高宜峰
- 作品数：7 被引量：25H指数：4
- 供职机构：甘肃农业大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 人参果PVM病毒的克隆与鉴定被引量：1
- 2013年
- 通过对武威市凉州区人参果感病植株所表现出来的花叶、皱缩、植株矮小等症状观察,初步判断可能感染了马铃薯M病毒(PVM)。结合分子生物学手段,提取感病人参果叶片总RNA,采用RT-PCR方法扩增到一段长300 bp的基因序列,连接至PMD19-T载体并测序。测序结果同GeneBank中PVM CP基因序列[GI:361071296]同源性达到了98.97%,说明成功克隆到了PVM基因片段,即供试人参果确实感染了PVM病毒。
- 张菲菲张金文高宜峰姚攀锋
- 关键词：人参果克隆
- 罂粟COR和BBE基因RNAi载体构建及烟草转化被引量：4
- 2013年
- 本研究通过RNAi技术,使用发卡RNA结构沉默罂粟可待因酮还原酶(COR)与小檗碱桥酶(BBE)基因的表达。采用RT-PCR技术克隆得到COR和BBE基因全序列,同源性比较结果显示,它们与GenBank中已报道的COR和BBE基因高度同源;按照RNAi设计原则,筛选出了COR和BBE基因靶标序列,并采用重叠PCR法将其拼接成643 bp的融合基因,以中间载体pHANNIBAL和植物表达载体pCEPSPS为基础,构建ihpRNA植物表达载体,用农杆菌介导法将目的基因转入烟草中,共获得转基因植株78株,通过PCR检测从中筛选出了17株阳性植株,可初步确定目的基因已经整合到烟草基因组中。
- 陆艳梅张金文魏玉洁魏贵民张艳红高宜峰
- 关键词：罂粟RNAI
- 马铃薯Sgt1基因启动子的结构及功能分析被引量：10
- 2013年
- 糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloids,SGAs)是一类存在于茄科和某些百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶半乳糖基转移酶(solanidine galactosyltransferases,SGT1)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.研究采用染色体步移技术(Genome walking),首次克隆到马铃薯Sgt1基因起始密码子上游2 183 bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC759163).构建该启动子驱动融合报告基因gfp::gus的植物双元表达载体p1304Sgt1p,转化野生型烟草获得Sgt1p::gfp::gus转基因植株,通过GUS组织化学染色分析Sgt1p::gfp::gus转基因植株中Sgt1p启动子的活性.结果表明,gus基因在转基因烟草的根、茎和叶中均表达,在叶中Sgt1p启动子的活性低于CaMV35S启动子,而在根和茎中二者基本相同;光诱导结果显示,光照处理明显增强了Sgt1p::gfp::gus转基因烟草叶片中Sgt1p启动子的活性,表明庄薯3号马铃薯Sgt1p启动子是一种光诱导型启动子.
- 魏桂民张金文王蒂张俊莲陆艳梅高宜峰
- 关键词：马铃薯启动子报告基因
- 马铃薯sgt2基因启动子的克隆及其活性分析被引量：4
- 2014年
- 糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.本研究采用染色体步移技术,克隆到马铃薯茄啶葡糖基转移酶基因(sgt2)起始密码子上游2 098bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC331038).构建该启动子驱动报告基因gfp∶∶gus的植物双元表达载体p1304sgt2p,采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达,通过GUS组织化学染色分析sgt2p启动子的活性.结果表明:gus基因在转化烟草叶片中高效表达,克隆的启动子具有活性.
- 魏桂民张金文王蒂张俊莲陆艳梅高宜峰
- 关键词：马铃薯糖苷生物碱启动子克隆
- TMV、PVM和CMV干扰载体构建及对人参果遗传转化被引量：7
- 2014年
- 人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物,连年种植易造成多种病毒病积累。为了寻求一种能同时抵御多种病毒病的方法,本试验以危害人参果的3种主要病毒为研究对象,根据GenBank中烟草花叶病毒(TMV)P126基因、马铃薯M病毒(PVM)CP基因和黄瓜花叶病毒(CMV)2b蛋白基因序列,利用E-RNAi网站提供的分析软件,筛选出含有较多有效小干扰RNA[siRNA,19 nt]的长dsRNA(Long dsRNA)片段作为RNAi的靶序列。用重叠延伸PCR方法将三个靶标片段融合在一起,构建了一种具有内含子(intro)的反向重复结构和嵌合基因的植物RNAi表达载体pCEIHFR。将pCEIHFR通过冻融法导入农杆菌LBA4404并转化人参果,经过草甘膦筛选和PCR检测,确认其中的24株为转基因阳性植株。
- 高宜峰张菲菲张金文陆艳梅魏桂民马廷蕊
- 关键词：烟草花叶病毒黄瓜花叶病毒
- 用融合基因dsRNA获得抗病毒人参果种质资源的研究
- 张金文张菲菲石菁张晶晶彭治云高宜峰王克婧
- 对武威市节能日光温室栽培的人参果病害进行了调查，利用酶联免疫及PCR技术，确定了为害当地人参果生产的主要病毒性病害是烟草花叶病毒（TMV）、马铃薯M病毒（PVM）以及黄瓜花叶病毒（CMV）。以这三种病毒为研究对象，采用R...
- 关键词：
- 关键词：人参果种质资源抗病毒融合基因日光温室栽培
- TMV、PVM和CMV干扰载体构建及对人参果的遗传转化
- 人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物，连年种植容易造成多种病毒病积累。为了培育同时抵御多种病毒病的人参果转基因植株，本试验以危害人参果的主要病毒烟草花叶病毒（TMV）、马铃薯M病毒和黄瓜花叶病毒（CMV）为对象，筛...
- 高宜峰
- 关键词：烟草花叶病毒黄瓜花叶病毒
- 文献传递
