尹鑫
- 作品数：28 被引量：56H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达
- 本实验从鸡胚肾组织中克隆到表达鸡氨肽酶N的全长基因，将扩增到的全长鸡氨肽酶N基因连接到pMD18-T载体并转化大肠杆菌感受态TG1，提取重组质粒，经PCR及酶切鉴定阳性后送测序，结果与公布序列符合率达99.48％，与预期...
- 明晓波张颖尹鑫魏萍王宗尉李若飞
- 关键词：鸡传染性支气管炎氨肽酶N基因克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 不同日龄雏鸡各组织中氨肽酶N酶活性比较
- 本实验通过采取5个不同日龄雏鸡的心、肝、脾、肺、肾、腺胃、胸肌、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、法氏囊等十二个组织器官，提取各组织中的总蛋白，通过BCA试剂盒测定各组织的蛋白浓度，使等量各组织总蛋白与等量Leu-PNA在37...
- 明晓波张颖谭睿尹鑫魏萍
- 关键词：雏鸡传染性支气管炎氨肽酶N酶活性组织嗜性
- 文献传递
- 荧光定量PCR方法检测IBV病毒在CEK细胞中的动态变化被引量：2
- 2010年
- 为揭示鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在鸡胚肾细胞(CEK)中复制增殖的动态变化规律,通过实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测IBV病毒感染CEK3、6、12、24、36、48、72h后病毒增殖量的动态变化。结果显示,随着时间增加,IBV病毒增殖出现规律性变化,3～12h时IBV增殖不明显,36h时IBV开始大量复制,48h时达到高峰,但72h后有所下降。试验表明IBV在细胞内复制增殖的最佳时间在接毒后48h,其复制增殖情况与细胞状态负相关。
- 张颖刘澜澜王占锋尹鑫魏萍
- 关键词：荧光定量PCR
- 2009年黑龙江省部分地区猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪伪狂犬病抗体检测及相关性研究被引量：3
- 2010年
- 为掌握黑龙江省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的流行情况,探讨猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)之间的相关性,采用ELISA法对2009年黑龙江省部分地区418份血清样品进行抗体检测,通过统计学手段对PRRS、CSF与PR之间的相关性进行分析。结果表明:黑龙江省部分地区PRRS具有流行趋势,PRRS、CSF与PR混合感染现象严重;PRRS与CSF具有较强的正相关性,相关性系数为0.518;PRRS与PR相关性较弱,相关性系数为0.152。
- 尹鑫刘运枫魏萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪瘟猪伪狂犬病
- 不同日龄雏鸡各组织中氨肽酶N酶活性比较
- 本实验通过采取5个不同日龄雏鸡的心、肝、脾、肺、肾、腺胃、胸肌、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、法氏囊等十二个组织器官,提取各组织中的总蛋白,通过BCA试剂盒测定各组织的蛋白浓度,使等量各组织总蛋白与等量Leu-PNA在37...
- 明晓波张颖谭睿尹鑫魏萍
- 关键词：蛋白质提取氨肽酶N酶活性测定组织嗜性细胞受体
- 文献传递
- 鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达
- 本实验从鸡胚肾组织中克隆到表达鸡氨肽酶N的全长基因,将扩增到的全长鸡氨肽酶N基因连接到pMD18-T载体并转化大肠杆菌感受态TG1,提取重组质粒,经PCR及酶切鉴定阳性后送测序,结果与公布序列符合率达99.48%,与预期...
- 明晓波张颖尹鑫魏萍王宗尉李若飞
- 关键词：氨肽酶N基因克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立被引量：12
- 2011年
- 为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,作者将BVDVNS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联,构建重组表达载体pET-30a-EXnN,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白(r-BVDV-EX6N)作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好,与2种商品化试剂盒的符合率分别为96.05%和78.95%。试验结果表明建立的ELISA方法可用于BVDV NS3蛋白抗体的检测。
- 贾莹李岩尹鑫温凯刘华张文龙王君伟
- 关键词：BVDVNS3蛋白间接ELISA
- 3种受体抑制剂对鸡传染性支气管炎病毒感染鸡胚肾细胞的影响被引量：1
- 2011年
- 本研究旨在阐明鸡氨肽酶N(chAPN)、唾液酸以及硫酸乙酰肝素在传染性支气管炎病毒(IBV)M41株感染宿主细胞中的作用以及3种受体特异抑制剂对IBV M41株在自然宿主CEK细胞内增殖能力的影响。作者选择苯丁抑制素(Bestatin)、神经氨酸酶(NA)和肝素酶Ⅲ分别作为APN、唾液酸以及硫酸乙酰肝素的抑制剂,在不同条件下,单独或共同预处理CEK细胞,而后接入IBV M41株病毒感染细胞,应用荧光定量PCR方法定量检测IBVM41株在CEK细胞中的增殖变化,应用鸡胚半数感染剂量法(EID50)测定病毒感染鸡胚能力的变化。结果表明,经Bestatin和NA处理的CEK细胞获得了抵抗IBV M41株感染的能力,与未经处理的(对照组)细胞相比,Besta-tin和NA能显著降低IBV M41株在CEK细胞内的增殖及对鸡胚的感染能力(P<0.01),且Bestatin处理后CEK细胞内的病毒增殖量显著低于NA处理后CEK细胞内的病毒增殖量,两者病毒液的EID50滴定值差异显著(P<0.01);肝素酶Ⅲ的处理则对病毒增殖无显著影响;3种受体抑制剂共同处理CEK细胞后,病毒增殖量显著下降(P<0.01),但仍有病毒增殖,病毒液的EID50滴定值为102.12±0.05.0.1mL-1。结果提示,chAPN在IBV感染宿主细胞的过程中发挥特异性受体作用,而唾液酸在IBV感染宿主细胞中发挥辅助受体作用,硫酸乙酰肝素不是IBV在自然感染中的必需因素,同时提示,可能存在其他未知受体因子参与IBV感染宿主细胞的过程。
- 尹鑫张颖刘澜澜魏萍
- 关键词：IBVBESTATIN神经氨酸酶受体
- 内蒙古地区牛冠状病毒的分离鉴定及S1基因遗传进化分析被引量：2
- 2023年
- 为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时通过序列比对分析与GenBank中具有代表性的BCoV S1基因组序列的同源性,利用MEGA 7.0.14软件构建S1基因组系统进化树。结果表明:9份样本中有2份为BCoV N基因阳性,PCR扩增得到大小约为730 bp的目的条带;用阳性样本接种HRT-18G细胞并进行3次传代培养,可见细胞出现以变圆、融合形成合胞体、融合细胞脱落为主要特征的典型细胞病变;分离株能够与兔抗BCoV N蛋白的多克隆抗体发生特异性反应,透射电镜观察可见有囊膜、表面有纤突、直径约为120 nm的病毒粒子;将分离获得的BCoV毒株命名为HM-XC,该分离株感染HRT-18G细胞的病毒含量为1×10^(5.75)TCID_(50)/0.1 mL;分离株HM-XC S1基因的核苷酸序列与我国青海省牦牛源毒株BCoV Yak/BCoV-China/QH1的相似性最高,为99.61%,与近年来辽宁省流行毒株的相似性为96.4%~99.0%,与美国经典参考毒株BCoV Mebus的相似性较低,为96.3%;与相似性最高的Yak/BCoV-China/QH1毒株相比,分离株HM-XC的S1蛋白存在7个氨基酸突变,分别是H115D、S186W、Y509H、V528A、N531D、L563S和I640T。说明内蒙古地区牛场中已有BCoV的流行,并且在犊牛腹泻粪便中分离获得BCoV内蒙古流行毒株,分离株具有我国新流行BCoV株的序列特征。
- 梁彤曹存于德斌王芳姜志刚徐晓静刘春东尹鑫常继涛
- 关键词：牛冠状病毒
- SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1在不同细胞中的表达鉴定被引量：1
- 2013年
- SAMHD1是最近发现的在人髓系细胞中发挥抗艾滋病毒作用的一种天然蛋白。为制备抗人huSAMHD1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的人huSAMHD1重组蛋白为免疫原,经腹腔免疫4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法筛选和4次有限稀释法克隆纯化,获得了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的MAb与人huSAMHD1的真核表达蛋白呈阳性反应,而与猴、马SAMHD1的真核表达蛋白呈阴性反应,表明其具有很好的特异性,可以用于ELISA、免疫荧光和免疫印迹检测以及对huSAMHD1的进一步研究。
- 戈曼吴星亮尹鑫魏萍王晓钧
- 关键词：单克隆抗体ELISA免疫荧光免疫印迹
