陈建飞
- 作品数：123 被引量：709H指数：14
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生电气工程更多>>
- 猪A群轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
- 2014年
- 为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,r VP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1F4)。MAb鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1型,轻链为κ链;细胞上清液及腹水效价分别为1∶12 800和1∶106。Western blot和间接免疫荧光结果显示该MAb能够与天然的VP6蛋白反应。应用肽扫描技术鉴定显示该MAb对应抗原表位核心序列为134DYIENWNLQNR144。该MAb的制备为进一步研究VP6蛋白功能和建立RV检测方法奠定基础。
- 韩斅陈建飞时洪艳张鑫石达迟延彬李长龙冯力
- 关键词：A群轮状病毒单克隆抗体抗原表位
- 猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三联活疫苗创制与应用
- 冯力时洪艳陈建飞佟有恩张鑫王牟平
- 生猪产业事关国计民生，是全面实现小康社会的重要支柱产业。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)感染是哺乳仔猪死亡的“第一杀手”，7日龄以内仔猪感染死亡率可高达100%,每年经...
- 关键词：
- 关键词：三联活疫苗鉴别诊断方法
- A群猪轮状病毒JS株vp7基因序列分析被引量：4
- 2007年
- 根据已发表的猪轮状病毒OSU毒株vp7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计一对特异引物,以猪轮状病毒JS毒株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1000 bp目的片段。将其进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,vp7基因全长1062 bp,含有一个981 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与已知的15个毒株vp7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,同源性分别为74.5%～78.5%和75.2%～83.1%,核苷酸系统发育进化树结果表明,JS毒株与轮状病毒G9型参考毒株ICB2185、O-1亲缘关系较近,分为一个群,表明JS毒株血清型为G9型。目前,我国尚未见猪及其它动物轮状病毒G9型流行株的报道。
- 高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力
- 关键词：猪轮状病毒VP7基因
- PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定被引量：18
- 2007年
- 以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1～2367bp)为靶基因,利用基于gⅢ表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化病毒制备的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白,对S1基因噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选,结果获得3个高亲和力的序列,分别命名为S1P1(248～280位氨基酸)、S1P2(442～499位氨基酸)和S1P3(697～742位氨基酸).ELISA和蛋白质印迹结果显示,S1P1、S1P2和S1P3短肽都能被兔抗PEDV多克隆血清识别,其中S1P3反应性最强.为了进一步揭示S1P1、S1P2和S1P3短肽的抗原性,制备了3个短肽GST融合蛋白和它们串连后GST融合蛋白的单因子血清,间接免疫荧光试验(IFA)结果证实,抗S1P2-GST、S1P3-GST和S1P123-GST融合蛋白的单因子血清能够识别Vero细胞培养物中天然的PEDV.
- 孙东波朗洪武时洪艳陈建飞崔晓辰王承宝佟有恩冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原表位噬菌体展示
- 猪急性腹泻综合征冠状病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：6
- 2021年
- 为建立快速、灵敏且特异的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)检测方法,本试验扩增SADS-CoV N基因保守区域将其克隆至pMD18-T载体。所构建的重组质粒pMD18-T-SADS-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立一种SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示,所建立方法在3.31×10^(1)~3.31×10^(7)拷贝·μL^(-1)模板量时,呈良好的线性关系,相关系数(R2)为0.997,斜率为-3.318。该方法特异性检测SADS-CoV;而猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测结果均为阴性。所构建的标准品检测灵敏度下限可以达到3.31×10^(1)拷贝·μL^(-1),组内和组间变异系数均小于1%,表明其具有良好的灵敏性和重复性。用该方法检测SADS-CoV感染IPI-2I和IPEC-J2细胞后不同时间点和不同接毒剂量的复制情况,结果显示,SADS-CoV感染细胞后2 h病毒含量较低,在12~36 h病毒含量迅速增长,36 h后增长速度减缓且病毒含量维持在较高水平。分别用0、0.1、1 MOI SADS-CoV感染细胞结果显示病毒的mRAN转录水平呈现剂量依赖性增加,当MOI为1时,IPI-2I和IPEC-J2细胞病毒含量分别为10^(6.7)、10^(5.3)拷贝·mL^(-1)。进一步利用所建立的方法对经口服攻毒SADS-CoV仔猪的临床样本进行检测,结果发现病毒在空肠回肠含量较高,表明病毒主要定殖于空肠和回肠。综上表明,本研究建立SYBR Green荧光定量PCR检测方法能灵敏特异地检测SADS-CoV,为SADS-CoV的诊断和病毒相关基础研究提供可靠的检测手段。
- 张记宇韩郁茹时洪艳陈建飞张鑫刘建波张燎原冯书风冯廷帅季朝阳石达冯力
- 关键词：N基因
- 抗猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定被引量：6
- 2014年
- 为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,经4次细胞克隆纯化后,获得两株稳定分泌抗重组TGEV N蛋白的MAb,命名为3D7和5E8。通过western blot和间接免疫荧光试验对MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明两株MAb均能够与TGEV全病毒反应并且特异性良好。利用合成的多肽对N蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 3D7识别的表位为241AGKGDVTRFYGARSSSANFG260;5E8为184NKKDDSVEQAVLAALKKLGV203。本研究制备了两株MAb并对其表位进行鉴定,为TGEV检测方法的建立和N蛋白功能的分析奠定了基础。
- 赵鑫张鑫时红艳陈建飞迟延彬韩斆李长龙刘宁胡桂学冯力
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体抗原表位
- 猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗株及其应用
- 本发明公开了猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗株及其应片。本发明弱毒疫苗株的微生物保藏号是：CCTCC－V200608。本发明弱毒疫苗株安全性好，对于猪流行性腹泻病毒具有良好的免疫保护率。本发明弱毒株可应用于可应用于制备成防治猪流...
- 冯力陈建飞时洪艳佟有恩孙东波
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒中国主要疫苗株的分子特性
- 本文介绍了疫苗株与我国现地IBV分离株基因之间的低核苷酸序列同源性和系统发育关系表明：我国现地IBV分离株与疫苗株之间的基因型不同，这可能是我国免疫鸡群中IB频繁发生的原因之一。
本文根据IBV疫苗株S1基因的...
- 陈建飞
- 关键词：传染性支气管炎支气管炎病毒疫苗株活疫苗
- 文献传递
- 圈养虎源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的调查被引量：8
- 2016年
- 采用K—B法检测30株虎源大肠杆菌对氯霉素类药物的耐药性。根据耐药表型和耐药基因的流行情况,指导临床合理用药。结果表明:30株虎源大肠杆菌对氯霉素的耐药率为85%,对氟苯尼考的耐药率为78%。cmlA基因的阳性率为70%,floR基因的阳性率为23.3%。
- 薛原王晓菲陈建飞
- 关键词：大肠杆菌氯霉素氟苯尼考
- 猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响被引量：5
- 2013年
- 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与宿主细胞相互作用,本研究根据前期已经鉴定的PEDV N蛋白核仁定位信号序列,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDV N基因(dN),并将其与真核表达载体pAc-GFP-C1连接,构建重组质粒pAc-GFP-dN。将pAc-GFP-dN转染于Vero E6细胞中,利用激光共聚焦显微镜分析重组质粒pAc-GFP-dN表达蛋白的定位情况,并利用流式细胞仪检测转染细胞的周期变化。实验结果表明:与完整的N蛋白相比,缺失核仁定位信号的N蛋白不能定位于细胞核仁,同时丧失了使宿主细胞周期在G2/M期停滞的能力,从而揭示了N蛋白核仁定位信号对宿主细胞具有重要的影响。
- 刘随新石达陈建飞张鑫时洪艳刘孝珍张莎王璐冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白流式细胞术
