张严
- 作品数：10 被引量：39H指数：3
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学机械工程生物学更多>>
- 腺病毒介导的IL-24基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖的机制研究
- 2010年
- 目的:探讨IL-24抑制人脑胶质瘤细胞增殖的可能机制。方法:用腺病毒介导的IL-24(Ad.IL-24)及腺病毒空载体感染人脑胶质瘤细胞U251,通过荧光显微镜观察腺病毒的感染效率,RT-PCR法检测IL-24的转录水平;用MTT法、流式细胞仪检测IL-24对U251细胞增殖的影响;用蛋白质印迹方法检测神经生长因子(NGF)、酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase A,TrkA)的表达水平,并分析其相关性。结果:Ad.IL-24及腺病毒空载体转染U251后,RT-PCR结果显示Ad.IL-24组出现高表达电泳条带,而腺病毒空载体组则未出现电泳条带;MTT结果显示Ad.IL-24明显抑制了U251细胞的增殖,且流式细胞仪细胞周期检测发现Ad.IL-24处理组较对照组G2/M期明显延长,蛋白质印迹结果显示过表达IL-24的U251细胞中NGF及TrkA表达降低。结论:IL-24可能通过减少细胞中TrkA和NGF的表达来抑制肿瘤细胞的增殖。
- 张铁军袁志诚张严赵婷婷王青叶思思李巧玉湛利平杨勇金洁邵根宝彭琬昕龚爱华
- 关键词：白细胞介素24神经生长因子胶质瘤细胞
- DAPT与K252a联用体外抑制人脑胶质瘤U251MG细胞的生长被引量：1
- 2014年
- 目的探讨Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)与神经营养素受体高亲和力的酪氨酸激酶受体家族(Trks)阻断剂K252a联用对人脑胶质瘤U251MG细胞的抑制作用。方法应用DAPT和K252a单独或联用处理U251MG细胞,噻唑蓝比色实验检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p-TrkA、JNK、p-JNK、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和Bcl-xL等蛋白的表达。结果 DAPT和K252a均能呈时间与剂量依赖性抑制体外胶质瘤细胞的活性。K252a200、100和50nmol/L与DAPT 2.5μmol/L联合用药24、48和72h的细胞活力均低于单独使用K252a或DAPT(P<0.05)。两药联用可以增加sub-G1期细胞,即促进细胞凋亡。与K252a100nmol/L或DAPT 2.5μmol/L单用比较,K252a100nmol/L与DAPT 2.5μmol/L联用降低了p-TrkA的量,对于JNK的表达基本没影响,但可增加p-JNK的表达。可活化Caspase-3和Caspase-9,同时减少Bcl-xL的表达,但对Bax和Bcl-2的表达基本没影响。结论 DAPT能抑制U251MG的细胞活性。联合DAPT用药能增强K252a对人脑胶质瘤细胞U251MG的毒性。
- 陈普建熊二梦张严龚爱华
- 关键词：DAPTK252A胶质瘤
- 氮掺杂碳量子点的合成、表征及其在细胞成像中的应用被引量：28
- 2015年
- 以葡萄糖和甘氨酸为混合碳源,在较低温度下经水热法一步合成了氮掺杂的荧光碳量子点(N-CQDs),然后对氮掺杂碳量子点的形貌、结构、组成、光学性质和细胞毒性进行了表征,最后将其应用于细胞成像。实验结果表明,对碳量子点进行氮掺杂能有效提高其荧光量子产率,其荧光增强是由于表面形成了大量强供电子基团,当葡萄糖和甘氨酸的质量比为2∶1时能获得最高为6.57%荧光量子产率。氮掺杂碳量子点还具有水溶性好、粒度均匀、优异的光致发光性质、低的细胞毒性、多波长成像等诸多优点,有望作为荧光探针应用于细胞成像等领域。
- 李晓峰周明龚爱华张严杨青峰
- 关键词：氮掺杂细胞成像
- 单胺氧化酶抑制剂诱导胶质瘤细胞的体外分化被引量：2
- 2012年
- 为研究单胺氧化酶抑制剂(TCP)对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的诱导分化作用,以不同浓度TCP单独或与100nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)联合处理U251细胞。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;Hoechst 33258染色显示细胞凋亡;Real-time PCR和Western印迹法检测分化相关基因mRNA和蛋白表达水平的改变。结果表明:TCP可诱导细胞突起增多且变细长,抑制细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期,抑制全能性转录因子Oct4和Sox2的表达,上调分化标志基因胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,TCP联合TSA也诱导了GFAP的高表达。这些结果提示:TCP可诱导胶质瘤U251细胞分化,TSA对TCP诱导细胞分化有协同作用。
- 邵根宝薄丹丹韩晓娟贺清华张严桑建荣
- 关键词：单胺氧化酶抑制剂组蛋白去乙酰化酶抑制剂胶质瘤分化
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA影响U251细胞中p21稳定性的机制
- 2013年
- 目前已开发的组蛋白去乙酰化酶抑制剂如SAHA表现出了广泛的临床应用前景。然而,其作用机制有待进一步阐明。该研究旨在探明SAHA对p21蛋白稳定性的影响。运用Real-time PCR、免疫共沉淀、泛素化降解实验、免疫印迹和流式细胞技术分析了SAHA对p21 mRNA和蛋白水平、稳定性和泛素化水平的影响;并分析了SAHA通过调节GSK-3β的活性影响p21蛋白稳定性及细胞周期的进程。结果发现,SAHA不但可以上调p21 mRNA水平,还可以稳定其蛋白水平;而且SAHA通过影响GSK-3β的活性降低p21蛋白泛素化水平,从而抑制其降解,并因此改变细胞周期进程,这表明SAHA可以通过抑制GSK-3β的活性增加p21蛋白的稳定性,维持其蛋白水平从而发挥SAHA的生物学效应。该研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：SAHA胶质瘤细胞P21GSK-3Β
- 线粒体参与银杏酸诱导HepG2细胞凋亡的研究被引量：3
- 2012年
- 探讨银杏酸(Ginkgolic acids,GAs)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的效应,初步探索其与线粒体相互作用的机制.以不同浓度的GAs作用于HepG2,MTT检测与相差显微镜观察相结合,分析GAs对细胞增殖的影响;Hochest染色观察细胞核变化;AnnexinⅤ/PI双标后流式细胞仪检测凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、Bcl-2)的表达;JC-1染色检测线粒体膜电位;DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)生成.结果发现,GAs以时间和剂量依赖性方式抑制细胞的增殖;GAs处理诱导HepG2细胞发生凋亡:细胞核皱缩及片段化,Caspase-3活化,Bax/Bcl-2比值增加,细胞凋亡率显著上升.此外,GAs可直接与线粒体发生作用,诱导HepG2细胞线粒体外膜膜电位下降,PTP孔道开放,ROS含量升高.研究结果表明GAs能够诱导肝癌细胞的凋亡,推测其主要通过影响线粒体功能而导致细胞的凋亡.
- 叶思思高静龚爱华张严王穆彬杨小明
- 关键词：银杏酸抗肿瘤凋亡线粒体
- 自媒体对居民雾霾防控意识的影响机制与对策略研究
- 2021年
- 依据计划行为理论,分析自媒体自身特点对雾霾防控产生的不同影响,最终从自媒体层面、政府层面、公众层面三个层面提出雾霾防控的改进措施,促进公众维护环境,注重身体健康。结合计划行为理论,通过案例分析雾霾对人体的危害,以及自媒体在雾霾防控中的影响路径。自媒体帮助信息传递,提高科学信息的传播速度和影响力,带动雾霾防控积极性,有利于公民采取健康行为,进行雾霾防控。
- 许力铸张婷婷张严
- 关键词：自媒体雾霾计划行为理论
- 全反式维甲酸协同DAPT抑制胶质瘤干细胞的自我更新被引量：1
- 2013年
- 前期研究脑表明,脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是胶质瘤发生和发展的重要因素,探索靶向干预GSCs生长有可能成为脑胶质瘤治疗的有效途径之一。该研究旨在阐明两种药物ATRA和γ-分泌酶抑制剂DAPT协同抑制GSCs自我更新的生物学效应。通过用台盼蓝排染法、克隆球形成试验和免疫印迹分析了两种药物的单独使用或联用对GSC样细胞PGC1和PGC2生长、成球能力和自我更新以及干细胞标志物表达的影响。结果发现,单独使用ATRA对PGC1生长有一定的抑制作用,而对PGC2生长几乎没有影响;DAPT对PGCs的生长抑制作用明显强于ATRA。高浓度ATRA(80μmol/L)能诱导PGCs的分化,降低PGCs成球大小,且成球效率降至5%～8%,而正常对照组为32%～35%;同样,DAPT(40μmol/L)也能降低PGCs成球大小,且成球效率降至2%～3%;低浓度ATRA(20μmol/L)和DAPT(5μmol/L)对PGCs自我更新能力和干性没有明显影响,而联合使用后其明显降低PGCs的成球大小,且成球效率降至3%～5%,促进细胞凋亡,并且明显抑制了干细胞标志物Nestin、CD133、Sox2、Oct4的表达,提高了分化标志物GFAP的表达。该研究证明了低浓度的ATRA和DAPT能协同抑制脑胶质瘤干细胞PGCs的自我更新。研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：DAPT脑胶质瘤干细胞自我更新
- 应用体外DNA同源重组技术构建pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA
- 2011年
- 目的:利用体外DNA同源重组的方法分别构建含神经生长因子(NGF)和神经生长因子受体(TrkA)基因的真核表达载体。方法:在引物5'加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列,PCR扩增目的基因NGF和TrkA,线性载体片段和目的基因片段经T4 DNA聚合酶的外切产生互补的单链DNA,然后37℃退火实现体外同源重组,转化并鉴定;将重组质粒转染293A细胞,免疫印迹鉴定目的基因的表达情况。结果:成功构建真核载体pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是31×103和140×103。结论:与常规重组技术相比,体外DNA同源重组技术是一种高效的DNA重组方法,且不需考虑目的片段的限制性酶切位点。
- 张严龚爱华金洁邵根宝彭琬昕
- 关键词：TRKA神经生长因子
- SAHA诱导的p21表达致U251MG细胞抗凋亡效应被引量：4
- 2013年
- 目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U251MG细胞凋亡的比例,达到45%左右,活化的凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9表达水平明显增加;p21-ShRNA组细胞周期调控蛋白cdc25c、cdc2的磷酸化水平和总蛋白质水平也明显上调,clycinB1和磷酸化的H3水平明显提高。结论在SAHA处理条件下,p21下调使U251MG细胞阻滞于细胞周期G2/M期,促进了细胞凋亡。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：SAHA胶质瘤细胞P21组蛋白去乙酰化酶
