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银杏叶提取物对三氯乙烯诱导体外培养皮肤角质形成细胞损伤的保护作用: 目的探讨银杏叶提取物对三氯乙烯诱导体外培养人皮肤角质形成细胞毒性作用的保护作用。方法将来自3或3个以上不同个体的正常皮肤角质形成细胞混合培养后,于对数增长期进行染毒,利用中性红吸附实验,...; 涂登云; 关键词：三氯乙烯角质形成细胞银杏叶提取物; 文献传递

四氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒性作用被引量：2: 2006年; [目的]研究体外培养条件下有机溶剂四氯乙烯（perchloroethylene，PERC）对正常人表皮角质形成细胞（normal human epidermis keratinocyte，NHEK）的细胞毒性作用。[方法]用0．25％的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤，分离得到NHEK，进行体外无血清培养；用中性红吸附试验（NRU）测定PERC对NHEK的中性红吸附减少50％的浓度（NR50值），并据此确定PERC细胞毒性试验的染毒剂量；测定乳酸脱氢酶（LDH）活力反映其对细胞膜的损害，测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力反映细胞脂质过氧化作用。[结果]PERC可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低，PERC对NHEK的NR50值为2．16mmol／L（95％可信区间为1．27，3．07）；0．05、0．10、0．20、0．40、0．80mmol／LPERC处理NHEK1、2、3、4h后，LDH的释放呈明显剂量-反应和时间-反应关系；以上浓度的PERC处理NHEK4h，可引起MDA含量增加和SOD活力抑制，且均显示剂量-反应关系，与空白对照组、溶剂对照组相比，引起差异有显著性的最低浓度分别为0。20mmol／L（MDA升高）和0．10mmol／L（SOD降低），均为P，〈0．05。[结论]在体外培养条件下，PERC可能通过氧化应激和脂质过氧化作用对人角质形成细胞产生细胞毒性作用。; 沈彤丁锐涂登云马泰周承藩于均峰朱启星; 关键词：四氯乙烯角质形成细胞细胞毒性作用

三氯乙烯对人角质形成细胞一氧化氮和一氧化氮合酶的影响被引量：2: 2006年; 目的研究三氯乙烯(TCE)对体外培养的人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成和一氧化氮合酶(NOS)表达及活力的影响,探讨TCE的皮肤细胞毒性机制。方法无血清培养的正常人KC与0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE共培养4h,分别于染毒后12、24、48、72h测定培养液中NO含量和NOS活力,分析其时间—剂量—效应关系,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导型NOS(iNOS)mRNA的表达情况。结果低剂量组(0.125和0.25mmol/L)NO含量与iNOS活力在染毒后各时点与对照组相比均无差异;0.5mmol/L组NO含量与iNOS活力均在染毒后48h开始升高,分别为(32.19±4.75)μmol/L[对照组:(23.70±3.11)μmol/L,P<0.05]和(1.15±0.02)×103U/L[对照组:(0.77±0.06)×103U/L,P<0.05],随着染毒浓度的升高,0.5～2.0mmol/L组NO量与iNOS活力呈上升趋势,而且上升出现的时间提前,1.0和2.0mmol/L组分别于染毒后24和12h出现升高;NO释放的增加总是与iNOS活力升高一致,而结构型NOS(cNOS)活力在各剂量组的各时点均无变化;RT-PCR结果显示TCE可以诱导iNOSmRNA转录水平增高。结论TCE可以诱导人角质形成细胞NO合成增加,大量产生的NO与iNOS基因的上调有关,这一机制可能参与了TCE的皮肤细胞毒性。; 马泰沈彤涂登云丁锐朱启星; 关键词：角质形成细胞一氧化氮一氧化氮合酶

三氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒作用被引量：1: 2006年; 目的研究体外培养条件下有机溶剂三氯乙烯（Trichloroethylene，TCE）对正常人表皮角质形成细胞（normal humanepidermal keratinocyte，NHEK）的毒性作用。方法用0．25％的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤，分离得到NHEK．进行体外无血清培养；根据中性红吸附试验测定的NR50结果，确定TCE染毒剂量。测定乳酸脱氢酶（LDH）活力，反映其对细胞膜的损害，测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力．反映细胞脂质过氧化作用。结果TCE可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低，TCE对NHEK的NR50值为4．525mmol／L（3．922～5．128mmol／L）；NHEK细胞用0．125，0．250，0．500，1．000，2．000mmol／L的TCE处理1，2，3，4h后，LDH的释放显示明显的时间-剂量-反应关系；同样剂量的TCE处理NHEK，4h后可引起MDA含量呈浓度依赖性增加（最低浓度为0．500mmol／L）．SOD活力呈浓度依赖性抑制（最低浓度为0．250mmol／L），与空白对照和溶剂对照组相比较，两者差异均有显著性（P〈0．05）。结论在体外培养条件下，有机溶剂三氯乙烯可通过脂质过氧化和氧化应激作用对人角质形成细胞产生明显的细胞毒作用。; 沈彤丁锐涂登云马泰周承藩于均峰朱启星; 关键词：三氯乙烯角质形成细胞细胞毒作用

银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞NO合成的影响: 2006年; 背景与目的:观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)诱导的人角质形成细胞(kenatinocyte,KC)一氧化氮(NO)合成和一氧化氮合酶(NOS)基因表达及活性的影响,为探讨TCE职业性皮炎的机制及保护因子提供理论依据。材料与方法:分离的KC用无血清培养基进行原代培养至80%以上融合时,加入不同浓度的GBE预适应2h后再用2.0mmol/L的TCE染毒4h,以不含染毒的培养基作为对照组。根据试剂盒的方法检测NO含量和NOS活力,同时用RT_PCR的方法检测细胞i NOS mRNA的表达情况。结果:2.0mmol/L的TCE处理组NO含量和i NOS活力分别为(41.22±5.45)μmol/L和(0.53±0.07)U/4×105cell,明显高于对照组(24.20±3.72)μmol/L和(0.31±0.03)U/4×105cell。而TCE对KC cNOS活力无影响。10、50和100mg/L GBE保护组未见NO含量的明显下降,150mg/L GBE则能够拮抗2.0mmol/L TCE所致的NO水平和i NOS活力的升高。RT_PCR结果显示GBE的预处理可以抑制TCE诱导的KC i NOS mRNA的过表达。结论:TCE通过诱导KCiNOS基因上调产生大量的NO,GBE对TCE诱导的KCi NOS活力的升高以及iNOS基因表达的上调有抑制作用,也进一步抑制了NO的过量生成,可能对TCE皮肤损害具有保护作用。; 朱启星马泰涂登云沈彤丁锐; 关键词：银杏叶提取物一氧化氮一氧化氮合酶三氯乙烯角蛋白细胞

维生素E和银杏叶提取物对3种氯代烯烃细胞毒性的拮抗作用被引量：4: 2005年; 目的　探讨维生素E和银杏叶提取物(ginkgobilobaextract,GbE)对三氯乙烯(trichloroethylene ,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene ,PCE)和二氯乙烯(dichloroethylene ,DCE)所致人角质形成细胞(keratinocyte ,KC)细胞毒性的拮抗作用。方法　利用中性红吸附(neutralreduptake ,NRU)试验和乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase ,LDH)释放试验分别测定细胞活力和细胞毒性,分析维生素E和GbE对3种氯代烯烃的细胞毒性拮抗作用。结果　维生素E和GbE对3种氯代烯烃的细胞毒性具有明显的拮抗作用,在10～10 0mmol L(mg L)范围内呈明显的剂量效应关系,当维生素E浓度达到5 0mmol L ,GbE浓度达到15 0mg L时,细胞基本恢复为正常的状态。结论　vE和GbE对3种氯代烯烃所致KC细胞毒性的拮抗作用可能与它们稳定细胞膜结构,减少细胞膜损伤有关。; 周承藩沈彤丁锐涂登云于均峰马泰朱启星; 关键词：银杏叶提取物维生素E 细胞毒性人角质形成细胞细胞膜损伤 GBE

GbE对TCE诱导人KC细胞氧化损伤的影响: 2005年; 目的探讨三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)对人角质形成细胞(Keratinocyte,KC)氧化损伤的影响及银杏叶提取物(ExtractsfromtheLeavesofGinkgobiloba,GbE)对其拮抗作用。方法采用体外KC无血清培养方法,用中性红吸收实验(NetrualRedUptake,NRU)测定TCE对KC细胞毒性的半数抑制浓度NR50;用乳酸脱氢酶(LDH)法检测KC的损伤;用硫代巴比妥酸法测定KC细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)活力;同时检测细胞内抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果TCE对KC的NR50为4.53mmol/L;KC在TCE(0.125,0.25,0.5,1.0,2.0mmol/L)作用1,2,3,4h后,LDH释放增加,且具有时间和剂量依赖性,KC在TCE作用4h后,MDA的生成量显著减少,且呈浓度依赖性,与溶剂对照组相比,P<0.05;GbE(10,50,100,150,200mol/L)可以浓度依赖性的减少LDH释放、MDA的生成量,增加SOD的生成量。结论GbE可拮抗TCE引起的人KC损伤。; 涂登云沈彤丁锐魏凌珍孙美芳朱启星; 关键词：三氯乙烯角质形成细胞脂质过氧化

三氯乙烯诱导皮肤角质形成细胞凋亡的体外研究被引量：3: 2005年; 目的检测三氯乙烯(TCE)对人表皮角质形成细胞(NHEK)的凋亡诱导作用,探讨TCE皮肤毒性的作用靶。方法采用中性红吸附试验测定TCE对体外无血清培养的NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR50值),确定TCE染毒剂量;测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用和氧化状态;用透射电子显微镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡形态学改变和测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数(PI)。结果TCE对NHEK的NR50值为4.53(3.92～5.13)mmol/L;TCE处理NHEK4h后,MDA含量的增加和SOD活力的抑制均具有剂量-效应关系(r=0.98,r=0.93,P<0.01);TEM观察显示,与对照相比,TCE处理组细胞可见明显凋亡改变;FCM测定显示,DNA含量直方图中G1期前可见明显的凋亡峰,与对照组相比,TCE处理组细胞凋亡率明显增高(空白对照及TCE0.125、0.500、2.000mmol/L组分别为18.42%、31.83%、38.63%、44.35%),而PI则明显降低(空白对照及TCE0.125、0.500、2.000mmol/L组分别为4.99%、3.26%、2.48%、2.07%)。结论在体外培养条件下,TCE可通过脂质过氧化和氧化应激作用诱导NHEK凋亡,抑制其增殖。; 沈彤马泰丁锐涂登云朱启星; 关键词：三氯乙烯细胞凋亡三氯乙烯体外研究细胞DNA含量人表皮角质形成细胞

银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞凋亡的影响被引量：5: 2006年; 目的研究体外培养条件下银杏叶提取物（ginkgo biloba leaf extracts．EGb）对三氯乙烯（trichioroethvlene，TCE）诱导的正常人表皮角质形成细胞（normal human epidernis keratinocyte，NHEK）凋亡的影响。方法体外培养条件下，用中性红吸附试验（NRU）测定TCE对NHEK的中性红吸附减少50％的质量浓度（NR50值）和EGb的最低有效保护质量浓度。用透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM）观察细胞凋亡形态学改变，流式细胞仪（flow cytometer，FCM）测定细胞DNA含量并计算凋亡发生率。结果 TCE对NHEK的NR50值为4．53（3．92～5．13）mmol／L；用10、50、100、150和200mg／LEGb预孵育NHEK2h时，由2．0mmol／L TCE引起的细胞活力的下降随EGb剂量的增加逐渐恢复，且150mg／L为最低有效保护剂量。TCE可引起NHEK的超微结构呈凋亡改变，凋亡发生率呈剂量依赖式增加。与0．125、0．5和2.0mmol／L TCE暴露组相比，150mg／L EGb预孵育组，细胞超微结构恢复到正常对照组水平，凋亡发生率明显减少。结论体外培养条件下，EGb可以抑制TCE诱导的NHEK的细胞凋亡。; 沈彤丁锐涂登云马泰周承藩于均峰朱启星; 关键词：银杏叶提取物三氯乙烯角质形成细胞

人皮肤角质形成细胞的胰蛋白酶消化分离及无血清培养被引量：20: 2003年; 目的　探索用DMEM SF培养基对经胰蛋白酶两步消化分离的人角质形成细胞进行培养的方法和条件。方法　取临床整形外科手术后剩余皮肤 ,用 0 2 5 %的胰蛋白酶经冷和温两步消化分离后 ,用DMEM SF完全培养基于 5 %CO2 、37℃培养 ,绘制生长曲线 ,并用单克隆抗角蛋白抗体和鼠 IgG免疫组化试剂盒进行细胞鉴定。结果　用胰蛋白酶两步消化分离的角质形成细胞在DMEM SF培养基中可正常生长 2周以上 ,生长曲线显示细胞在第 4天进入对数生长期 ,第 10天进入停滞期。鉴定显示角质形成细胞占 95 %以上。来源于 3个不同个体的皮肤角质形成细胞经等量混合后培养与单独培养相比 ,细胞生长无统计学差异。结论　用胰蛋白酶对人皮肤进行冷和温两步消化分离的角质形成细胞 ,在DMEM SF完全培养基中生长状况良好 ,其他细胞污染少 ,实验成本低廉 ,操作简单。; 丁锐沈彤涂登云魏凌珍孙美芳朱启星; 关键词：人皮肤角质形成细胞胰蛋白酶无血清培养细胞培养细胞鉴定

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涂登云

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