陈胜男
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 犬细小病毒巢式PCR诊断方法的建立及应用被引量：2
- 2012年
- 【目的】以期建立犬细小病毒巢式PCR诊断方法。【方法】根据基因库已发表的CPV VP2基因序列设计二对巢式引物,以临床上疑似CPV感染的犬粪样品中提取的总DNA作为模板,用巢式PCR方法扩增出CPV VP2基因的目的条带。【结果】扩增出的目的基因与国际标准序列的同源性为99.3%～100%。特异性试验发现该引物不能启动犬其它常见病毒基因的扩增。敏感性试验表明该引物能检测到10-9的CPV总RNA量。重复性试验显示该引物具有良好的稳定性。对采集的26份样品进行CPV巢式PCR检测,20份样品为阳性,阳性率为76.9%。【结论】建立的CPV的RT-PCR检测方法可于临床CPV的快速诊断和小规模的分子流行病学调查。
- 简子健马素贞陈胜男翟少华赵森
- 关键词：犬细小病毒巢式PCR
- 犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列，用Oligo6．0软件设计一对特异性引物，从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA，经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段，将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒，将其转入到大肠杆菌DH5a中，进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸，与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白，可被犬瘟热抗血清所识别，具有良好的抗原性。
- 申卫红马素贞陈胜男刘腾飞陶玉成简子健
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因克隆原核表达抗原性
- 犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析被引量：1
- 2010年
- 根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。
- 陈胜男马素贞陶玉成申卫红刘腾飞简子健
- 关键词：犬细小病毒VP2基因克隆原核表达反应原性
- 犬细小病毒VP2基因的克隆、表达及其重组蛋白的抗原性研究
- 犬细小病毒感染是由犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）引起的一种高度接触性传染病。其传播速度快，发病率和死亡率高，对家犬、经济动物及野生动物危害很大。目前，该病尚无有效的治疗方法。对其防治主要以弱毒疫...
- 陈胜男
- 关键词：犬细小病毒VP2基因原核表达免疫活性
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建被引量：5
- 2010年
- 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。
- 陶玉成马素贞陈胜男刘腾飞申卫红简子健
- 关键词：犬传染性肝炎克隆原核表达质粒
- 犬副流感病毒NP基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2010年
- 以犬副流感病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法,连接pMD18-T载体获取NP蛋白编码基因核苷酸序列,并应用定向克隆技术,构建原核表达载体pGEX-6P-1-NP。经测序鉴定证实获取的NP蛋白核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在两处碱基变异,导致编码的蛋白质出现一个氨基酸的变异。测序结果表明,克隆出的目的基因序列已定向克隆到pGEX-6P-1载体,成功构建了其原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。Westen-Blotting分析结果显示,表达的GST-pGEX-6P-1-NP重组融合蛋白为82.1 kDa,可被犬副流感阳性血清所识别,表明NP基因所编码的蛋白具有一定的免疫活性。
- 刘腾飞马素贞申卫红陶玉成陈胜男简子健
- 关键词：犬副流感病毒NP蛋白RT-PCR原核表达免疫活性
- 犬细小病毒VP2基因原核表达条件优化与蛋白纯化被引量：3
- 2011年
- 为了提高犬细小病毒VP2基因在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中的表达量,通过改变诱导温度、诱导时间及诱导剂浓度等条件对表达量产生影响,以SDS-PAGE电泳分析证明VP2基因蛋白表达的最佳条件,并通过Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱法纯化目的蛋白。结果表明,重组质粒E.coliBL21(DE3)在35℃,1.0 mmol/mL IPTG诱导6 h时条件下蛋白表达量最高。SDS-PAGE电泳检测的纯化目的蛋白约为90 kDa,与预计大小一致。VP2基因融合蛋白的优化表达和纯化为研究犬细小病毒亚单位疫苗奠定了基础。
- 陈胜男马素贞翟少伦简子健
- 关键词：犬细小病毒VP2基因融合蛋白
- 犬细小病毒VP2基因真核表达质粒的构建与瞬时表达
- 2011年
- 【目的】构建犬细小病毒(CPV)VP2基因真核表达质粒,为研究核酸疫苗奠定基础。【方法】根据CPVVP2基因序列设计特殊引物,采用PCR方法从疑似"犬细小病毒"的患犬粪便基因组中扩增VP2基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达VP2基因,8 h后取小白鼠肝脏提取总RNA,进行RT-PCR扩增。【结果】在病犬粪便基因组中扩增得到1 755 bp的VP2基因片段,并构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-VP2,从瞬时表达的小白鼠肝脏总RNA中可扩增到目的条带。【结论】成功构建了犬细小病毒VP2基因真核表达重组质粒,并在小白鼠体内进行了瞬时表达。
- 简子健马素贞陈胜男翟少华赵森
- 关键词：犬细小病毒VP2基因真核表达载体
