘龙
- 关键词：全细胞催化
- 常压室温等离子体诱变高通量筛选N-乙酰氨基葡萄糖高产突变株被引量：1
- 2016年
- 采用新型常压室温等离子体(ARTP)诱变产N-乙酰氨基葡萄糖工程菌BSGN6,并应用显色法和96孔板培养方法筛选N-乙酰氨基葡萄糖高产突变株。研究表明显色反应时添加四硼酸钾溶液1μL、PDABA 125μL、反应时间5 min、反应温度96℃时,N-乙酰氨基葡萄糖检测的准确度最高。通过多轮ARTP诱变及高通量筛选最终获得突变株(4A12),3 L罐发酵Glc NAc产量达到36.14 g/L,较出发菌株(BSGN6)提高了65.32%。经过50次传代后性状稳定。ARTP诱变技术作为获得产N-乙酰氨基葡萄糖高产菌株的有效途径,与分子生物学手段相比,本方法更加快捷高效。
- 池亚斌顾洋刘龙李江华堵国成陈坚
- 关键词：N-乙酰氨基葡萄糖高通量筛选
