郭风劲
- 作品数：87 被引量：212H指数：8
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- PBL互动式教学模式在留学生教学中的探索与实践被引量：31
- 2009年
- 结合留学生教学的现状、笔者在美国纽约大学的学习体会以及几年来的留学生教学经验,阐述了在留学生教学中开展PBL教学的必要性,进而提出了适合留学生教学的PBL教学具体方案。
- 郭风劲林建炜刘平
- 关键词：留学生教学PBL教学模式教学方法
- 靶向XBP1S的RNA干扰质粒对细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 构建靶向人XBP1S的siRNA真核表达载体（pSUPER-XBP1S）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.方法 设计并合成针对XBP1S基因的siRNA,退火成互补双链后克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒,并将其转染入HeLa细胞和HepG2细胞中.采用RT-PCR检测转染前后XBP1S在HeLa细胞和HepG2细胞中的转录,Western印迹检测转染前后XBP1S蛋白的表达;MTT法、细胞计数检测重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.结果 重组质粒能有效地抑制HeLa细胞和HepG2细胞中XBP1S基因的转录和表达;转染HeLa细胞和HepG2细胞后,细胞增殖抑制率及细胞增殖数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 成功构建了靶向人XBP1S的siRNA表达载体pSUPER-XBP1S,并且有效的抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中XBP1S的转录和表达,有效抑制了细胞的增殖能力.
- 林建炜刘平李祥柱赵文君郭风劲
- 关键词：SIRNA真核表达载体
- 转录因子XBP1S基因表达谱差异分析被引量：1
- 2010年
- 目的 应用基因表达谱芯片技术了解XBP1S在肝细胞中可能上调或下调的基因,了解其可能的调节功能线索.方法 构建pcDNA3.1（-）-XBP1S真核表达载体,转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1（-）处理相同细胞系作为对照.48 h后制备细胞裂解液,提取mRNA,应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析.结果 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行基因表达谱芯片技术分析.经过差异基因表达谱的筛选,发现HepG2细胞转染XBP1S以后,有38个基因表达水平显著上调,30个基因表达水平显著下调.结论 成功构建XBP1S的真核表达载体pcDNA3.1（-）-XBP1S,运用基因表达谱芯片技术成功筛选了XBP1S转染细胞后的差异表达基因,这些差异表达基因包括细胞周期、蛋白质的翻译合成及运输、能量代谢、体内免疫调节、细胞凋亡及细胞内的信号转导等方面起重要作用及肿瘤发生相关的基因,为进一步阐明XBP1S可能存在的调控机制及XBP1S蛋白可能的生物学功能提供理论依据.
- 郭风劲林建炜刘平李祥柱赵文君
- 关键词：转录因子基因芯片
- 人白介素24基因诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:研究人白介素24(hIL-24)在体外诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡及其作用机制.方法:①以脂质体包裹重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24转染Ca Ski细胞;②利用RT-PCR技术检测处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平变化;③Western Blot分析处理后Ca Ski细胞中抑癌蛋白P53水平的变化;④流式细胞仪分析处理后的Ca Ski细胞凋亡情况.结果:处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平下降,抑癌蛋白P53水平增加,细胞凋亡率升高.结论:真核表达载体介导的hIL-24基因体外转染宫颈癌Ca Ski细胞后,能抑制Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的表达,使抑癌蛋白P53恢复活性,促使宫颈癌Ca Ski细胞凋亡.
- 石华成海恩张溢郭风劲易发平马永平宋方洲
- 关键词：CAE6基因蛋白质P53细胞凋亡
- 中国汉族人内皮细胞型一氧化氮合酶基因多态性研究
- 2004年
- 目的 :探讨内皮细胞型一氧化氮合酶 (eNOS)基因 (CA)n二核苷酸重复序列基因多态性在中国汉族人群中的分布。方法 :应用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色 ,对 2 91名中国汉族人的eNOS基因 (CA)n多态性进行研究。结果 :eNOS基因 (CA)n存在 2 3种等位基因和 93种基因型 ,基因型分布符合Hardy -Weinberg平衡 (P >0 .0 5 )。PCR扩增片段长度范围为 14 4bp～ 188bp ,所含CA重复次数分别为 19～ 4 1,分布频率介于 0 .34%～ 14 .1%。该位点杂合度为 0 .85 ,多态信息量 (PIC)为 0 .83。中国人群与高加索人群差异显著的 11个等位基因分别为 (CA) 2 2 、(CA) 2 3 、(CA) 2 6、(CA) 2 7、(CA) 2 8、(CA) 3 0 、(CA) 3 1、(CA) 3 2 、(CA) 3 3 、(CA) 3 4 、(CA) 3 5,χ2 检验P均 <0 .0 5。结论 :该基因位点是 1个含有高度遗传信息的DNA标志 。
- 郭风劲彭惠民张政晏宁
- 关键词：基因多态性
- 人类XBP1基因5′上游DNA序列的转录激活功能分析(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding proteinⅠ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制。方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-1039~66bp、-859~66bp、-623~66bp、-351~66bp,-227~66bp、-227^-45bp,针对每一种缺失突变体构建相应的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltansferase,CAT)报告基因载体,再分别瞬时转染K562、HepG2、NIH-3T3和L02细胞,应用报告基因CAT瞬时表达系统,检测XBP1每一种缺失突变体在K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞中的活性差异,并进一步确定XBP1基因启动子的具体调节部位。结果成功获得XBP1基因启动子6种缺失突变体的正确克隆和6种相应的报告基因载体p1-XBP1p,p2-XBP1p,p3-XBP1p,p4-XBP1p,p5-XBP1p,p6-XBP1p,每一种报告基因转染K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞系后,p4-XBP1p和p5-XBP1p在K562、HepG2细胞中的转录活性均高于其它报告载体,p5-XBP1p在HepG2细胞中转录活性最高;而6种报告基因载体在NIH-3T3小鼠成纤维细胞中不具有转录活性。结论XBP1基因的转录激活能力在不同细胞中有所差异,其表达活性具有一定的细胞类型特异性,与细胞类型和细胞状态密切相关;XBP1基因启动子的-227~66bp区域是该启动子的核心部位,而且核心启动子区包括ATG翻译起始密码子的下游部位,这一部位是转录活性的重要部位,一旦缺失,XBP1基因启动子会丧失活性。
- 郭风劲成海恩易发平彭惠民宋方洲
- 关键词：启动子转录调控
- IRE1α重组腺病毒载体对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响被引量：5
- 2013年
- 目的构建重组人IRE1α腺病毒,观察其对软骨干细胞ATDC5增殖与凋亡的影响。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建包含全长IRE1α基因和RNase+Kinase核心结构域的重组穿梭质粒pAdTrack-IRE1α、pAdTrack-R+K,通过电转法分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-IRE1α、pAd-R+K。随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-IRE1α、Ad-R+K。用直接PCR法鉴定重组腺病毒,后者体外感染软骨干细胞ATDC5,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪分别检测在内质网应激(ERS)和非ERS状态时重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响。结果酶切鉴定和PCR证实成功构建了重组腺病毒质粒pAd-IRE1α、pAd-R+K。流式细胞仪检测结果显示,在ERS状态时,重组腺病毒质粒Ad-IRE1α、Ad-R+K感染后ATDC5细胞G1期比例明显降低,S期细胞比例明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论含IRE1α基因的重组腺病毒感染可促进ATDC5细胞的增殖和凋亡。
- 李祥柱张鹏韩晓凤李美玲夏飞郭风劲
- 关键词：腺病毒科细胞增殖细胞凋亡
- 内质网分子伴侣BiP缺失突变体的构建及生物信息学分析
- 免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP),又称GRP-78或HspA5,是位于内质网(ER)的重要分子伴侣,属于热休克蛋白(Hsp70)家族成员之一.BiP与许多内质网蛋白都有短暂的相互作用,是内质网维持内环境稳态的一个感应器,...
- 李祥柱赵文君刘平刘艳娜周菁华郭风劲
- 关键词：内质网分子伴侣BIP生物信息学重叠PCR
- ATF4重组慢病毒抑制C2C12细胞增殖并促凋亡被引量：1
- 2015年
- 目的构建人活性转录因子4(ATF4)慢病毒,探讨C2C12细胞成骨分化过程中ATF4基因慢病毒修饰对其增殖和凋亡的影响。方法构建ATF4重组慢病毒载体质粒,然后与2个包装质粒共转入293T细胞中包装成ATF4慢病毒(LV-ATF4);用病毒感染C2C12细胞,并用流式细胞仪(FCM)检测BMP2诱导C2C12细胞分化时对其增殖凋亡的影响,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达,电子显微镜观察凋亡细胞的形态学结构变化。结果成功构建和包装了ATF4重组慢病毒。FCM检测结果表明,BMP2+LV-ATF4处理组S期细胞(14.89%)低于BMP2+LV-GFP组(30.64%)(P<0.05);BMP2+LV-ATF4处理组细胞凋亡率(31.06%)高于BMP2+LV-GFP组(11.39%)(P<0.05);凋亡相关蛋白的表达与FCM结果一致。结论在BMP2诱导C2C12细胞成骨分化时,LV-ATF4慢病毒可促进C2C12细胞的凋亡,抑制其增殖。
- 夏飞伍志盟李美玲邓莉胡勤郭风劲
- 关键词：慢病毒成骨分化细胞增殖
- 丙型肝炎病毒核心蛋白上调诱导型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的研究
- 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子转录的激活作用。方法:利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp),聚合酶链反应(PCR)扩增iNOSp 的D...
- 郭风劲成军刘妍纪冬张黎颖王琳王巧侠宋方洲
- 文献传递
