马海彬 作品数:13 被引量:32 H指数:4 供职机构: 军事医学科学院军事兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 吉林省科技发展计划基金 吉林省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价 被引量:2 2016年 目的评价欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18猪体免疫效果。方法用鉴定正确的重组腺病毒进行猪免疫试验,通过淋巴细胞亚群检测、细胞因子检测和免疫组化检测分析其免疫效果。结果猪淋巴细胞亚群检测显示重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18刺激CD4+和CD8+表达量在21d、35d、49d分别为PBS组的1.53、1.84、1.90倍和1.41、1.76、1.53倍,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18免疫猪血清IL-4和IFN-γ水平在14d时的表达量分别是PBS组的1.45和1.46倍(P<0.05),而在35d时分别是PBS组的1.81和1.79倍(P<0.05)。免疫组化检测免疫猪肺、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴组织病毒量相对于野毒组和PBS组显著减少。结论重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18疫苗,具有良好的免疫原性,能提高猪细胞免疫和体液免疫水平。 解长占 曹亮 孙文超 张萍 韩继成 郭海宁 肖朋朋 温树波 崔卓栋 南福龙 马海彬 赵冠宇 张赫 庄忻雨 张金勇 鲁会军 金宁一关键词:重组腺病毒疫苗 欧洲型PRRSV重组痘苗病毒候选疫苗猪体免疫效果研究 被引量:3 2015年 目的通过猪体免疫试验,评价欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗的免疫效果。方法分别用重组痘苗病毒rVV-EU-ORF3-ORF5和灭活rVV-EU-ORF3-ORF5进行猪体免疫试验,通过检测猪血清特异性抗体中和抗体检测及T淋巴细胞增殖试验分析免疫效果。实验设E3L-VTT野毒免疫组和PBS组作对照。结果免疫后35d,欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗免疫组和rVV-EU-ORF3-ORF5免疫组GP3、GP5特异抗体水平均达峰值(A值0.51~0.56),两组间比较差异无统计学意义(tGP3=1.805,tGP5=0.7998,P〉0.05),但均高于E3L-VTT野毒免疫组(A值0.33~0.43),差异显著(tGP3=5.518,tGP5=3.346,P〈0.01);猪血清中和抗体重组痘苗病毒灭活疫苗组与重组痘苗病毒疫苗组均与免疫后35d达峰值水平(分别为16.38和18.88),且两组间比较差异无统计学意义(t=0.7005,P〉0.05);T淋巴细胞增殖试验的SI值两疫苗组差异无统计学意义(t=0.2536,P〉0.05),但均高于E3L-VTT野毒免疫组(t值分比为6.414和7.222,P〈0.01)。结论欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗能诱导猪体产生体液和细胞免疫应答,可为欧洲型PRRSV的新型疫苗的研制提供参考。 韩继成 靖杰 肖朋朋 曹亮 李一权 郭海宁 马海彬 张萍 鲁会军 金宁一关键词:免疫研究 转瓶培养与生物反应器微载体培养重组腺病毒的比较 被引量:5 2016年 目的分别用3L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养人胚胎肾细胞(HEK-293细胞)并接种H3型流感重组腺病毒,比较两种方法培养细胞及重组腺病毒的效果。方法分别用3L转瓶和7L生物反应器培养HEK-293细胞。转瓶每24h取样,生物反应器每12h取样,记录细胞总数。待细胞长满表面85%~90%时接种流感重组腺病毒,完全病变后收取病毒液并测定病毒滴度。结果转瓶培养HEK-293细胞3d,细胞增殖增加1.85~2.45倍,为(3.71~4.90)×107个[(2.95~3.90)×104 cells/cm2],生物反应器培养3d,细胞增长4.72~5.00倍,为(132.15~140.09)×107个[(24.88~28.72)×104cells/cm2]。转瓶培养重组腺病毒滴度为6.85TCID50/ml,生物反应器微载体系统培养腺病毒滴度为7.200TCID50/ml。结论生物反应器微载体系统培养流感重组腺病毒数量和滴度均高于转瓶培养,不但提高了疫苗的产量,还减少了细胞分泌物的残留,增强了疫苗接种的安全性。 郭海宁 张萍 韩继成 靖杰 曹亮 肖朋朋 解长占 李一权 马海彬 南福龙 崔卓栋 李霄 田明尧 鲁会军 金宁一关键词:转瓶 生物反应器 微载体 HEK-293细胞 重组腺病毒 牛支原体P81蛋白表达及纯化 引言牛支原体(mycoplasma bovis)是一种重要的引起牛呼吸道炎症、乳腺炎和关节炎等多系统炎症的致病性病原体。属于柔膜体纲,支原体目,支原体属,1961年Hale等在美国从患有乳腺炎的病牛中分离得到。随后证实该... 马海彬 靖杰 韩继成 孙文超 肖朋朋 朱羿龙 鲁会军 金宁一2013年广西分离株H9N2亚型禽流感病毒全基因组特性分析 被引量:4 2017年 目的对2013年从广西分离的H9N2亚型禽流感病毒进行全基因测序,并分析其基因组和遗传进化特性,为进一步研究H9N2禽流感病毒的致病机制提供科学依据。方法运用RT-PCR方法克隆广西分离株H9N2亚型禽流感病毒8个基因片段,进行全基因测序,对测序结果进行序列比对和遗传进化分析。结果序列比对分析表明,H9N2亚型分离株的HA序列裂解位点为RSSR↓GLF,受体结合位点为YWTNKLY且发生Q226G和G228R双重位点突变,NA耐药相关位点发生3处突变(E119V,R292W和R294G),M2蛋白跨膜区存在S31N变异;编码内部蛋白的6个基因与同年H7N9亚型分离株相似度为90.9%~97.6%。其分子遗传进化关系属于欧亚种系,其中HA基因属于Y280亚系,M基因属于G1亚系,PB2基因属于Korea亚系,PB1、PA、NA、NP和NS属于SH/F/98亚系。结论2013年广西分离株是由4种不同H9N2亚型禽流感病毒亚系发生自然重排的产物,属于低致病性禽流感病毒,但对抗流感药物存在一定耐药性,故应加强对禽农场中H9N2病毒流行株变异趋势和传播风险的监测。 柴丹 崔卓栋 郭焱 张萍 李金泽 郭丽娇 孙文超 朱弈龙 邸洋 李文杰 马海彬 解长占 尹逊哲 郑敏 田明尧 金宁一H3亚型流感重组腺病毒的纯化工艺研究 被引量:2 2016年 目的为了探索经济、高效的腺病毒的纯化工艺,采用阴离子交换层析和分子筛层析两步法对H3亚型流感重组腺病毒pacAd-H3-EHA-H1HA1new进行纯化,并评价纯化效果。方法利用7L生物反应器培养HEK-293细胞,用于对H3型流感重组腺病毒进行扩增;利用冻融的方法使病毒从细胞中释放,通过阴离子交换层析和分子筛层析法纯化病毒,用分光光度计检测纯化样品的纯度,并测定病毒的滴度和回收率。结果纯化后的样品经PCR鉴定正确,纯化前后的病毒滴度分别为5.6×10~9 TCID_(50)/ml和1.1×10^(10) TCID_(50)/ml,纯化后样品纯度(A260/A280值)分别为2.01和1.26,阴离子交换层析纯化的回收率为31.5%,分子筛层析纯化的回收率为81.4%,总回收率为25.6%。结论利用阴离子交换层析和分子筛层析两步法纯化H3亚型流感重组腺病毒的回收率和滴度高,该方法可用于重组腺病毒的纯化。 张萍 郭海宁 解长占 韩继成 孙文超 崔卓栋 南福龙 马海彬 温树波 肖朋朋 庄忻雨 张赫 张金勇 赵冠宇 鲁会军 金宁一关键词:重组腺病毒疫苗 纯化 欧洲型PRRSV、PCV2重组痘苗病毒疫苗灌注式生物反应器培养技术建立 引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),主要引起怀孕母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难。一般而言,PRRSV被分为2种主要... 韩继成 马海彬 郭海宁 靖杰 张萍 孙文超 解长占 南福龙 崔卓栋 鲁会军 金宁一丹东猪繁殖与呼吸综合征的流行病学调查 2014年 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前引起母猪繁殖和仔猪呼吸道疾病的重要病原之一,很难清除和净化。2012年12月,丹东市某猪场先后发生了以怀孕母猪流产、死胎,部分哺乳仔猪出现耳部发绀、神经症状甚至死亡为特征的疾病。该发病场PRRSV的RT-PCR检测,检出率为100%(5/5),确诊为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。 侯洪烈 高庆田 罗永成 姜凤华 马海彬关键词:流行病学调查 RT-PCR检测 哺乳仔猪 PRRSV 母猪流产 赛鸽源致病性多重耐药海豚葡萄球菌分离鉴定 被引量:2 2017年 为确定长春市某鸽舍赛鸽暴发眼炎、肺炎的原因,从赛鸽肺脏、眼部渗出物分离培养获得1株致病菌。经过形态学观察、生化特性与耐药性分析、Partial kat(Catalase)基因与16S rRNA基因序列分析,确定该菌为凝固酶阳性、β内酰胺酶阳性海豚葡萄球菌,具有多重耐药特性。该病菌对氨苄西林、青霉素G、复方磺胺恶唑、甲氧苄氨嘧啶、克林霉素、红霉素、达福普丁、环丙沙星、四环素均耐药,对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、头孢西丁、苯唑西林、替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺、莫匹罗星、利福平敏感。动物试验证实,该菌株可以引起幼鸽的肺炎和眼部炎症。 李博 高玮村 王习文 李乾学 马海彬 李志萍 夏志平关键词:赛鸽 多重耐药 犬细环病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:1 2017年 为建立犬细环病毒(TTCV)的快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的TTCV ORF7基因设计合成一对特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了检测TTCV的SYBR Green I荧光定量PCR方法。结果显示:建立的荧光定量PCR方法 Ct值与标准品模板在5.82×10~9拷贝/μL^5.82×10~3拷贝/μL范围内呈良好的线性关系。该检测方法仅对TTCV检测为阳性,而对狂犬病病毒、犬冠状病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬副流感病毒均无特异扩增;该检测方法灵敏度可达5.82×103拷贝/μL。对27份犬血清样品检测结果显示,建立的荧光定量PCR阳性检测率为11.11%,而普通PCR方法检测阳性率为3.7%。本实验建立了TTCV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,对TTCV诊断及致病机制的研究提供了高通量的定量检测方法。 解长占 孙文超 张萍 崔卓栋 赵冠宇 曹亮 南福龙 张金勇 马海彬 韩继承 柴丹 鲁会军 金宁一关键词:SYBR 荧光定量PCR