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紫外光谱法实时测定腈水合酶的催化动力学被引量：2: 2005年; 采用紫外光谱法研究了腈水合酶催化丙烯腈水合的过程,在不同丙烯腈初始浓度下,测定了催化过程中275 nm紫外吸光度的变化,计算出丙烯酰胺的生成速率.用M ichaelis-M enten方程对不同丙烯腈浓度下的Nocardiasp.腈水合酶催化速率进行了拟合,得到该酶以丙烯腈为底物的米氏常数(Km)为8.46 mmol/L,单位质量腈水合酶的催化速率常数(kcat)为2 398μmol/(m in.mg).; 刘铭高毅曹竹安; 关键词：腈水合酶紫外光谱催化动力学 NOCARDIA

Nocardia sp.RS合成腈水合酶过程及其高酶活的表达工艺被引量：11: 2003年; 对Nocardia sp. RS合成腈水合酶的过程进行了分析,研究了菌体生长和酶活表达的相互关系、pH调控和葡萄糖消耗对产酶速率的影响. 根据腈水合酶在发酵过程中的生成特性,设计开发了葡萄糖-Co2+耦合补加工艺优化产酶过程,通过对产酶过程的优化,大大提高了腈水合酶的发酵水平,酶活达到了10195 U/ml,比优化前提高了43.2倍.; 刘铭李春高毅王娅娜曹竹安; 关键词：腈水合酶丙烯酰胺发酵酶活

极端条件驯化法提高腈水合酶产生菌的丙烯酰胺耐受性被引量：5: 2004年; 为了提高产腈水合酶的菌体Nocardia sp.对催化产物丙烯酰胺的耐受性,利用极端条件改造了现有的丙烯酰胺生产菌株RS,通过向发酵液间歇加入丙烯腈催化生成丙烯酰胺,为菌体制造出一个极端环境,使菌体在生长催化过程中逐渐适应高浓度丙烯酰胺,强化其丙烯酰胺耐受性,驯化得到了RS-1菌株.研究了驯化过程中菌体存活率、比死亡速率和腈水合酶活性随丙烯酰胺浓度的变化.在不同的丙烯酰胺初始浓度(0～400g/L)下比较了两菌株的丙烯酰胺耐受性,RS-1菌体催化丙烯腈水合的速率都大于RS菌体,平均提高30.8%;而且RS-1菌株的胞内腈水合酶也具有较好的丙烯酰胺耐受性.在相同的水合条件下,RS-1菌株催化所得的丙烯酰胺终浓度和丙烯腈转化率分别为587.1g/L和99.97%,都明显优于RS菌株的水合结果.在进一步的水合实验中,RS-1菌株催化所得的丙烯酰胺终浓度达到了641.4g/L.; 刘铭李春黄晔高毅曹竹安; 关键词：腈水合酶

腈水合酶催化条件优化及丙烯酰胺生产菌的适应性改造: ＜正＞生物法生产丙烯酰胺是工业生物催化技术成功用于生产大宗化学品的典型范例,改进和优化腈水合酶催化丙烯腈水合工艺,提高腈水合酶对于丙烯酰胺的耐受性及产品终浓度是改进生物法生产丙烯酰胺工艺的研究重点。本文以丙烯酰胺生产菌...; 刘铭高毅李春曹竹安; 文献传递

纳滤分离提取谷氨酰胺过程的研究被引量：6: 2003年; 对发酵液中的谷氨酰胺提取进行了采用纳滤膜分离技术的尝试,并对谷氨酰胺和谷氨酸混合溶液的纳滤分离进行了理论分析。研究了不同pH条件下发酵液中谷氨酰胺和谷氨酸在纳滤过程中的透过特性,并考察了纳滤过程中氨基酸的透过特性随压力和浓度的变化。结果表明:当发酵液pH=7,谷氨酰胺浓度为1%时,纳滤膜分离谷氨酰胺的提取总收率可达到65%以上。; 李书良李春高毅王晓琳曹竹安; 关键词：纳滤膜分离氨基酸谷氨酰胺发酵液

生物法生产丙烯酰胺过程中腈水合酶的抑制和失活被引量：7: 2005年; 为改进生物法生产丙烯酰胺工艺,研究了腈水合酶催化丙烯腈水合生产丙烯酰胺过程中影响腈水合酶反应速率和酶失活的因素. 实验证明,水合过程中体系pH值的变化基本不影响酶反应速率;底物丙烯腈的浓度低于10 g/L时,酶反应速率与底物浓度成正比,大于75 g/L后,对酶有抑制作用;产物丙烯酰胺显著抑制腈水合酶的活性;菌体细胞内可能存在可以稳定腈水合酶的物质,胞内的腈水合酶在40℃下的半衰期可以达到59.9 h;丙烯酰胺与温度的协同作用是腈水合酶失活的重要原因.; 高毅刘铭曹竹安; 关键词：丙烯酰胺腈水合酶失活

Nocardia sp.高丙烯酰胺耐受性菌株及水合结晶工艺被引量：4: 2004年; 在极端条件下改造了现有的丙烯酰胺生产菌株Nocardiasp .RS ,通过向发酵液中间歇加入丙烯腈催化生成丙烯酰胺而形成极端环境 ,将菌体生长、酶催化和菌种筛选这 3个过程耦合在一起 .研究了极端条件下菌体存活率、腈水合酶活性随丙烯酰胺浓度的变化 .驯化得到的RS 1菌株有很好的丙烯酰胺耐受性 ,摇瓶水合的丙烯酰胺终浓度达到了 5 87g·L-1 ,比RS菌株提高 30 6 %.利用RS 1菌株在小型反应器规模上实现了高浓度丙烯酰胺的制备 ,累积浓度达到了 5 35 g·L-1 ,不需浓缩即可满足市场对丙烯酰胺水溶液产品的浓度要求 .在此基础上 ,设计了水合结晶改进工艺 ,预计可比现有工艺降低浓缩能耗 32 8%.; 刘铭李春高毅黄晔曹竹安; 关键词：腈水合酶水合 NOCARDIA

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高毅