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实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠体内Th17细胞检测的意义被引量：6: 2011年; 目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-17在实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thy-roiditis,EAT)小鼠体内的变化。方法:利用小鼠甲状腺球蛋白(Tg)建立小鼠EAT模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例。采用qRT-PCR检测小鼠脾脏细胞中IL-17 mRNA水平。结果:EAT小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例为(2.44±0.56)%,明显高于正常对照组小鼠(1.12±0.37)%(t=2.712,P<0.05);EAT小鼠脾脏细胞中IL-17 mRNA的含量也明显高于正常对照组(t=3.458,P<0.05)。结论:Th17细胞及其相关细胞因子IL-17 mRNA水平在EAT小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。; 马斌田洁刘艳刘青玲马洁汤新逸魏衍财吴彩云柳迎昭许化溪陈永昌王胜军; 关键词：TH17细胞 IL-17 实验性自身免疫性甲状腺炎

小鼠GITR真核表达载体的构建及表达: 2011年; 目的:构建小鼠GITR(mGITR)的真核表达载体,转染COS-7细胞表达小鼠GITR蛋白。方法:用TRIzol试剂抽提小鼠脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出GITR全长基因,构建真核重组载体pIRES2-EGFP-mGITR,经鉴定后采用脂质体介导DNA法转染COS-7细胞。结果:从小鼠脾细胞中成功扩增得到GITR全长基因。重组载体pIRES2-EGFP-mGITR转染COS-7细胞后,经荧光显微镜观察可见绿色荧光,提取蛋白后经蛋白质印迹鉴定有目的蛋白mGITR。结论:成功构建了小鼠GITR基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mGITR,转染COS-7细胞后mGITR蛋白获得成功表达。; 沈培郑东刘艳田洁赵银霞刘青玲朱晨露马洁苏兆亮马斌许化溪王胜军; 关键词：真核表达转染 COS-7细胞

滤泡调节性T细胞在肺癌移植瘤小鼠体内的变化及意义被引量：1: 2016年; 目的:研究滤泡调节性T细胞(follicular regulatory T cells,Tfr)在肺癌移植瘤小鼠体内的变化,并探讨肿瘤微环境对Tfr细胞的影响。方法:采用皮下注射Lewis肺癌细胞株的方式建立肺癌移植瘤小鼠模型,通过流式细胞术检测小鼠腹壁引流淋巴结和肿瘤组织中Tfr细胞以及CD4+CXCR5+T细胞的比例,分析Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值的变化。结果:肺癌移植瘤小鼠腹壁引流淋巴结中Tfr细胞的比例为(4.13±0.35)%,较正常对照组小鼠[(1.97±0.26)%]明显增加(t=4.985,P<0.01),并且Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值为0.39±0.03,较正常对照组小鼠(0.21±0.02)明显增加(t=5.148,P<0.01)。在肿瘤发展的第14天,肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织中Tfr细胞比例增加尤为显著,与第7天相比差异具有统计学意义(t=5.617,P<0.01)。结论:肺癌移植瘤小鼠体内Tfr细胞比例的增加以及Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值的失衡,预示着Tfr细胞可能参与小鼠肺癌移植瘤的发展进程。; 冯玎琦汤新逸张悦马洁田洁许化溪王胜军; 关键词：肺癌移植瘤

痤疮丙酸杆菌通过促进Th1细胞和Th17细胞的分化诱发肉芽肿形成被引量：4: 2015年; 目的研究痤疮丙酸杆菌(P.acnes)在树突状细胞成熟、辅助性T(Th)细胞亚群分化过程中的免疫刺激作用,进而探讨其诱发肉芽肿的可能机制。方法以P.acnes刺激小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC),流式细胞术检测其表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白细胞介素12(IL-12)、IL-6和IL-23的mRNA水平,ELISA检测上清中IL-12、IL-6和IL-23的蛋白浓度;P.acnes与BMDC、CD4^+T细胞共培养,流式细胞术检测Th1细胞、Th17细胞分化情况;小鼠尾静脉注射加热灭活的P.acnes,建立肝脏肉芽肿模型,并通过qRT-PCR检测肝脏组织中IL-17、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平。结果经P.acnes作用后,BMDC表面CD40、CD80、CD86和MHCⅡ分子的表达增强,上清中IL-12、IL-6和IL-23的水平增高,促进CD4^+T细胞向Th1细胞、Th17细胞分化;P.acnes诱导建立的肝脏肉芽肿中,IL-17和IFN-γ的mRNA表达增强。结论 P.acnes可通过活化BMDC,促进Th1细胞、Th17细胞的分化,进而导致炎性肉芽肿形成。; 葛丽艳田洁汤新逸耿丽娜杨珺许化溪王胜军仝佳; 关键词：痤疮丙酸杆菌肉芽肿辅助性T细胞

小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定被引量：1: 2010年; 目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒。TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达。结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL。Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白。结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础。; 马洁田洁刘艳刘青玲毛朝明焦志军许化溪王胜军; 关键词：重组腺病毒病毒滴度

实时荧光定量PCR检测人IL-9 mRNA方法的建立及应用被引量：1: 2010年; 目的：建立检测人白介素-9（interleukin-9，IL-9）mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quantitative PCR，qRT—PCR）方法。方法：分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear ceils，PB—MC），经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA。扩增产物与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT—PCR方法检测IL-9mRNA的表达水平。评价该方法的线性及特异性，应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA表达水平。结果：建立了人IL-9的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。该法的标准曲线相关系数r^2为0．995～0．998，熔解随线分析产物为单峰。Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）。结论：建立的检测人IL-9 mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好，为进一步临床应用提供了实验基础。; 杨先知史烨柳迎昭陈建国田洁刘艳刘青玲苏兆亮仝佳马斌马洁邵启祥许化溪王胜军; 关键词：白细胞介素-9 实时荧光定量PCR SYBR

胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞的检测及意义被引量：3: 2010年; 目的:研究Th17细胞及其相关细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在胶原诱导性关节炎(collagen-induced ar-thritis,CIA)小鼠体内的变化。方法:利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠CIA模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL-17的含量。结果:CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例分别为(3.19±0.70)%、(3.54±0.97)%,显著高于正常对照组的(0.95±0.34)%、(1.31±0.47)%,P<0.01。CIA小鼠血清中IL-17的含量也明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:Th17细胞及其分泌的细胞因子IL-17在CIA小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。; 史烨马洁苏兆亮杨先知马斌田洁刘艳刘青玲邵启祥许化溪吕力为王胜军; 关键词：TH17细胞白细胞介素-17 胶原诱导性关节炎

人TSHR289基因重组腺病毒的制备与鉴定: 2016年; 目的:制备腺病毒AdE-GFP-hTSHR289,并进行鉴定。方法:限制性内切酶NotⅠ和XhoⅠ双酶切分别处理p BluescriptⅡSK(+)-h TSHR289和pAdTrack-CMV,回收纯化目的片段hTSHR289,将其插入至线性化的pAdTrackCMV大片段中;限制性内切酶PmeⅠ线性化pAdTrack-hTSHR289与大肠埃希菌BJ5183中pAdEasy-1质粒同源重组,限制性内切酶PacⅠ酶切验证;将阳性重组质粒转染至人胚肾293A细胞,以包装获得表达hTSHR289的腺病毒AdEGFP-hTSHR289;TCID50法检测重组腺病毒滴度。结果:成功地将hTSHR289重组至腺病毒载体,获得携带hTSHR289重组腺病毒载体,包装出携带hTSHR289基因的腺病毒,滴度达3.5×109pfu/m L。结论:制备得到携带h TSHR289的重组腺病毒。; 周军马洁汤新逸田洁许化溪王胜军; 关键词：促甲状腺激素受体腺病毒病毒滴度

采用差速贴壁法培养动物及人细胞研究进展被引量：1: 2013年; 细胞培养是现代生物医学的重要技术之一,在细胞生物学、生物化学、临床检验学等领域应用较为广泛,成为阐释生命现象、发病机理和筛选药物的重要手段,已成为医药生物技术产业的重要部分之一[1]。差速贴壁法由Kreider和Pleasure等较早报道。该方法更加便于研究者简便探索细胞特别是胚胎干细胞诱导分化的机制，并有利于对结果进行精确、快速的检测。因此通过单层贴壁诱导途径进行细胞的培养、分化的研究报道越来越多。本文对近年来采用差速贴壁法培养动物及人细胞的文献进行综述如下。; 印文静颜海华冯亚松田洁王胜军; 关键词：差速贴壁法细胞培养

白细胞介素17体外抑制小鼠髓源抑制性细胞的凋亡被引量：2: 2017年; 目的:体外观察白细胞介素17(interleukin17,IL-17)对小鼠髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)凋亡的影响。方法:通过皮下注射Lewis细胞构建荷瘤小鼠模型,采用免疫磁珠分选技术(MACS)分离脾脏MDSCs,常规培养。经IL-17处理24 h后,采用流式细胞术检测MDSCs凋亡率;经IL-17处理6 h后通过蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2的表达。结果:IL-17处理组活细胞数量为(9.547±0.962 6)×10~4,明显高于对照组活细胞数[(4.123±0.259 8)×10~4,P<0.01];IL-17处理组活细胞比例为(59.55±2.831)%,明显高于对照组[(45.33±1.556)%,P<0.05];对照组晚期凋亡细胞比例为(22.87±1.349)%,明显高于IL-17处理组[(13.70±1.003)%,P<0.01]。蛋白质印迹检测结果显示,IL-17处理后的MDSCs抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显上调(P<0.05)。结论:IL-17体外可明显抑制MDSCs的凋亡。; 王娟田洁田新宇王运刚许化溪王胜军; 关键词：白细胞介素17 凋亡 BCL-2

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田洁

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