陈瑞花
- 作品数：13 被引量：43H指数：5
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 布鲁氏菌omp25基因缺失株的构建及对细胞自噬的影响
- 布鲁氏菌病是一种人畜共患的慢性传染病，动物感染该病后的表现为母畜的流产和公畜的睾丸炎，对人而言，感染该病后可引起人的波浪热，关节炎以及肌肉疼痛等。布鲁氏菌（Brucella）作为布鲁氏菌病的病原菌，其在宿主内的生存机制一...
- 陈瑞花
- 关键词：布鲁氏菌自噬
- 文献传递
- 布鲁氏菌omp25基因缺失株的构建及对细胞自噬的影响
- 布鲁氏菌病是一种危害严重的人兽共患传染病，在世界范围内有广泛流行，给人类健康和经济发展带来巨大损失。近年来，全国各地上报的患病牲畜数量有显著增加，患病的人数也有显著增多。因此，对布鲁氏菌的致病机制的研究是刻不容缓的。其宿...
- 陈瑞花李天森王震张辉盛金良王鹏雁柳建新陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌致病机制基因缺失细胞自噬
- 布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶对胚胎滋养层细胞的致炎作用被引量：5
- 2012年
- 【目的】本文研究布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)基因缺失株和PGM蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及其引起炎症反应时细胞因子的变化,探讨布鲁氏菌pgm基因的生物学功能。【方法】本文分别用布鲁氏菌pgm基因缺失株和纯化的PGM蛋白感染胚胎滋养层细胞,通过细胞形态学的观察和酶联免疫反应检测其对细胞的损伤作用以及细胞因子的变化。【结果】本实验获得了纯化的PGM蛋白,成功构建了pgm基因缺失株,采用该基因缺失株免疫小鼠后,采集血液分离血清,虎红平板实验和试管凝集实验结果显示为阴性;pgm缺失株和PGM蛋白感染HPT-8细胞均能诱发贴壁细胞脱落;而且pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞的能力较M5-90明显降低。pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于M5-90对照组,差异极显著(P<0.01),而细胞因子IL-10的分泌变化不明显,PGM蛋白感染HPT-8细胞时,其细胞因子LDH表达水平高于PBS对照组,差异极显著(P<0.01),而IL-6、IL-10和TNF-α的表达水平明显低于PBS对照组,差异显著(P<0.05)。【结论】本研究表明,PGM蛋白和pgm缺失株可致胚胎滋养层细胞损伤,且引发滋养层细胞细胞因子的表达变化,为进一步研究布鲁氏菌感染宿主细胞的分子机制奠定了基础。
- 王震张辉张艳郭飞张豫陈瑞花孟茹李志强张倩陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌
- 布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应子VceC功能的初步研究被引量：17
- 2011年
- 为研究布鲁氏菌(Brucella)Ⅳ型分泌系统效应子VceC的功能,本研究从羊种布鲁氏菌16M株基因组中克隆vceC基因片段,插入pEGFP-N1中,构建真核表达重组pEGFP-vceC。经脂质体转染HPT-8细胞,荧光显微镜观察、western blot鉴定目的蛋白在HPT-8细胞中表达情况,检测细胞凋亡、NO释放量及LDH活力。Western blot检测显示VceC在细胞中表达,转染pEGFP-vceC后的细胞凋亡、细胞上清液中NO释放量及LDH活力比对照组显著增加(p<0.05)。本研究初步表明VceC蛋白具有细胞毒性作用,为进一步研究VceC的功能奠定了基础。
- 张沾陈创夫张辉张艳张娜李臻陈瑞花张豫
- 关键词：羊种布鲁氏菌
- 布鲁氏菌外膜蛋白BP26细胞毒性作用的研究
- ：布鲁氏菌外膜蛋白BP26是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究采用bp26基因缺失株和BP26蛋白分别与胚胎滋养层细胞(HPT-8)作用,探讨布鲁氏菌bp26基因的生物学功能. 材料方法：从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆...
- 陈瑞花张辉唐利燕孟茹张豫王震李志强张俊波陈创夫
- 关键词：动物医学布鲁氏菌外膜蛋白细胞毒性
- 发酵牛初乳新产品研制被引量：3
- 2010年
- 以新鲜牛初乳和果蔬为主要原料,研制出发酵初乳果蔬型酸奶。本文以果蔬种类及添加量、菌种、白砂糖加入量为试验因子,进行了L9(34)的正交试验。结果表明:7%的苹果、适量的中粘菌种(新疆石河子市商品酸奶菌种)、3%白砂糖发酵的初乳果蔬酸奶可获得最佳口感。
- 马军德周长路郑炜孔令芳陈瑞花赵宗胜
- 关键词：牛初乳乳成分发酵果蔬酸奶
- 布鲁氏菌PGM蛋白对细胞炎症反应的影响
- 本文研究布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)基因缺失株和PGM蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及其引起炎症反应时细胞因子的变化，探讨布鲁氏菌pgm基因的生物学功能。本文分别用布鲁氏菌pgm基因缺失株和纯化的PG...
- 张辉王震张艳张豫陈瑞花孟茹张倩陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌细胞炎症
- 文献传递
- 布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶基因的原核表达与鉴定被引量：5
- 2013年
- 对布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)蛋白进行了表达与纯化,为研究该基因的功能提供了物质基础。首先利用PCR方法从羊种布鲁氏菌基因组DNA中PCR法扩增pgm基因,并将该基因亚克隆至pET-28a(+)载体中,转化入大肠杆菌(DE3),诱导表达融合蛋白;表达产物经Ni-NTA Agarose亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示:扩增了pgm的全基因,成功构建了布鲁氏菌pgm基因的原核表达载体pET-28a(+)-pgm,并且在大肠杆菌中进行了表达,经Western blot鉴定,该蛋白可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,且具有良好的免疫反应性。本研究为进一步研究布鲁氏菌pgm蛋白的生物学功能提供基础物质,也为进一步开发基因工程疫苗提供理论基础。
- 张豫张辉张艳陈瑞花王震桂丹孙志华陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌原核表达
- 布鲁氏菌外膜蛋白BP26细胞毒性作用的研究被引量：8
- 2012年
- 【目的】布鲁氏菌外膜蛋白BP26是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究采用bp26基因缺失株和BP26蛋白分别与胚胎滋养层细胞(HPT-8)作用,探讨布鲁氏菌bp26基因的生物学功能。【方法】采用Ni柱亲和层析法纯化BP26蛋白,overlap技术构建布鲁氏菌bp26基因缺失株,用BP26蛋白和bp26基因缺失株分别侵染HPT-8细胞,观察细胞形态变化,ELISA检测上清中的细胞因子。【结果】从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆出bp26基因并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中成功表达,获得纯化的BP26蛋白,经SDS-PAGE验证正确,Western-Blot鉴定具有免疫原性。将目的片段bp26基因的上下臂插入到自杀载体pGEM-7zf中,电转至布鲁氏菌疫苗株M5-90感受态细胞中,成功筛选出了具有遗传稳定性的bp26基因缺失株。用BP26蛋白与bp26基因缺失株分别侵染HPT-8层细胞,BP26蛋白使细胞变形且贴壁不牢,缺失株导致细胞大量脱落溶解,ELISA检测蛋白侵染HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于PBS对照组,差异极显著(P<0.01),而细胞因子IL-10的分泌下降。缺失株侵染HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α均高于M5-90对照组,LDH和IL-10均低于M5-90对照组,差异显著(P<0.05)。【结论】成功获得了布鲁氏菌BP26蛋白和M5-90Δbp26缺失株,BP26蛋白可以引起HPT-8细胞的炎性反应,有细胞毒性作用,bp26基因缺失株对HPT-8细胞有损伤作用,bp26基因在布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中起重要作用。
- 陈瑞花张辉唐利燕孟茹张豫王震李志强张俊波陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌细胞因子
- 布鲁氏菌WboA基因的原核表达与鉴定被引量：7
- 2011年
- 为了在大肠杆菌中表达布鲁氏菌的WboA蛋白,并对其进行纯化和鉴定,采用PCR方法扩增得到WboA基因DNA片段,将其克隆于pET-28a(+)载体中,构建重组表达载体pET-WboA,转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA Agarose亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及测序。结果显示:重组表达质粒pET-WboA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE、western blot分析鉴定,可见约45 ku的外源蛋白带,表明WboA基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的WboA蛋白。
- 张艳陈创夫张辉张沾陈瑞花张钰李志强张俊波
- 关键词：布鲁氏菌原核表达
