冷彦
- 作品数：32 被引量：119H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 槐耳颗粒在体外对结肠癌SW480细胞侵袭转移的影响被引量：5
- 2015年
- 目的观察槐耳颗粒在体外对结肠癌SW480细胞侵袭转移的影响,并初步探讨其机制。方法 Sub G1法确定槐耳颗粒促进结肠癌SW480细胞凋亡的最佳作用浓度和时间,通过划痕愈合实验和Transwell侵袭实验观察槐耳颗粒对结肠癌SW480细胞侵袭转移的影响。Western blot法和Real-Time PCR(荧光定量PCR)法检测E-cadherin、twist、snail、vimentin在蛋白和mRNA水平的变化。结果槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后凋亡最明显。槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后,划痕愈合实验相对迁移率为(31.36±2.39)%,而对照组36 h后相对迁移率则为(61.11±1.09)%(P<0.01)。Transwell侵袭实验证实槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后每个视野穿透细胞数为(129±12)个,而对照组为(354±20)个(P<0.01)。槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后E-cadherin在蛋白和mRNA水平表达均升高,而twist、snail和vimentin表达均降低。结论槐耳颗粒在体外能够通过抑制上皮-间质转化有效抑制结肠癌SW480细胞的侵袭转移。
- 姜建武李小兰冷彦陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：槐耳颗粒上皮-间质转化
- 紫外线诱导的Molt-4细胞旁观者效应的研究被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨紫外线诱导的凋亡细胞是否具有旁观者效应。方法 将Molt=4细胞分为阴性对照组、DID对照组、空白对照组和细胞密度分别为2×10^5／ml和8×10^5／ml的两个实验组。每个实验组细胞被平分为两部分：一部分作为效应细胞，被标记示踪剂DID染料并予以UV照射40s；另一部分作为旁观者细胞，不经任何特殊处理。细胞联合培养共24h，每4h收获1次。运用Annexin V—FITC／PI法检测旁观者细胞的细胞凋亡率，激光共聚焦显微镜检测旁观者细胞的形态学变化。结果 阴性对照组、DID对照组和空白对照组在0、4、8、12、16、20和24h各个时间点细胞凋亡率均小于5％。2×10^5／ml实验组旁观者细胞凋亡率在0～24h分别为3．47％、4．58％、7．32％、10．41％、14．82％、19．37％和25．66％。8×10^5／ml实验组旁观者细胞凋亡率在相应时间点分别为3．76％、5．77％、10．17％、14．71％、18．92％、32．28％和38．90％。与对照组相比，实验组旁观者细胞凋亡率随时间的延长而明显升高，且旁观者细胞凋亡率随细胞密度增高而增加。对旁观者细胞进行激光共聚焦显微镜检测，发现一些经典的凋亡和坏死表现，如细胞染色体浓集、磷脂酰丝氨酸翻转、凋亡小体形成、细胞崩解等。结论 经紫外线照射的Molt-4细胞对旁观者细胞具有旁观者效应，且该效应与细胞密度相关。
- 黄丹杨长永陶德定冷彦胡俊波龚建平
- 关键词：旁观者效应紫外线细胞凋亡流式细胞术
- 野生型p53调控结肠癌细胞代谢转换的研究被引量：3
- 2015年
- 目的观察野生型p53基因在结肠癌细胞系中能量代谢转换中的作用。方法利用流式细胞学方法检测p53在结肠癌细胞系HCTl16中对荧光标记的葡萄糖类似物：2-N[7-硝基苯-2-乙二酸，34羟氨基]-2．脱氧葡萄糖（2-NBDG）摄取的影响，进一步采用Westernblot、实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）等方法检测其可能的下游调控关键酶三磷酸腺苷（ATP）柠檬酸裂解酶（ACLY）、糖酵解的关键酶葡糖糖6-磷酸脱氢酶（G6PD）、乳酸脱氢酶（LDHA）、醛缩酶（ALDOA）及M2型丙酮酸激酶（PKM2）的蛋白及转录水平的表达变化。结果比较于p53缺失型（KO）HCT116细胞，p53野生型（WT）的HCT116细胞对葡萄糖的摄取能力下降41％（P〈0．05）。进一步利用Westernblot法检测能量代谢关键基因进行蛋白水平的比较及半定量分析后发现，相对于p53KO的HCT116细胞，调控细胞脂质代谢关键酶ACLY下调0．3984（t=7．154，P〈0．025）、糖酵解的关键酶G6PD下调0．3578（t=10．99，P〈0．叭）、LDHA下调0．2227（t=7．182，P〈0．05），证明上述基因在p53wT细胞中表达受抑制，而另外两个糖酵解关键酶ALDOA及PKM2的表达则无明显变化（P〉0．05）。进一步检测mRNA水平后发现p53wT的HCT116细胞中ACLY基因下调6．61倍（t=43．18，P〈0．01）、G6PD基因下调6．75倍（t=85．90，P〈0．01）及LDHA基因下调0．99倍（t=32．42，P〈0．01），而ALDOA及PKM2则无明显变化（P〉0．05）。结论野生型p53作为抑癌基因参与肿瘤能量代谢的调控过程，其可能通过抑制多种关键酶发挥作用。
- 刘亮陈浩余超然陶德定冷彦胡俊波龚建平李小兰
- 关键词：结肠肿瘤P53能量代谢
- Ku80表达抑制细胞模型的建立及其功能检测被引量：3
- 2007年
- 目的 建立利用RNAi技术抑制Ku80表达的HeLa细胞模型，探讨Ku80在放射生物学方面的功能。方法构建靶向抑制Ku80的siRNA表达质粒，转染HeLa细胞，筛选稳定表达的转化克隆；Westernblotting检测Ku80表达变化；6MVX线照射6Gy后，流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期；克隆形成实验检测细胞SF2、D0等值。结果构建的质粒转染HeLa细胞获得3个稳定转染克隆，Westernblotting分析表明2个阳性克隆Ku80蛋白抑制率分别达到89．3％和96．4％；Ku80表达抑制细胞受x线照射后48及72h的凋亡率高于对照细胞（P〈0．05），但4株细胞的细胞周期变化无统计学意义（P〉0．05）；2个阳性克隆细胞株的D0和SF2值明显降低，在D10剂量时的增敏比分别为1．315和1．365。结论运用RNAi技术建立的Ku80表达抑制克隆细胞可以成为简单实用的细胞模型；Ku80-siRNA可以抑制Ku80的表达，从而促进HeLa细胞对X线的敏感性。
- 庄亮于世英黄晓园熊慧华熊华李小兰冷彦
- 关键词：KU80RNA干扰稳定转染细胞周期
- 非小细胞肺癌组织EGFR突变及其临床意义的研究被引量：6
- 2008年
- 目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)的突变,探讨突变特征及其在肺癌治疗中的意义。方法:收集46例手术切除肺癌组织及其癌旁组织,分别提取DNA,采用PCR法扩增编码EGFR基因的第18、19、20及21外显子片段,对扩增片段进行DNA测序及分析。结果:46例NSCLC中12例(26.1%)患者肺癌组织存在EGFR酪氨酸激酶结合域的体细胞突变;癌旁组织均未发现突变。12例突变中,9例(75.0%)19号外显子上发生缺失突变,3例(25.0%)21号外显子上发生替代突变。伴细支气管肺泡癌分化特征的肺腺癌突变率(7/9,77.8%)显著高于普通腺癌(5/23,21.7%)和鳞癌(0/12,0)的突变率,P<0.05;女性突变率(9/15,60%)显著高于男性(3/31,9.7%),P<0.05;不吸烟者突变率(9/20,45%)显著高于吸烟者(3/26,11.5%),差异均有统计学意义,P<0.05。结论:国内NSCLC患者存在EGFR突变,女性、非吸烟者及伴细支气管肺泡癌分化特征的肺腺癌提示突变的高发性。
- 李睿陈元冷彦
- 关键词：受体表皮生长因子突变喹唑啉类
- 宫颈癌细胞株和正常间质细胞株受X线照射后的辐射效应被引量：4
- 2007年
- 目的用宫颈癌、正常血管内皮和正常成纤维细胞株体外模拟宫颈癌实质和间质组织,研究其受到不同剂量放射线照射后的辐射效应。方法采用宫颈腺癌细胞株HeLa,宫颈鳞癌细胞株SiHa、C33A、Caski,人脐静脉内皮细胞株ECV304,及小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,分别用6MV的X线（300cGy/min）照射6和10Gy,24和48h后收集细胞,行PI染色,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化。结果细胞株受到照射后,C33A凋亡率最高,而SiHa凋亡率最低,其余细胞株（包括ECV304与NIH/3T3细胞）均介于两者之间;各宫颈癌细胞株及NIH/3T3照射10Gy后48h的凋亡率较6Gy稍高（P〉0.05）,而ECV304照射10Gy后48h的凋亡率（13.04%±1.08%）比照射6Gy（6.51%±0.61%）明显升高（P=0.001）;各细胞株受到不同剂量照射后,均表现出明显的G2/M期阻滞,且阻滞细胞百分比随照射剂量增加而增加;受到照射后一般在24-48hG2/M期阻滞细胞百分比最高。结论高剂量照射可以提高血管内皮细胞的凋亡率,并导致剂量依赖性的G2/M期阻滞,为预测宫颈癌的高剂量放疗提供理论依据。
- 庄亮于世英黄晓园李小兰熊华郑祖安冷彦
- 关键词：宫颈癌细胞照射G2/M期阻滞
- 克隆的丙型肝炎病毒NS2基因中发现数个N端终止突变序列
- 2001年
- 探讨丙型肝炎病毒 ( HCV)准种在 NS2区的基因结构特征。利用逆转录 -巢式 PCR从一份 HCV慢性携带者的阳性血清及一份急性丙肝患者的血清中获得 HCV NS2全长 c DNA,将其克隆于 T载体 ,各随机挑取 5个阳性克隆进行序列测定。结果显示在克隆到的 HCV NS2全长基因中 ,慢性携带者该区序列有一个于 HCV多聚蛋白第 83 5位氨基酸的位置出现终止信号 ,丙肝患者该区序列有三个于第 83 5位氨基酸的位置出现终止信号 ,一个小于第 887位氨基酸的位置出现终止信号。在克隆到的 HCV NS2基因中存在多个 N端终止突变序列 ,提示 NS2
- 冷彦陈秀珠叶嗣颖杜勇杜桂鑫王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒NS2基因结构
- 鱼藤素对结肠癌Lovo细胞上皮-间充质转化及侵袭的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察探讨鱼藤素对结肠癌Lovo细胞上皮-间充质转化（EMT）以及侵袭能力的影响。方法分别用Westernblot法和实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）法检测鱼藤素对E-钙黏蛋白（E—cadherin）、Twist、Snail、波形蛋白（Vimentin）在蛋白和mRNA水平表达的影响；划痕实验和Transwell侵袭实验检测鱼藤素对Lovo细胞侵袭能力的影响。结果1μmol／L鱼藤素作用于结肠癌Lovo细胞0、24、48h后，蛋白水平Twist的相对表达量分别为1．40±0．07、0．41±0．07和0．30±0．03；Snail的相对相对表达量分别为1．04±0．11、0．16±0．04和0．23±0．02；Vimentin的相对表达量分别为4．31±0．30、1．30±0．27和1．21±0．21；E—cadherin的相对表达量分别为2．62±0．33、3．96±0．27和6．89±0．16。mRNA水平Twist的相对表达量分别为0．63±0．09和0．50±0．06；Snail的相对表达量分别为0．46±0．06和0．51±0．19；Vimentin的相对表达量分别为0．76±0．05和0．57±0．04；E—cadherin的相对表达量分别为1．88±0．27和2．29±0．60。1μmol／L鱼藤素作用于结肠癌Lovo细胞24、48h后，相对迁移率分别为（20．23±5．16）％和（27．94±6．66）％，而无鱼藤素的对照组24、48h后相对迁移率则分别为（45．65±4．41）％和（66．14±3．31）％（P〈0．01）。Transwell侵袭实验证实鱼藤素组每个视野穿透细胞数为（130．3±16．19）个，而对照组为（459．0±14．19）个（P〈0．01）。结论鱼藤素能够有效抑制结肠癌Lovo细胞的EMT及侵袭。
- 姜建武李小兰冷彦陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：鱼藤素结肠癌上皮-间充质转化
- 新鲜肿瘤标本活细胞与固定细胞的DNA含量分析比较被引量：11
- 2001年
- 目的:建立一种以新鲜细胞进行临床肿瘤DNA含量分析的方法。方法:血液肿瘤取肝素抗凝外固血或骨髓样本,用淋巴细胞分层液分离纯化单个核细胞;实体瘤组织则用机械法制成单细胞悬液。将细胞分成两份,一份酒精固定过夜,流式细胞术常规方法测定DNA含量,另一份直接用PIPESpiperazineNNbis2ethanesulfonicaciddisodiumsalt缓冲液配制的碘化丙锭(propidiumiodidePI)染色,以流式细胞术进行DNA含量测定,并与同期固定细胞的DNA含量检测结果进行比较。结果:同类型的肿瘤细胞,其固定前后G0/G1期细胞峰的变异系数(coefficientofvariationCV)没有明显差异(t检验,P>0.05)。重复实验结果显示,新鲜细胞DNA含量分析结果稳定。结论:用PIPES缓冲液配制的PI染液染色新鲜细胞,可以对临床肿瘤的细胞增殖状况和DNA倍性进行分析。
- 陶德定冷彦覃吉超余源龚建平
- 关键词：流式细胞术肿瘤DNA含量
- 丙型肝炎病毒准种在NS2区的变异状况初探被引量：1
- 2001年
- 探讨HCV准种在NS2区的基因结构特征及变异状况。利用逆转录 巢式PCR从 1份HCV慢性携带者的阳性血清及 1份丙肝患者的血清中获得HCVNS2全长cDNA ,将其克隆于T载体 ,各随机挑取 5个阳性克隆进行序列测定。结果显示克隆到HCVNS2全长基因 ,所测克隆在核苷酸水平和氨基酸水平互不相同。该慢性携带者HCVNS2区序列以完整读码框架 (ORF)为主 ,一个于HCV多聚蛋白第 835位氨基酸的位置出现终止信号 ,而该丙型肝炎患者以NS2N端发现终止信号的序列为主 ,其中三个于第 835位氨基酸的位置出现终止信号 ,一个于第 887位氨基酸的位置出现终止信号 ,仅一个克隆的序列为完整ORF。对ORF完整的序列进行比较 ,发现丙型肝炎患者氨基酸变异主要集中于N端 ,蛋白二级结构模拟显示丙肝患者NS2与慢性携带者的优势二级结构类似。研究表明从我们选择的两例感染者的HCVNS2序列看 ,不同临床类型的HCV病人体内的HCV准种在NS2区存在差异 ,这种差异可能与病毒存在于机体的状态有一定的一致性。
- 冷彦陈秀珠杜勇毛春生杜桂鑫王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒准种
