邓贝
- 作品数：7 被引量：9H指数：1
- 供职机构：湖北工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划湖北省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学更多>>
- 毕赤酵母表达重组猪肾氨基酰化酶Ⅰ的纯化与鉴定被引量：1
- 2012年
- 运用毕赤氏酵母对猪源重组氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)进行了表达,并对其酶学参数进行了测定。构建毕赤氏酵母工程菌GS115-pacy1,通过甲醇诱导表达后,进行了Phenyl-Sepharose及Q-Sepharose两步色谱纯化;对纯化后重组pACY1的动力学参数进行测定。重组pACY1纯化后呈均一性,其纯度为98.6%;酶学参数测定结果表明,重组酶的比活力(Vmax)为280U/mg,米氏常数(Km)为0.91mM,接近天然酶对应的287U/mg和0.84mM;而酵母重组酶Tm值为74℃,高于天然酶的70℃。毕赤氏酵母表达重组pACY1的酶活性与天然酶相当,且其热稳定性优于天然酶。这为氨基酸拆分产业提供了更加优质而丰富的酶制剂。
- 刘志刚杨波胡征邓贝
- 关键词：毕赤氏酵母表达纯化热稳定性
- 香兰素微生物合成技术的应用研究被引量：6
- 2012年
- 根据国内外对香兰素微生物合成技术研究现状,从菌株来源、底物类型及回收工艺方面总结了不同的高产策略,为进一步提高香兰素产率和相关食用香料、苯环类化工原料的生物法合成研究提供参考。
- 镇达吴小刚邓贝徐晓陈茂彬
- 关键词：香兰素微生物合成高产
- 猪氨基酰化酶I与底物的分子对接及定点突变验证
- 2013年
- 氨基酰化酶Ⅰ特异性催化水解N-酰基-L-氨基酸生成L-氨基酸。本研究采用AUTODOCK3.05软件对猪氨基酰化酶Ⅰ与最适底物分子N-乙酰-L-甲硫氨酸进行了模拟对接,并运用定点突变对模拟结果进行验证,为探究此酶的催化机制提供理论依据。对接结果表明,底物结合于锌离子附近的二聚体结构域与催化域的界面上;底物与酶分子的Glu146和Arg348形成重要氢键;底物极性头部与Thr345发生了强烈的相互作用。定点突变后酶动力学参数测定结果与模拟对接结果相符。在结合中,氢键和亲水相互作用发挥了重要作用。
- 刘志刚邓贝成细瑶杨波胡征
- 关键词：分子对接定点突变
- 紫红链霉菌2917磷脂酶A_2在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达与复性被引量：1
- 2013年
- 通过化学合成紫红链霉菌2917分泌型磷脂酶A2全基因序列后插入融合表达载体pGEX-6P-1中,经酶切和测序鉴定无误后转化E.coli Rosetta(DE3)菌株,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得目的蛋白后对包涵体形式的重组蛋白进行稀释复性,同时对复性后的蛋白进行酶学研究.结果表明磷脂酶A2基因在大肠杆菌中获得了高效表达(占总细胞蛋白30%),复性后酶液酶活性为0.15U/mL。这将为包涵体的复性研究以及磷脂酶A2结构和功能的研究打下良好的基础。
- 杨波邓贝刘志刚陈威李维琳胡征
- 关键词：磷脂酶A2复性表达纯化
- 构建和评估猪氨基酰化酶Ⅰ的三维结构被引量：1
- 2013年
- 运用同源模建的方法构建了pACY1三维结构模型,并在能量最小化后对模型进行分子动力学模拟和结构合理性评估。同源模建生成了50个原始模型,经过PROCHECK评测后,筛选出模型A、B进行能量最小化,并得到模型A1、B1。分子动力学模拟结果表明模型B1二聚体结构较稳定。PROCHECK、ProSa以及WHATIF检测结果验证了模型B1属于合理性结构。得到的猪氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)的三维结构,为研究其结构与功能关系打下基础。
- 刘志刚邓贝杨波胡征
- 关键词：同源模建能量最小化分子动力学模拟
- 紫红链霉菌2917分泌型磷脂酶A2的原核表达、复性及酶学特性研究
- 磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是一类能水解磷脂甘油C-2酯键生成游离脂肪酸以及溶血磷脂的酶类，广泛存在于蛇毒，蜂毒，哺乳动物胰脏，植物组织以及以一些链霉菌属的微生物中，其在细胞磷脂消化，新陈代谢，信号转导以及宿主防御等...
- 邓贝
- 关键词：磷脂酶A2密码子优化包涵体复性
- 文献传递
- 黄曲霉尿酸氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达及纯化被引量：1
- 2012年
- 从黄曲霉(Aspergillus flavus)中钓取尿酸氧化酶(UOX)基因,并将该基因以正确的阅读框插入到载体pPIC9K,构建成pPIC9K-UOX重组分泌表达载体。用Sal I线性化处理重组表达载体,电击法转化毕赤酵母(GS115)感受态细胞,G418浓度梯增法筛选多拷贝阳性转化子。0.5%甲醇诱导后的上清经SDS-PAGE电泳检测,证明重组尿酸氧化酶成功分泌到培养基中;由阴离子层析柱纯化产物,目的蛋白纯度可达90%;体外活性测定具有分解尿酸的能力。毕赤酵母(GS115)成功分泌表达了黄曲霉尿酸氧化酶。
- 曾雨雷杨波刘志刚邓贝成细瑶徐雪荣杨康胡征
- 关键词：黄曲霉尿酸氧化酶毕赤酵母纯化
