谢朝阳
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 草莓镶脉病毒编码的P6蛋白是RNA沉默抑制子
- 基因沉默是植物依赖核酸序列特异性互作降解外源RNA来抵御病毒入侵的防御机制，许多植物病毒针对这种机制进化出一种反防御机制，编码不同的沉默抑制子来抑制基因沉默的发生.本研究系统鉴定了草莓镶脉病毒(SVBV)编码的P6蛋白功...
- 谢朝阳蒋磊江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒RNA沉默抑制子基因沉默
- 草莓镶脉病毒侵染性克隆的构建及其ORFVI基因的原核表达
- 草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandingvirus,SVBV)是一种严重危害草莓的潜隐性病毒,在全世界范围内广泛分布,目前,SVBV在我国河南、河北、吉林等省都有报道,给我国草莓生产造成严重损失。SVBV...
- 谢朝阳
- 关键词：草莓镶脉病毒侵染性克隆原核表达抗血清制备
- 文献传递
- 草莓镶脉病毒ORF Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备被引量：4
- 2013年
- 为了分析草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)ORFⅥ基因的功能,采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的ORFⅥ基因,将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上,获得重组质粒pET-SUMO-ORFⅥ。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导与Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为90 kD的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,采用间接ELISA和Western blot方法测定抗血清的效价、反应灵敏度以及ORFⅥ基因在本氏烟中的瞬时表达。结果显示,间接ELISA法测定抗血清对重组蛋白的效价达1∶256 000,Western blot法能够检测到稀释64 000倍的重组蛋白。利用稀释2000倍的抗血清,仍能够检测出SVBV中国分离物和美国分离物ORFⅥ基因在本氏烟中瞬时表达的蛋白。
- 江彤谢朝阳丁菲李祥宇贾琳
- 关键词：草莓镶脉病毒ORF原核表达抗血清
- 草莓镶脉病毒侵染性克隆的构建及其ORF Ⅵ基因的原核表达
- 草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus, SVBV）是一种严重危害草莓的潜隐性病毒，在全世界范围内广泛分布，目前，SVBV在我国河南、河北、吉林等省都有报道，给我国草莓生产造成严重损失。...
- 谢朝阳
- 关键词：草莓镶脉病毒侵染性克隆原核表达抗血清制备
- 文献传递
- 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。
- 蒋磊邓竹根谢朝阳杨友志李祥宇丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆原核表达
- 草莓镶脉病毒侵染性克隆的构建
- 2016年
- 利用草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)全长克隆pSVBV-E3构建SVBV侵染性克隆。pSVBV-E3经限制性内切酶酶切分别获得0.5-mer SVBV和1.0-mer SVBV,依次正向插入植物表达载体pBINPLUS,成功构建侵染性克隆重组质粒pBIN-1.5SVBV。pBIN-1.5SVBV转化农杆菌,分别接种森林草莓(Fragaria vesca)和4种烟草属植物(Nicotiana spp.)验证其侵染性。结果表明,SVBV侵染性克隆接种森林草莓8周后发病,表现出典型的叶脉镶边黄化症状,PCR法可以从显症森林草莓中检测出SVBV cp基因,Southern blot法可以检测出SVBV基因组。而接种4种烟草属植物8周后未观察到发病症状,PCR法也未检测出SVBV cp基因。构建的SVBV侵染性克隆经接种验证能够侵染森林草莓,为进一步研究SVBV侵染森林草莓的致病机制奠定了基础。
- 江彤张汉平谢朝阳陈静冯明峰
- 关键词：草莓镶脉病毒侵染性克隆
- 草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：4
- 2012年
- PCR扩增得到了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将SVBV cp基因克隆到原核表达载体pET-32a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.05 mmol·L-1的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,SVBV cp基因在大肠杆菌中得到了融合表达。利用Ni2+-NTA亲和树脂纯化重组融合蛋白,免疫家兔获得了重组蛋白的多抗血清。以此多抗血清建立了Dot-ELISA检测方法,结果表明,制备的特异性多抗血清可以快速检测出感病草莓样品中的SVBV。
- 江彤杨友志丁菲蒋磊李祥宇邓竹根谢朝阳宋培培
- 关键词：草莓镶脉病毒外壳蛋白原核表达
