常平安
- 作品数：61 被引量：102H指数：6
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- NTE酯酶活力域真核表达载体的构建及其表达
- 2005年
- 目的构建人神经病变靶标酯酶(NTE)酯酶活力域(NESP)真核表达载体,并在细胞中表达。方法利用含有特定酶切位点的引物,通过PCR扩增出其酯酶活力域,经T载体克隆测序正确后,双酶切回收cDNA片段定向插入到pcDNA3·1(+)中,通过酶切鉴定其真核表达载体的构建。然后将其转染到真核细胞中,通过NTE活力测定,检测其表达效果。结果经PCR获得了NTE的1·6kb酯酶活力域的cDNA片段,T载体克隆后测序证实完全正确,然后克隆到真核表达载体中获得了NTE酯酶活力域真核表达载体pcDNA-NEST。瞬时转染到COS7和SH-SY5Y细胞中,NTE的活力与对照细胞相比显著提高。结论成功构建了NEST真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达。
- 常平安陈瑞李薇伍一军
- 关键词：哺乳动物细胞
- 两种有机磷酸酯对人成神经细胞瘤细胞生长与钙摄取的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨具有迟发性神经毒性的有机磷酸酯 (organophosphates,OPs)对人成神经细胞瘤细胞SH SY5Y的毒性作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定SH SY5Y细胞活力 ;用培养的SH SY5Y细胞与45CaCl2 和磷酸三邻甲苯酯 (tri o cresylphosphate ,TOCP)或甲胺磷共育后 ,洗脱 ,裂解 ,经液闪仪计数测定细胞对钙的摄取情况。结果 甲胺磷在较低浓度 (7× 10 -7～ 7× 10 -6mol/L)时可刺激SH SY5Y细胞的生长 ,在 7× 10 -7mol/L浓度时细胞的增长比对照增加了 2 8% ,而在高浓度 (7× 10 -4～ 7× 10 -3mol/L)时抑制细胞生长 ,在 7× 10 -3 mol/L时的抑制率为 6 2 % ;但TOCP只在高浓度 (7× 10 -3 mol/L)时才对细胞的生长有抑制作用 (抑制率为 34% )。TOCP在几乎所有的测试浓度下都对SH SY5Y细胞的钙摄取量有影响 :在低浓度 (1× 10 -9～ 1× 10 -7mol/L)时刺激细胞的钙摄取 ,细胞的钙摄取量最高增加 2 4 1% ,但在高浓度 (1× 10 -6～ 1× 10 -4mol/L)时抑制细胞的钙摄取 ,最高的抑制率达 5 5 %。结论 OPs的神经毒性可能涉及阻遏神经细胞生长和干扰细胞钙平衡。
- 李明常平安李玉侠李薇伍一军
- 关键词：杀虫药有机磷酸酯钙细胞生长
- 神经病靶标酯酶调控结构域结合蛋白筛选及其在COS-7细胞中的表达
- 2005年
- 本研究采用酵母双杂交系统探寻与神经病靶标酯酶(NTE)调控结构域相互作用的蛋白因子,揭示与NTE信号转导相关的可能机制。通过构建含有NTE调控结构域的诱饵蛋白载体筛选胎脑文库,并将筛选得到的阳性克隆在酵母中进行了验证,随后在哺乳动物细胞中表达了该蛋白。生物信息学分析显示:该阳性克隆为前列腺素受体结合蛋白54(ARA54),具有泛素连接酶活性,提示细胞可能存在依赖于细胞周期的NTE活性调节机制,为阐明NTE生理功能创造了条件[动物学报51(5):840-844,2005]。
- 陈瑞杨琳姚智刘承云李晓华李琴刘杰常平安李薇伍一军
- 关键词：酵母双杂交系统泛素
- 野桑蚕、蓖麻蚕及家蚕基因组的RFLP分析被引量：4
- 2005年
- 以家蚕Bombyx mori丝素重链基因、丝胶基因1和胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因为探针,对野桑蚕B.mandarina、蓖麻蚕Philosamia cynthia ricini和家蚕B.mori基因组DNA进行限制性片段长度多态性分析。结果发现,在野桑蚕、蓖麻蚕基因组中存在着家蚕丝素重链基因、丝胶基因1的同源序列,而在中日野桑蚕以及蓖麻蚕品种间存在着限制性酶切位点差异;丝胶基因1在中国野桑蚕基因组的EcoRⅠ酶切图谱较日本野桑蚕与家蚕更为一致,表明家蚕与中国野桑蚕亲缘关系更近。此外,在野桑蚕基因组中发现了家蚕胰凝乳蛋白酶抑制因子13基因的同源序列,并且在家蚕品种间以及中日野桑蚕之间也存在着多态性。这些结果表明不同绢丝昆虫在适应生存环境的进化过程中,基因组发生了结构改变。
- 常平安宋方洲易发平鲁成刘运强伴野丰藤井博
- 关键词：野桑蚕蓖麻蚕家蚕限制性片段长度多态性
- 神经病靶标酯酶在人成神经瘤细胞分化中的作用
- 神经病靶标酯酶(neuropathy target esterase,NTE)是在开展有机磷诱导的迟发性神经神经病(organophosphate-induced delayed neuropathy,OPIDN)机理的...
- 常平安
- 关键词：细胞分化细胞周期细胞骨架有机磷酸酯氨基甲酸酯
- 文献传递
- 唐松草属植物活性成分和药理作用研究进展
- 本文从资源分布、化学成分、药理作用三方面对唐松草属植物活性成分的研究进行了综述,并对其应用前景进行了展望.
- 唐坤蔡应繁王伯初常平安
- 关键词：中药药理药物活性唐松草
- 文献传递
- 体外测试甲胺磷对神经细胞生长及突触体45Ca摄取的影响
- 体外测试了有机磷杀虫剂甲胺磷对神经细胞生长及脑突触体钙摄取的影响。结果表明:甲胺磷在较低浓度（0.1-1μg/ml）时可刺激成神经细胞瘤细胞生长,而在高浓度（100-1000μg/ml）却使成神经细胞瘤细胞的生长速度明显...
- 李明常平安李玉侠李薇冷欣夫伍一军
- 关键词：甲胺磷神经细胞突触体钙摄取
- 文献传递
- 陆地棉锌指蛋白(GZFP)的原核表达被引量：2
- 2007年
- 采用大肠杆菌表达体系来获得陆地棉锌指蛋白(GZFP)的融合蛋白.以pMD18-GZFP质粒为模板,用PCR方法扩增获得GZFP基因的编码区序列,将其克隆到表达载体pET28b(+)中,转化宿主菌BL21(DE3),成功地构建了陆地棉GZFP基因原核表达载体pET-GZFP、经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析和蛋白质杂交检测表明,陆地棉GZFP以融合蛋白的形式在大肠杆菌中得到大量表达.
- 常平安杨召军温镭魏荣
- 关键词：锌指蛋白原核表达陆地棉
- 神经病靶标酯酶的增强表达抑制哺乳动物细胞的增殖
- 目的:探索神经病靶标酯酶(NTE)在哺乳动物细胞中的生理功能。方法:通过基因重组构建NTE酯酶活性区段(NEST)和GFP标记的NTE表达载体,转染哺乳动物细胞COS-7和人成神经瘤细胞SK-N-SH,利用蛋白质杂交和酶...
- 常平安陈瑞李薇伍一军
- 关键词：哺乳动物细胞增殖分化细胞周期
- 文献传递
- 鸡GDE4编码基因的克隆与分析被引量：1
- 2013年
- 为了揭示鸡甘油磷酸二酯磷酸二酯酶4(GDE4)的结构和功能,采用逆转录PCR的方法克隆了其编码cDNA序列,并对其进行了详尽的生物信息学分析。结果表明,鸡GDE4编码cDNA含有939个核苷酸,编码312个氨基酸;鸡GDE4具有典型甘油磷酸二酯酶蛋白结构域,是一种跨膜蛋白;GDE4是一种进化保守蛋白,在物种间具有较高的一致性;鸡GDE4的三维结构与磷酸丙糖异构酶桶状结构域结构相似,并且其催化位点位于其中。
- 曾鑫常平安李月华曲绮雯杨雪娇黄飞飞
