刘建兵
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：海南医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金海南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌DNA疫苗pVS85B的构建及免疫保护实验研究被引量：2
- 2006年
- 评价构建的结核DNA疫苗pVS85B免疫小鼠后脾细胞体外产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力。利用基因操作技术将结核菌ag85b插入pVAX1载体,构建表达结核菌Ag85B分泌型蛋白的DNA疫苗pVS85B。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS85B、pVAX1、pIL2S和PBS分别免疫3次,均间隔2周,以相同剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果是pVS85B免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量分别为(311.3±46.2)和(273.6±55.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS85B免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(47 716.6±5 689.0)、(50 113.4±6 532.2)和(51 095.3±2 788.9)CFU/g,分别低于pVAX1、pIL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001)。pVS85B免疫组脾、肝和肺的结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。提示,表达结核菌分泌型Ag85B的DNA疫苗pVS85B能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答,免疫鼠获得抵抗H37Rv攻击的能力。
- 刘建兵朱中元王海波谢勇张春发张颖
- 关键词：DNA疫苗结核分泌蛋白细胞免疫免疫保护
- 结核分枝杆菌Mtb8.4DNA疫苗构建及免疫保护研究被引量：4
- 2005年
- 目的评价构建结核菌DNA疫苗pVS84免疫小鼠体外产生细胞因子的能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法利用基因技术将结核菌Mtb8.4插入pVAXl载体,构建表达结核菌Mtb8.4蛋白(分泌型)的DNA疫苗pVS84。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS84、pVAXl、plL2S和PBS分别各免疫3次,每次均间隔2周,以等剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内注射免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS84免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mlFN-Y平均含量分别为(290.0±112.9)pg/ml和(501.7±79.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS84免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(39176.9±3702.6)、(18780.1±2535.8)和(24410.3±1846.8)CFU/g,分别低于pVAXl、plL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),仅脾结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS84能够刺激机体产生抗结核菌所需的Thl型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG接近。
- 朱中元刘建兵王海波谢勇张春发张颖
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗分泌蛋白免疫保护
- 结核杆菌DNA疫苗pVS84与pIL2质粒联合免疫的保护效率研究
- 2006年
- 目的用构建的人hIL-2质粒和结核杆菌DNA疫苗pVS84联合免疫后,对小鼠的细胞因子进行了测定并对抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力进行了评估。方法将hil-2插入pVAX1,构建了人hIL-2的质粒pIL2。将雌性C57BL/6鼠分成6组,分别用pVS84和pIL2各50μg,pVS84,pVAX1,pIL2S和PBS免疫3次,间隔2周,加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强后,取脾培养,检测上清细胞因子。另10只用结核菌H37Rv攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果pVS84+pIL2联合免疫组的鼠血清hIL-2平均浓度为720.5±114.5pg/ml,显著高于其它组。pVS84+pIL2组、pVS84组的脾细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。pVS84+pIL2组脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为12471.4±2269.3,13622.6±2404.0和14742.0±2378.7CFU/g,低于pVS84组和3个阴性对照组相应器官的结核菌载量(P<0.001),与BCG对照组无显著差异。结论pIL2质粒与pVS84联合免疫能够刺激机体产生Th1型免疫应答,抵抗H37Rv攻击的能力与BCG的效果相当。
- 朱中元谢勇王海波刘建兵陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗联合免疫
- 人乳头瘤病毒基因分型芯片的研究被引量：2
- 2009年
- 目的建立人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)基因分型芯片技术,采用基因测序技术对该芯片进行评价,探讨其临床使用价值。方法利用基因工具软件比对HPVL1基因,设计可扩增高危型HPV的通用简并引物和可以鉴别HPV型别的基因探针,仪器将探针点样于尼龙膜上,制备HPV分型基因芯片。芯片检测的样本结果与HPV基因测序的结果进行比较,以评价芯片的分析性能。结果建立的HPV基因芯片的灵敏度为102cfu/ml,重复性检测的HPV型符合率为96.7%(87/90),与基因测序结果分型的符合率高达94.3%(66/70),可以检测常见的高危型和导致性传播疾病的HPV型别,可在6～7h内出结果,结果可通过仪器判读。结论HPV基因芯片具有较高的敏感性和重复性,与基因测序的结果符合率高,具有临床推广使用潜力。
- 朱中元郭洁王海波刘建兵谢勇王莉
- 关键词：人乳头瘤病毒基因分型芯片技术
- 等位基因特异PCR技术检测结核分支杆菌rpoB基因突变研究
- 2002年
- 目的 建立并评价等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐利福平基因rpoB突变的方法。方法 设计与rpoB基因突变后的碱基配对的引物用于扩增突变基因,建立AS-PCR检测rpoB基因突变的方法,并对58株结核菌进行了检测。结果AS-PCR检测结核菌耐利福平相关基因rpoB的敏感性为77.3％,特异性达91.7％。AS-PCR检测rpoB基因,有1628A→T、1657C→T,G和1673C→T突变分别占耐利福平结核菌株的18.2％,22.7％和36.4％。检测rpoB突变与MIC测定RFP耐药率和PCR-SSCP检测的总符合率分别为86.2％和74.1％。检测试验可在3～4h内完成。结论 AS-PCR方法是检测结核菌耐利福平基因突变的敏感和快速方法,可在临床实验室使用并为临床医师提供治疗依据。
- 朱中元王海波陈英兰谢勇刘建兵林丽英
- 关键词：RPOB基因突变结核分支杆菌利福平
- 等位特异PCR检测结核分支杆菌耐异烟肼基因katG突变研究被引量：1
- 2002年
- 目的 建立等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐异烟肼基因katG突变的快速敏感检测方法。方法 利用在PCR时 ,3′端的碱基如果与模板DNA不配对 ,PCR扩增阴性的原理 ,根据我们对katG基因突变特点的研究结果 ,建立了AS -PCR检测katG基因突变的方法。结果 AS -PCR检测结核菌耐异烟肼相关基因katG的敏感性为85 %,特异性达 90 %。 15株经测序证实有katG突变的菌株 ,AS -PCR检测均为阳性。二者的符合率为 10 0 %。与PCR-SSCP检测的总符合率为 88%,阳性符合率 81.0 %,阴性结果的符合率为 93.1%。检测试验可在数小时内完成。结论 AS -PCR方法是检测结核菌耐异烟肼基因突变的敏感方法 ,可为临床医师提供判断结核菌对异烟肼是否敏感的依据。
- 朱中元王海波刘建兵谢勇陈英兰林丽英
- 关键词：异烟肼结核分支杆菌AS-PCR
