王红梅
- 作品数：5 被引量：22H指数：2
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
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- 利用动物耳皮肤组织培养成纤维细胞的研究被引量：17
- 2001年
- 对采集的动物耳部皮肤样品采用将组织块剪碎后直接贴附于细胞培养瓶底部培养的方法与酶消化法对动物体细胞进行原代培养 ,前者使得对不同品种绵羊、山羊、牛、北山羊的原代体细胞出现率及可传代率均达到 1 0 0 %。两种培养方法在成纤维细胞出现及可进行传代时间上有所差别。对于在体细胞传代培养中出现的上皮样细胞与成纤维样细胞混合生长的问题根据两者贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5%的胰酶—EDTA对其进行不同时间的消化 ,将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。纯化的体细胞经数次传代培养后进行冷冻—解冻后仍具有正常的传代能力。对不同代次绵羊和牛的体细胞进行的核型分析表明 ,在体外培养至 2 0～ 30代 (绵羊胎儿细胞培养至 45代 )
- 王红梅黄俊成刘明军王立虎计巧灵郭志勤
- 关键词：皮肤细胞系体外培养
- 绵羊体细胞核移植实验研究被引量：3
- 2001年
- 用成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代。将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MⅡ期去核卵母细胞中 ,重构胚经电融合与化学激活后 ,在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下进行体外培养 (IVC)。用细胞松驰素B法与离子霉素 +6-DMAP法在电融合后进行化学激活。重构胚卵裂率分别为 37.8%与 4 3.8% ( 51/135与 81/185) ,囊 /桑堪胚率分别为9.8%和 12 .3% ( 5/51和 10 /81)。在融合电压 1.5Kv/cm、持续时间 30us、脉冲次数为 2次的条件下 ,孤雌激活胚胎的卵裂率和囊 /桑堪胚率分别为 81.0 %和 12 .9%。
- 王立虎黄俊成杨梅张家新施巧婷李辉王红梅郭志勤
- 关键词：绵羊体细胞核移植克隆电融合
- 人胰岛素原基因转染成纤维细胞及细胞株的建立
- 用体细胞核移植技术生产转基因动物是目前一种最新、最有效的生产转基因动物的方法，而转基因体细胞系的建立是用这一方法生产转基因动物的基础。本文从绵羊体细胞系的建立、外源基因转染绵羊体细胞、转染细胞株的建立以及细胞的核型分析几...
- 王红梅
- 人胰岛素原基因转染绵羊成纤维细胞及细胞株的建立被引量：1
- 2004年
- 从动物耳皮肤组织采样 ,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养 ,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到 10 0 %。根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5 %的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化 ,可将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。通过脂质体介导 ,以BLG -hINS(含乳球蛋白调控基因的人胰岛素原基因 )基因作为目的基因、GFP(绿色荧光蛋白 )基因作为标记基因共转染绵羊成纤维细胞 ,经G - 4 18筛选后 ,得到转染细胞。对转染的细胞分别用单细胞显微操作法和有限稀释法进行细胞克隆 ,两种方法均可得到克隆细胞。选形态正常、生长均匀的 5个细胞克隆进行PCR检测 ,结果 5个克隆均转有GFP基因 ,其中两个转有BLG -hINS基因。高代培养细胞、转染细胞和克隆细胞经核型分析后 ,染色体数目均为 2 7对 ,表明绵羊耳的成纤维细胞建立细胞株后 ,可以作为外源基因转染的有效供体细胞。
- 王红梅刘明军黄俊成郭志勤张富春
- 关键词：人胰岛素绵羊成纤维细胞细胞株
- 不同融合条件及激活方法对体细胞克隆绵羊胚胎发育的影响被引量：1
- 2001年
- 对成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代 .将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MII期去核卵母细胞中进行核移植胚胎的生产 .用细胞松弛素B法与离子霉素 + 6 DMAP法对核移植胚胎 (重构胚 )在电融合后进行化学激活 ,然后在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下 ,进行体外培养 (IVC) .重构胚卵裂率分别为 37.8%与 43.8% ( 51 /1 35与 81 /1 85) ,囊 /桑葚胚率分别为 9.8%和 1 2 .3% ( 5/51和 1 0 /81 ) .在融合电压 1 .5kV/cm、持续时间 30μs、脉冲次数为 2次的条件下 ,孤雌激活胚胎的卵裂率和囊 /桑葚胚率分别为 81 .0 %和1 2 .9% .
- 王立虎黄俊成杨梅张家新施巧婷李辉王红梅郭志勤
- 关键词：绵羊体细胞核移植克隆胚胎发育
