张磊
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默轴突导向蛋白4D基因对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响被引量：6
- 2011年
- 摘要：目的 探讨沉默轴突导向蛋白4D（Sema4D）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响,并验证Sema4D干扰RNA对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 针对Sema4D基因构建短发夹RNA（shRNA）重组载体pshRNA Sema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法筛选RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染卵巢癌SKOV3细胞（重组载体组）,并以空载体组（转染空载体pcDNA3.1质粒）和未转染组（未作任何处理）为对照.采用RT-PCR法和Westem blot法分别检测转染前后SKOV3细胞中Sema4D mRNA和蛋白表达,并榆测转染前后SKO3细胞的增殖、侵袭和转移能力.建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,将满足成瘤标准的15只裸鼠随机分为pshRNASema4D组（重组载体组）、空载体组和未转染组,每组5只,分别向瘤块内注射pshRNASema4D-B（50μg/次）、空载体（50μg/次）和磷酸盐缓冲液（PBS,100μl/次）,每3 d注射1次,共3周,观察移植瘤生长情况.结果 酶切鉴定和测序分析证实,靶向Sema4D的3个ShRNA重组载体pshRNASema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒构建成功.RT-PCR法筛选显示,重组载体pshRNASema4D-B质粒干扰效果最佳.重组载体组转染24、48和72 h时,SKOV3细胞中Sema4DmRNA的相对表达水平分别为0.401.4±0.051、0.120±0.035和0.014±0.015,重组载体组转染72 h时的Sema4D mRNA相对表达水平明显低于空载体组（0.521±0.019）和未转染组（0.536±0.040,P〈0.05）.Western blot法检测显示,重组载体组转染24、48和72 h时,细胞中Sema4D蛋白的相对表达水平分别为0.196±0.023、0.074±0.015和0.040±0.014,重组载体组转染72 h时的Sema4D蛋门相对表达水平明显低于空载体组（0.275±0.009）和未转染组（0.282±0.015,P〈0.05）.与空载体组和未转染组比较,重组载体组细胞增殖、侵袭和迁移能力受到抑制（P〈0.05）.注射p
- 陈颖张磊吴卉娟刘文欣郝权
- 关键词：卵巢肿瘤RNA干扰
- siRNA抑制Sema4C基因表达对人乳腺癌细胞恶性行为的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制轴突导向蛋白分子(Semaphorin4C,Sema4C)基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移、侵袭及增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:根据Sema4C基因设计序列特异性的siRNA(Serna4C-siRNA),在脂质体介导下转染MDA-MB-231细胞,Western blot方法检测基因封闭效应,利用细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验及CFSE流式细胞仪方法检测细胞转染前后迁移、侵袭及增殖能力的变化,Western blot检测磷酸化AKT(p-AKT)在转染前后细胞中表达的变化。结果:转染Sema4C-siRNA 72小时后,乳腺癌MDA-MB-231细胞株(MDA-MB-231/Si)Sema4C蛋白表达明显下降,与未转染细胞MDA-MB-231相比,MDA-MB-231/Si细胞体外迁移能力减弱,侵袭及增殖能力明显下降;p-AKT表达水平在MDA-MB-231/Si细胞中明显降低。结论:Sema4C-SiRNA转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞可下调细胞中Sema4c蛋白表达水平,Sema4C-siRNA对MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭和增殖有抑制作用。
- 张磊陈颖刘文欣王耕辛吴明富马丁郝权
- 关键词：乳腺癌增殖
- HIF-lα、VEGF和Sema4D蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义被引量：7
- 2011年
- 实体肿瘤在发展过程中，因体积增大、血液供应不足而出现缺氧，缺氧又通过关键的转录因子——缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）使肿瘤血管增生、转移等恶性行为更加明显［1］。HIF－1α在恶性肿瘤发生、发展中所发挥的作用主要与其调节的下游基因，
- 陈颖张磊刘翔宇潘毅邱媛媛吴卉娟刘文欣郝权
- 关键词：卵巢癌组织VEGF缺氧诱导因子蛋白恶性行为
- 卵巢上皮性癌组织中轴突导向蛋白4D的表达与微血管密度的关系被引量：3
- 2010年
- 卵巢上皮性癌（卵巢癌）的病死率居妇科恶性肿瘤的首位，总的5年生存率仅为30％左右，其原因与癌组织血管丰富，易发生转移导致患者预后不良密切相关。卵巢癌组织中的微血管密度（microvessel density，MVD）是评价血管生成的重要指标。轴突导向蛋白（semaphorin）最初是在研究神经系统发育过程中发现的，参与轴突导向、纺锤体形成及神经信号通路的传导。semaphorin家族共有20多个成员，
- 陈颖张磊潘毅刘文欣吴卉娟郝权
- 关键词：卵巢上皮性癌组织微血管密度轴突导向蛋白卵巢癌组织妇科恶性肿瘤
- Semaphor in4C在乳腺癌 子宫内膜癌及前列腺癌中的表达及意义被引量：8
- 2010年
- 目的:研究轴突导向分子Semaphorin4C(Sema4C)在乳腺癌、子宫内膜癌及前列腺癌组织和细胞水平的表达情况及其与上述三种恶性肿瘤转移的关系。方法:应用免疫组化技术检测45例乳腺癌、42例子宫内膜癌及49例前列腺癌组织中Sema4C的表达情况,分别采用蛋白免疫印迹法Western Blot及细胞免疫荧光方法检测Sema4C在三种乳腺癌细胞(MDA-MB-435S、MDA-MB-231、MCF-7)、两种子宫内膜癌细胞株(AN3CA、HEC-1-B)和两种前列腺癌细胞株(PC-3M-1E8、PC-3M-2B4)的蛋白表达及其亚细胞定位情况。结果:乳腺癌和子宫内膜癌中,其分别在有淋巴结转移的乳腺癌组和子宫内膜癌组的原发灶中的表达高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌中,Sema4C的阳性表达率随着Gleason评分增加而升高(P<0.05)。Western blot在七株肿瘤细胞均检测到Sema4C的表达,且提示Sema4C的表达与细胞的转移潜能呈正相关。荧光显微镜下观察到Sema4C主要定位在细胞膜和细胞浆。结论:Sema4C在乳腺癌、子宫内膜癌和前列腺癌组织和细胞中表达具有普遍性,且与上述三种恶性肿瘤转移关系密切,有望成为上述三种恶性肿瘤治疗的一个新的分子靶点。
- 陈颖张磊刘文欣王耕辛吴明富马丁郝权
- 关键词：恶性肿瘤
