王小莉
- 作品数：24 被引量：22H指数：2
- 供职机构：湖北医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学社会学更多>>
- TRIM5α对肝癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨TRIM5α（Tripartitemotif5alpha）对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建TRIM5α质粒，通过酶切、PCR和测序鉴定。将TRIM5α质粒转入人肝癌细胞株（HepG2），通过PCR、Westernblot检测TRIM5α的表达。采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖情况，采用流式细胞仪检测细胞的凋亡，Westernblot检测凋亡相关蛋白的表达。结果本研究成功构建了TRIM5α质粒，RT—PCR和Westernblot的结果显示构建的TRIM5α质粒可转入HepG2细胞中并且能够抑制肝癌细胞的增殖促进其凋亡。TRIM5ct主要是通过抑制Bcl-2的表达，激活Caspase-3的表达从而引起肝癌细胞凋亡，并且TRIM5α还可抑制肝癌细胞体内成瘤。结论TRIM5α可抑制人肝癌细胞的增殖促进其凋亡并抑制体内成瘤，为进一步研究其作用机制及其临床应用奠定基础。
- 余庆张文美孙迎迎龚媛媛李东升王小莉
- 关键词：肝癌细胞增殖凋亡
- hPdx1和△-hPdx1蛋白表达系统的构建及功能鉴定
- 2012年
- 经鉴定成功构建了hPdx1和△-hPdx1蛋白表达系统,IPTG诱导蛋白表达后Western blot检测在37.2-52.3 kD之间出现了与两种目的蛋白理论分子量相符的蛋白条带。诱导后破碎菌体上清液,经分离纯化最终得到的目的蛋白纯度可达到95%以上。纯化的蛋白加入人胚胎干细胞培养基中1 h后通过细胞免疫荧光检测发现,hPdx1蛋白可进入细胞而△-hPdx1不能进入细胞,表明表达得到的蛋白具有生物活性。
- 王小莉梁清乐李东升
- 关键词：蛋白表达
- TALEN介导的CXCR4敲除肝癌细胞株的建立被引量：1
- 2016年
- 通过TALEN打靶建立CXCR4的细胞株,旨在研究CXCR4对肝癌的影响。选用肝癌细胞株Hep G2,采用转录激活样效应物核酸酶(TALEN)干扰细胞中CXCR4的表达。构建的CXCR4 TALEN质粒转入Hep G2细胞,通过T7E1酶切确定打靶效率为40%,并通过测序筛选出了CXCR4敲除的单克隆细胞,免疫荧光和Western blot进一步证实CXCR4基因表达显著下调。
- 张文美丁妍郭兴荣李东升赵万红王小莉
- 关键词：TALENCXCR4肝癌基因打靶
- 人脐带间充质干细胞的分离培养与鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的:建立并优化人脐带间充质干细胞分离纯化方法,并对其表面标志与多向分化潜能进行鉴定。方法:收集健康足月产胎儿脐带组织,采用组织块贴壁法进行原代培养,流式细胞仪对其表面标志进行检测,通过向成骨成脂分化对其多向分化潜能进行鉴定,RT-PCR对其干细胞特性基因Oct4、Nanog、Sox2、Nestin进行检测。结果:采用组织块贴壁法可在2周左右获得大量间充质干细胞,培养的细胞经流式细胞仪检测,高表达CD29、CD44、CD105、CD106,低表达CD34、CD45;经成骨成脂诱导2周后可分化为成骨细胞和成脂细胞,RT-PCR检测发现原代细胞表达Oct4、Nanog、Sox2、Nestin基因。结论:人脐带间充质干细胞可在体外扩增培养,具有多向分化潜能,可作为组织工程种子细胞来源。
- 胡培王小莉李东升严世荣陈玲杨晓文
- 关键词：人脐带间充质干细胞原代培养
- 新基因Betatrophin原核重组蛋白表达及纯化被引量：1
- 2017年
- 目的构建人Betatrophin基因(h-Betatrophin)原核表达载体,诱导Betatrophin重组蛋白表达及纯化,为制备Betatrophin蛋白多克隆抗体及其功能研究打下基础。方法体外克隆Betatrophin cDNA序列,酶切后连接到PET32a(+)原核表达载体上,构建重组载体h-Betatrophin-PET 32a,然后转入大肠杆菌BL 21(DE 3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色及Western blotting检测蛋白表达情况,然后用Ni-NTA His·BindResin纯化目的蛋白。结果成功构建Betatrophin基因原核表达载体,诱导表达Betatrophin重组蛋白表观分子量正确,经纯化后可以得到纯度较高的Betatrophin重组蛋白。结论重组载体h-Betatrophin-PET 32a转入大肠杆菌BL 21后通过诱导及纯化可获取到纯度很高的Betatrophin重组蛋白,为后期研究Betatrophin基因功能奠定基础。
- 周春芳马石楠陈云李东升于莉王小莉郭兴荣
- 关键词：蛋白表达蛋白纯化
- 脐带间充质干细胞支持脐血单个核细胞冻存复苏后的体外生长被引量：2
- 2015年
- 目的:研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,h UC-MSC)对冻存复苏后脐血单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)体外生长的支持作用,以提高冷冻损伤后的造血细胞在体外的生存率。方法:用组织块培养法分离获得h UC-MSC,流式细胞仪检测其表面分子并诱导分化进行鉴定。分两组培养冻存复苏后的脐血MNCs:一组以h UC-MSC为滋养层共培养,另一组单独培养。光镜下观察两组MNCs密度。培养第10天,流式细胞仪检测两组造血细胞的百分比,并计数MNCs总数和造血细胞数进行对比。结果:成功分离培养获得h UC-MSC,符合各项鉴定标准。共培养组MNCs总数、CD45、CD14及CD19阳性造血细胞数均明显多于单培养组。结论:h UC-MSC可有效支持冻存复苏后脐血MNCs的体外生长。
- 袁雅红王小莉郭兴荣丁妍李东升
- 关键词：人脐带间充质干细胞脐血单个核细胞造血细胞冻存
- 医学院校生物技术专业本科生科研能力培养的探索被引量：1
- 2015年
- 长期以来医学院校主要以培养临床专业的学生为主,随着对科研创新型人才需求的不断增加,以医学为背景的生物技术科研人才的需求也日益剧增。本文以湖北医药学院培养生物技术专业的本科生为例,对医学院校如何培养生物技术专业本科生科研能力进行了初步探索。
- 王小莉
- 关键词：生物技术专业
- 小鼠胰岛的分离和移植
- 2014年
- 目的改进小鼠胰岛分离和移植方法。方法利用胆总管穿刺方法灌注胰腺,滤网过滤后人工挑取方法纯化胰岛;采用肾被膜下胰岛移植方法进行移植;用双硫棕(DTZ)染色方法鉴定分离纯化后的胰岛并计数;血糖仪动态检测胰岛移植后糖尿病小鼠血糖值;免疫组织化学染色观察肾脏被膜下胰岛存活情况。结果分离纯化后获得高纯度胰岛,可被DTZ染成猩红色,呈圆形或椭圆形;经计数每只小鼠可获胰岛(134±12)个;肾脏被膜下胰岛移植后血糖检测显示,移植胰岛后糖尿病小鼠可长期维持正常血糖值,移植胰岛在小鼠体内发挥了正常功能;免疫组织化学染色显示移植入的胰岛生存状态良好。结论依改进后的技术方法进行胰岛分离和移植,分离获得的胰岛纯度高、活力强,移植物功能正常、存活时间长,是一种简捷稳定的技术方法。
- 袁雅红卢智勇王小莉杨卓顺李东升
- 关键词：胰岛分离胰岛移植小鼠
- 新形势下高校生物实验室安全教育体系构建被引量：2
- 2023年
- 实验室安全教育作为实验室风险管理中最经济和最有效的方法,是加强生物实验室安全管理工作的重要方式之一,应贯穿实验室管理工作的始终。因此,建立健全高校生物实验室安全教育体系迫在眉睫。构建以安全文化素质形成为核心,以管理规范为“刚”、文化熏陶为“柔”,课堂内外相结合,保障措施并行,“四位一体”的高校生物实验室安全教育体系,搭建以教学为推手的实施框架,势必有较好的教学效果,对落实国家政策方针、保障各类科研平台与实验室的实验安全,有着不可替代的作用,值得在高校生物实验室范围内推广应用。
- 马石楠王坤郭兴荣郭兴荣
- 关键词：安全教育
- 酸性环境抑制CIK细胞对肝癌HepG2细胞的杀伤活性被引量：1
- 2016年
- 目的研究酸性环境对CIK(cytokine-induced killer,CIK)细胞杀伤肝癌HepG2细胞的影响。方法利用IFN-γ、IL-2及CD3抗体诱导外周血单个核细胞获得CIK细胞。在pH6.5及pH7.4条件下将CIK细胞和荧光素酶标记的HepG2细胞(HepG2-luc)按不同的效靶比混合培养,用小动物活体成像系统检测HepG2-luc荧光强度并计算杀伤活性,用MTT法检测并计算杀伤活性。在pH6.5及pH7.4条件下,在含CIK条件培养液0、50%和100%的情况下培养HepG2细胞,流式细胞仪检测凋亡坏死的细胞比例。结果 pH7.4时CIK细胞对HepG2细胞的杀伤率明显高于pH6.5时。CIK条件培养液作用下,pH7.4时HepG2细胞的凋亡坏死比例明显高于pH6.5。结论酸性环境明显抑制了CIK细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。
- 袁雅红郭兴荣于莉王小莉丁妍李东升
- 关键词：CIKHEPG2杀伤活性
