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PC12细胞的PSI诱导性包含体富集了真核细胞翻译因子(英文)被引量：2: 2008年; 路易小体(Lewy body, LB) ,位于神经细胞核周(perikaryon)的嗜酸性包含体(eosinophilic inclusion) ,含有广泛的蛋白质组分,其中一部分是组成型蛋白质(consistent organization) ,另外一部分则是选择型蛋白质(selective composition) .为了在体外获得LB中未知蛋白质的新线索,通过人工合成蛋白酶体抑制剂PSI(proteasomal inhibitor ,10μmol/L)作用PC 12细胞48 h,使其产生嗜酸性(staining for eosin)和抗α-synuclein阳性(immunostaining for α-synuclein)的PSI诱导性包含体(PSI-inducedinclusion) ,通过成功的分级分离(fractionation)纯化了完整、纯净的包含体,通过有效的双向电泳(two-dimensional electrophoresis ,2-DE)分离了包含体蛋白质,通过无偏差的基质辅助激光解析-离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDITOF MS)鉴定了真核细胞翻译起始因子-3亚单位5(eukaryotic translation initiation factor 3 subunit 5 ,eIF-3ε)、真核细胞延伸因子-2 (eukaryotic elongation factor 2 , eEF-2)和线粒体延伸因子-Tu(mitochondrial elongation factor Tu, EF-Tumt)等真核细胞翻译因子(eukaryotic translation factors) .这一结果提示,当蛋白酶体受到抑制时真核细胞翻译因子被富集到PSI诱导性包含体中,并且可能影响其形成过程.; 李兴安张应玖胡轶虹常明刘韬王丹萍张磊张瑜胡林森

蛋白酶体抑制剂诱导的PC12细胞帕金森病模型中血红素加氧酶-1的差异表达被引量：3: 2010年; 目的探讨蛋白酶体抑制剂(Proteasome inhibitor,PSI)诱导的PC12细胞帕金森病(Parkinson disease,PD)模型中血红素加氧酶-1(Hemeoxygenase-1,HO-1)的差异表达,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法取培养的PC12细胞,加入终浓度为10μmol/L的PSI,建立PSI诱导的PC12细胞模型,以加入终浓度为10μmol/L的二甲基亚砜(DMSO)为对照组。经HE、AO&EB及α-SYN染色进行鉴定;PSI作用48h后提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFProMS)鉴定差异蛋白。结果模型组与对照组比较,PSI作用48h可见细胞内嗜酸性类Lewy小体形成及细胞凋亡,凋亡率达(24.74±4.55)%。模型组与对照组比较,HO-1表达量显著增加。结论在泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)功能障碍诱发PD过程中,氧化应激反应发挥着一定的作用。; 刘韬金英花张瑜常明王丹萍胡林森; 关键词：蛋白酶体抑制剂血红素加氧酶-1 泛素肽水解酶类帕金森病 PC12细胞

质谱鉴定PC12细胞蛋白酶体抑制剂PSI-诱导性包含体中的LB蛋白质(英文)被引量：2: 2008年; 路易(小)体(Lewy body,LB)构成特征的蛋白质组分在体外形成的路易(小)体样包含体(Lewy body-like inclusion)或聚集体(aggresome)中能够获得鉴定.通过蛋白质组学方法鉴定聚集体内蛋白质是一种新的途径.10μmol/L人工合成蛋白酶体抑制剂PSI(proteasomal inhibitor)作用PC12细胞48h,使其产生PSI诱导性包含体(PSI-induced inclusions).通过生物化学分级分离、双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-D)和肽质量指纹鉴定(identification via peptide mass fingerprints,PMF)的蛋白质组学方法,2个涉及突触递质合成的蛋白质、6个26S蛋白酶体亚基、2个细胞骨架蛋白、2个线粒体蛋白、1个抗氧化蛋白和7个分子伴侣蛋白和(或)分子伴侣样蛋白等20个LB蛋白质组分获得鉴定.结果提示,当PC12细胞发生蛋白酶体抑制时,这20个LB蛋白质组分可能被富集到PSI诱导性包含体中.; 李兴安张应玖胡轶虹常明刘韬王丹萍张瑜胡林森; 关键词：蛋白质组分

遗传性球形红细胞增多症患儿实施脾切除术的护理指导: 总结18例遗传性球形红细胞增多症患儿实施脾切除术的围手术护理经验。术前予以心理护理,纠正贫血状态,加强营养,预防感染。术后予以加强监护,胃肠减压,保持舒适体位,抗感染、纠正贫血、营养支持,饮食指导,抗凝、预防血栓等对症支...; 李新红杨慧张瑜; 关键词：遗传性球形红细胞增多症脾切除术儿童围手术期护理; 文献传递

鱼藤酮对PC12细胞毒性作用的机制被引量：2: 2007年; 目的:探讨鱼藤酮诱导PC12细胞毒性作用的可能机制,为神经防护药物的研发提供理论基础。方法:将培养的PC12细胞分为正常对照组和0.5μmol.L-1鱼藤酮实验组,持续作用72 h,MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342检测细胞凋亡;提取实验组和对照组细胞的总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳系统(DIGE)获得差异蛋白点的表达信息;通过MALDI-TOF质谱鉴定差异蛋白点。结果:MTT法显示鱼藤酮实验组较正常对照组细胞存活率明显降低(P<0.01);Hoechst 33342荧光染色显示鱼藤酮实验组可见较多凋亡细胞,表现为核边集、核固缩、核碎裂等特征性凋亡改变,其凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。DIGE分析软件提示实验组点298的表达量高于对照组(P=0.004),点447的表达量低于对照组(P=0.009 5)。通过质谱分析和数据库检索,鉴定为纽蛋白和线粒体顺乌头酸酶。结论:纽蛋白和线粒体顺乌头酸酶参与细胞损伤,可能成为神经防护药物作用的靶点。; 韩威宫萍常明张瑜张颖王秋艳胡轶虹胡林森; 关键词：PC12细胞鱼藤酮蛋白质组学细胞毒性作用

PSI诱导PC12细胞帕金森病模型中ERp29蛋白表达被引量：2: 2007年; 目的:探讨泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能障碍诱发帕金森病(PD)细胞模型的作用机制,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法:建立PSI诱导的PC12细胞模型,实验组、对照组分别加入PSI和DMSO(终浓度为10μmol.L-1)孵育36 h后提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF Pro MS)鉴定出差异蛋白。结果:实验组与对照组比较,在36 h可见细胞内嗜酸性类Lewy小体形成及细胞凋亡(细胞核呈固缩状或碎裂状),凋亡百分率为25.53%。实验组内质网蛋白ERp29与对照组比较表达量显著降低,差异有显著性(P<0.01)。结论:内质网应激(ERS)在UPS功能障碍引起PD的病理变化过程中起重要作用。; 张瑜徐卉张颖韩威胡轶虹胡林森; 关键词：内质网应激帕金森病泛素-蛋白酶体系统

PC12细胞系硝化修饰亚蛋白质组表达谱的建立: 2007年; 目的构建基础条件下PC12细胞系的硝化修饰亚蛋白质组表达谱。方法提取PC12细胞总蛋白,进行双向电泳及Western blot硝化蛋白分析,应用Image Master 2D Evolution分析软件获得硝化蛋白质点的信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定硝化蛋白质。结果PC12细胞有50多个蛋白点发生硝化修饰,共鉴定出11个硝基酪氨酸免疫阳性的蛋白质。结论成功地构建了PC12细胞系硝化亚蛋白质组表达谱,为病理学和药理学条件下蛋白质硝化修饰的研究奠定了基础。; 王秋艳马涤辉常明张瑜胡轶虹胡林森; 关键词：PC12细胞双向电泳蛋白质组学 3-硝基酪氨酸 WESTERN BLOT

PC12细胞基础状态氧化蛋白质表达谱被引量：1: 2006年; 目的绘制基础状态下PC12细胞氧化蛋白质的表达谱,期望为以PC12细胞为模型的实验研究提供基本理论依据。方法采用2D凝胶电泳和westernblot技术相结合的方法获得氧化修饰的蛋白点,运用MALDI-TOF质谱鉴定出被氧化的蛋白质。结果PC12细胞总蛋白中共有91个蛋白点发生氧化修饰,运用MALDI-TOF质谱鉴定出19个氧化蛋白质。结论处于基础状态的PC12细胞存在蛋白质的氧化修饰,可以为病理条件下的氧化损伤研究提供可靠的参照系统。; 张颖冯加纯常明张瑜韩威王秋艳胡轶虹胡林森; 关键词：PC12细胞氧化应激氧化修饰帕金森病

PSI诱导PC12细胞胞浆内胞核旁嗜酸性包涵体的形成及其演变过程: 2007年; 目的研究蛋白酶体抑制剂PSI诱导PC12细胞胞浆内嗜酸性包涵体的形成及演变过程。方法取进入对数生长期的PC12细胞。孵育24h后,加入PSI(终浓度10μmol/L),分别于给药后3、6、9、12、24、48、72、96、120h取出细胞并甩片固定,行HE染色及α-synuclein免疫组织化学染色,光镜下观察形态变化。结果HE染色:PSI作用6h后,PC12细胞胞浆呈现嗜伊红染色,胞体变大;至12h可见明显的嗜伊红聚集的核心;24h后,几乎所有的细胞都形成了核旁嗜伊红球状包涵体;其后,胞核及胞浆逐渐缺失,于120h仅余聚集的嗜伊红球状包涵体。免疫组化染色:PSI作用3h后,可见到散在于整个胞浆的α-synuclein免疫反应阳性颗粒;6h后,细胞明显增大,胞浆中颗粒增多;12h后,颗粒聚集更加明显,形成明显的聚集中心;24h后,几乎所有的细胞都形成了α-synuclein免疫反应阳性的球状包涵体;随时间延长,胞核及胞浆逐渐缺失,至120h仅见固缩的α-synuclein免疫反应阳性球状包涵体。结论PSI作用于PC12细胞,早期出现散在于胞浆中的嗜酸性和α-synuclein免疫反应阳性的点状颗粒,然后这些颗粒进一步在核旁聚集,形成聚集中心,最后形成固缩的包涵体,细胞外包涵体可独立存在。这种包涵体形成和演变过程与以人类PD为代表的神经变性疾病中的包涵体非常相似,可以作为研究包涵体相关问题的有力工具。; 胡轶虹常明张瑜王秋艳张颖韩威胡林森; 关键词：蛋白酶体 PC12细胞神经变性

钙激活蛋白酶与蛋白酶体抑制剂诱导细胞凋亡的机制被引量：5: 2008年; 目的探讨蛋白酶体抑制剂诱导PC12细胞凋亡的作用通路,为深入研究泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能障碍诱发细胞凋亡发病机制提供新线索。方法建立PSI诱导的PC12细胞模型,在48h提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFProMS)鉴定出差异蛋白。结果实验组与对照组比较,在48h看到细胞凋亡(细胞核呈固缩状或碎裂状),凋亡率达14.86%。实验组钙激活蛋白酶(calpain)与对照组比较表达量显著增高,有统计学意义(P<0.05)。结论首次发现在蛋白酶体抑制PC12细胞模型中calpain蛋白表达显著增高。结合GRP78和GRP94表达上调的发现提示内质网应激(ERS)在UPS功能障碍引起细胞凋亡过程中扮演重要角色。; 张瑜常明韩威胡轶虹王秋艳胡林森; 关键词：内质网应激泛素-蛋白酶体系统

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张瑜

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