张黎
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”湖北省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 解脂耶氏酵母脂肪酶Lip1基因的密码子优化及功能表达
- 脂肪酶/(Lipase,EC 3.1.1.3/)即三酰甘油酯酰基水解酶,广泛存在于各种动植物和微生物中,是一类具有多种催化能力的酶,可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯类的水解、酯化、醇解、酯交换以及酯类的逆向合成反应...
- 张黎
- 关键词：解脂耶氏酵母脂肪酶密码子优化GAP启动子组成型表达
- 文献传递网络资源链接
- SLC20A2基因突变导致Fahr病发生的分子致病机制研究
- 王程李雨雷石磊任杰徐旋马西祥李向阳张黎金珊张学刘静宇
- 解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1的克隆、密码子优化及功能表达被引量：8
- 2010年
- 【目的】克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达。【方法】通过PCR扩增Y.lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用重叠延伸PCR合成改造后基因MLip1,将其分别克隆至诱导型分泌载体pPIC9K和新构建的组成型分泌载体pG AP9K上,电转至P.pastoris GS115中,G418抗性筛选得到高拷贝转化重组子,摇瓶发酵,以对硝基苯酚酯为底物检测脂肪酶水解活力,并对表达产物进行酶学性质分析。【结果】从Y.lipolytica中成功克隆了脂肪酶基因lip1(GenBank:Z50020),全长1461bp,编码486个氨基酸残基,无内含子,无信号肽;密码子优化后基因表达水平相对于出发基因有较大提高,且组成型表达优于诱导型;Lip1酶学性质分析表明,其最适底物为pNPB(C4),45℃下Tris-Hcl缓冲液pH8.5时最大水解酶活为8.07U/mL。【结论】Y.lipolytica脂肪酶基因lip1的克隆丰富了脂肪酶基因资源,其高效基因工程菌的构建为将来实现规模化生产奠定了技术基础。
- 张黎赵鹤云徐莉刘云闫云君
- 关键词：克隆密码子优化GAP启动子
