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屈昱良: 作品数：16 被引量：18H指数：3; 供职机构：宁夏医科大学临床医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教农业科学更多>>

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结核分枝杆菌H37Ra感染的THP-1细胞TGF-β1、Smad2、Smad3、TNF-α、IL-6 mRNA表达变化被引量：5: 2022年; 目的观察结核分枝杆菌H37Ra在不同感染复数及不同感染时间感染的THP-1细胞内TGF-β1/Smad2、3信号通路活化以及炎症因子TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达变化,明确TGF-β1/Smads经典信号通路的激活程度是否与结核分枝杆菌感染的细菌量有关以及在结核分枝杆菌感染后的哪个时间阶段发挥主要作用。方法培养THP-1巨噬细胞及结核分枝杆菌H37Ra,建立H37Ra在相同时间点(感染24 h)不同感染复数(MOI=0、1、10、100)和在MOI=10,不同感染时间点(T=0 h、6 h、12 h、24 h)感染THP-1细胞的感染模型;用qRT-PCR检测不同感染复数及不同感染时间THP-1细胞中TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA。结果H37Ra感染24 h时,与空白对照比较,当MOI=1、10、100时,TGF-β1 mRNA的相对表达量先升高后降低,在MOI=10时表达最高(P<0.05);Smad2 mRNA的相对表达量降低(P<0.05);Smad3 mRNA相对表达量升高(P<0.05);TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达变化趋势基本一致,在MOI=1、10时升高不明显(P>0.05),MOI=100时升高(P<0.05)。H37Ra MOI=10时,随感染时间(T=6 h、12 h、24 h)延长,TGF-β1 mRNA的相对表达量呈现升高趋势(P均<0.05);Smad2 mRNA的相对表达量呈降低趋势(P<0.05);Smad3 mRNA相对表达量呈先升高后降低趋势,在T=6 h最高(P<0.05);TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达变化趋势基本一致,呈先升高后降低趋势,在T=12 h时最高(P<0.05)。结论相同感染时间,随着MOI值增加,结核分枝杆菌H37Ra感染的THP-1巨噬细胞中TGF-β1 mRNA表达先上调后降低,Smad2 mRNA表达下调,Smad3 mRNA表达上调,TNF-αmRNA、IL-6 mRNA相对表达量在MOI=100时升高;MOI=10时,随着感染时间延长,结核分枝杆菌H37Ra感染的THP-1巨噬细胞中TGF-β1 mRNA相对表达量升高,Smad2 mRNA表达下调,Smad3 mRNA表达先升高,6 h后降低,TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达早期上调,12 h后降低。结核分枝杆菌感染的细菌量与TGF-β1/Smads经典信号通路的激活程度有关,结核分枝杆菌感染后的; 王立楠李艳宁刘建屈昱良郭乐杨宗强杨宗强; 关键词：白细胞介素6

噬菌体纳米抗体展示库构建中电转化条件的优化: 2021年; 目的对DNA电转化条件进行优化,以达到高的转化效率。方法测定不同生长阶段的大肠杆菌TG1、不同电压、不同外源基因(噬菌体质粒pCANTAB5e与驼源VHH片段的连接产物)质量、T4 DNA连接酶去除前后及转化孵育后不同培养温度等条件下的电转化效率,寻找最适电转化条件。结果当大肠杆菌TG1处于生长对数期(OD600为0.4左右)时制备电感受态细胞,取用乙醇沉淀法去除T4 DNA连接酶后的0.7μg连接产物,在电压2.3 kV、电容25μF、电阻200Ω的条件下,采用0.2 cm的电击杯进行电转化,将获得高的转化效率,达7.9×10^(7)CFU/μg DNA,而转化后的培养温度(30℃和37℃)对电转化效率并没有明显影响。结论经优化电转化条件后得到了高的电转化效率,为构建抗体库奠定基础。; 李艳宁李光琪屈昱良潘俊斐楚元奎张晓春徐广贤; 关键词：噬菌体抗体库电转化

TGF-β1、Smad2及Smad3在脊柱结核诊疗中的价值被引量：1: 2022年; 目的:研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2(drosophila mothers against decapentaplegic 2)及Smad3在脊柱结核诊断及疗效评价中的价值。方法:纳入2018年9月~2019年6月在宁夏医科大学总医院治疗的确诊为脊柱结核(观察组)和椎间盘退变(对照组)患者各35例,分析两组患者临床资料并收集椎间盘病变组织,同时收集观察组术前、术后6个月和术后1年(分别定义为A组、B组和C组)及对照组术前的外周血标本。提取椎间盘组织及外周血标本的RNA,荧光定量PCR法扩增TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA,免疫组化染色法检测其在椎间盘组织中的表达水平,ELISA法测定其在外周血中的蛋白表达水平。t检验分析各指标在组间及组内的表达差异;ROC曲线分析各指标单独及分别联合ESR、CRP诊断脊柱结核的价值;曲线回归分析各指标与脊柱结核患者临床资料的相关性。结果:在椎间盘mRNA水平,观察组TGF-β1、Smad2及Smad3表达高于对照组(P<0.05)。在椎间盘蛋白水平,观察组TGF-β1、Smad2及Smad3均为阳性表达,对照组均为阴性表达。在外周血mRNA水平,A组TGF-β1和Smad3表达高于对照组,B组表达低于A组(P<0.01),C组表达低于B组(P>0.05);Smad2表达水平在组间及组内比较时均为P>0.05。在外周血蛋白水平,A组TGF-β1表达高于对照组(P<0.01),B组表达低于A组(P<0.01),C组表达低于B组(P>0.05);Smad2和Smad3表达水平在组间及组内比较时均为P>0.05。ROC曲线显示外周血TGF-β1 mRNA、TGF-β1蛋白、Smad3 mRNA单独及分别联合ESR、CRP诊断脊柱结核的AUC分别是0.7800、0.8000、0.8352、0.8219、0.8705、0.8819、0.7410、0.7552、0.8000,敏感性分别是93.33%、73.33%、86.67%、70.00%、90.00%、80.00%、46.67%、46.67%、80.00%,特异性分别是54.29%、80.00%、80.00%、91.43%、88.57%、94.29%、100.00%、100.00%、85.71%(均为P<0.01)。曲线回归分析表明外周血TGF-β1和Smad3在mRNA水平表达呈显著正相关(R2=0.; 王辉王立楠林剑文郭乐蒋丹屈昱良翟学峰牛宁奎; 关键词：脊柱结核转化生长因子Β1 SMAD2 SMAD3

泛素连接酶SMURF1催化ADAR1的多聚泛素化修饰: 2023年; 既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物,发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合,RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中,Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR 1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞,Western印迹检测显示,过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体,通过Co-IP和Western印迹检测结果证实,过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后,Western印迹检测结果表明,蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明,SMURF1可以与ADAR1相互作用,催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解,为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。; 周文淼王红霞刘昆梅刘菁屈昱良郭乐; 关键词：泛素化翻译后修饰

细胞自噬模型miRNA差异表达谱的生物信息学分析及miR-129-3p抑制细胞自噬促进BCG胞内存活的机制研究: 目的运用高通量测序和生物信息学技术手段，分析与筛选新的可能参与细胞自噬调控的miR-129-3p;探究miR-129-3p通过靶向调控自噬相关基因Atg4b进而影响细胞自噬以及结核分枝杆菌发生免疫逃避的机制。　　方法利...; 屈昱良; 关键词：细胞自噬差异表达谱生物信息学; 文献传递

一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用: 本发明提供了一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用，属于免疫学技术领域。本发明提供了艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体的氨基酸序列。采用噬菌体展示技术，将带有恒定区特定基因序列插入到噬菌体编码外壳蛋白...; 徐广贤方媛郭乐潘俊斐蒋丹屈昱良

LncRNA Gas5通过竞争性结合miR-181c-5p调控巨噬细胞自噬影响结核分枝杆菌的胞内存活: 徐向荣蒋丹屈昱良王羡方媛郭乐徐广贤

脊柱结核患者椎间盘病灶组织中环状RNA表达的初步筛选和功能分析被引量：3: 2021年; 目的利用基因芯片技术筛选脊柱结核患者椎间盘病灶组织中差异表达的环状RNA(circRNA)并分析其在脊柱结核发生发展中可能的分子作用机制。方法选取2019年1月至2020年12月就诊于宁夏医科大学总医院脊柱骨科手术治疗的脊柱结核患者3例作为实验组,腰椎间盘退变手术治疗的患者3例作为对照组,收集术中切除的间盘组织,利用Arraystar Human circRNA Array V2芯片检测并采用独立样本t检验进行数据分析筛选出两组差异表达的circRNA;用生物信息学软件预测差异circRNA可能靶向作用的微小RNA(miRNA);对差异表达的circRNA分子的亲本基因进行基因本体(GO)生物学过程富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果脊柱结核患者的间盘病灶组织中差异表达的circRNA(差异倍数>2,P<0.05)共有1 396条,其中有757种表达上调,639种表达下调;hsacirc0031968、hsacirc0001806、hsacirc0077607、hsacirc0071312、hsacirc0062683表达显著上调;hsacirc0004183、hsacirc0000367、hsacirc0000691、hsacirc0006220、hsacirc0043278表达显著下调;对所有差异表达的circRNA的亲本基因进行GO分析发现其主要参与细胞蛋白分解代谢、三磷酸鸟苷(GTP)酶结合、组蛋白修饰、转录因子结合、蛋白激酶激活等过程;经KEGG通路分析发现其主要富集在内质网中的蛋白质加工、细胞凋亡、蛋白水解、环鸟苷酸-蛋白激酶G、腺苷酸活化蛋白激酶、EB病毒感染等信号通路。结论脊柱结核患者椎间盘病灶组织中差异表达的circRNA可能与脊柱结核的发生和发展密切相关。; 王立楠郭乐张旭张旭屈昱良师志云杨宗强杨宗强; 关键词：脊柱结核功能注释

一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用: 本发明提供了一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用，属于免疫学技术领域。本发明提供了艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体的氨基酸序列。采用噬菌体展示技术，将带有恒定区特定基因序列插入到噬菌体编码外壳蛋白...; 徐广贤方媛郭乐潘俊斐蒋丹屈昱良; 文献传递

嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞体外培养体系及慢病毒侵染条件的优化被引量：1: 2020年; 目的优化嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞的体外培养体系及慢病毒侵染条件。方法CD3磁珠分离纯化健康人外周血单个核细胞(PBMC)及健康孕妇脐带血单个核细胞(UCBMC),于8种不同培养体系进行扩增培养,培养体系包括以下成分的不同组合:重组人白细胞介素2(rhIL-2)、rhIL-12、rhIL-18、rhIL-7、rhIL-21、TWS119。分别于第0、3、5、7、10、18天进行细胞计数检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达,ELISA检测γ干扰素(IFN-γ)释放,优化T细胞体外培养体系。采用(0、20、50)μg/mL重组人纤连蛋白(RetroNectin^■),(250、500、1000)ng/mL抗人CD3/CD28抗体包被培养板,以感染复数(MOI)=3、5的阴性对照慢病毒侵染T细胞72 h,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,初步判断病毒侵染效率;流式细胞术检测CD3/GFP阳性率,以获得慢病毒侵染条件。包装CD19 CAR慢病毒,实时荧光定量PCR、Western blot法检测是否成功构建CD19 CAR慢病毒载体,采用以上优化的病毒侵染条件及T细胞培养体系,包括建立rhIL-2、rhIL-12联合rhIL-18培养体系,使用1μg/mL抗人CD3/CD28,20μg/mLRetroNectin^■包被培养板,制备CD19 CAR-T细胞。结果细胞增殖能力较佳体系为rhIL-2联合rhIL-18,IFN-γ释放最强体系为rhIL-2、rhIL-12联合rhIL-18。抗CD3/CD28抗体剂量为1μg/mL,RetroNectin^■20μg/mL,MOI为3时病毒侵染效率最优。该优化条件下CAR-T细胞阳性率达34%。结论获得优化的CD19 CAR-T细胞体外培养体系及慢病毒侵染原代T细胞条件。; 王红霞潘俊斐蒋丹屈昱良李艳宁李光琪楚元奎张晓春徐广贤; 关键词：脐带血

屈昱良

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