吴思娴
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省教育部产学研结合项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 莪术油有效成分联合金丝桃苷抗紫外辐射作用研究被引量：1
- 2013年
- 目的:研究莪术油有效成分以及联合金丝桃苷对3T3细胞紫外辐射损伤的保护作用。方法:建立3T3细胞紫外辐射模型,采用流式细胞术检测莪术油有效成分(莪术醇和吉马酮)以及联合金丝桃苷作用前后细胞内活性氧浓度的变化,检测胞质匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量变化。结果:流式细胞术检测结果显示,与UVB组比较,各给药组的活性氧含量显著降低(P<0.01),其中以联合给药组最为显著(P<0.01)。抗氧化指标检测结果显示,与UVB组比较,吉马酮组、莪术醇组以及三者联合给药组的SOD、CAT和GSH-Px活性均显著升高(P<0.01),而MDA含量显著降低(P<0.01)。金丝桃苷组的SOD活性显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01),而CAT和GSH-Px活性无显著性差异(P>0.05)。联合给药组的SOD活性升高最为显著(P<0.01),而CAT、GSH-Px酶活性和MDA含量差异不显著。结论:莪术油有效成分能提高SOD、CAT、GSH-Px等酶活性,降低活性氧和MDA含量。联合金丝桃苷能进一步降低活性氧的生成,提高SOD活性,对UVB辐射造成的细胞损伤具有协同保护作用。
- 贝煜李宗奕赵文吴思娴张卉肖巧学黄亚东项琪
- 关键词：金丝桃苷紫外辐射3T3细胞
- 一种合成人血小板因子4基因的简便有效方法(英文)
- 2005年
- 目的:用一种简便有效的方法合成hPF4基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。方法:根据hPF4基因的序列,用touch-down PCR的方法合成hPF4基因,将合成的基因片断克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建了重组质粒pGEX-4T-1-hPF4,并将之转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达由谷胱甘肽转移酶和hPF4组成的融合蛋白。结果:用touch-down PCR的方法成功合成了hPF4基因。融合蛋白形成包含体,表达量约为全菌体蛋白的30%。结论:Touch-down PCR方法可作为合成其它目的基因的简便有效方法。BL21(DE3)/pGEX-4T-1表达系统能高效表达合成的hPF4基因,为下一步hPF4的纯化与生物学活性研究打下了基础。
- 吴晓萍苏志坚郑青吴思娴许华赵文李校堃
- 关键词：基因合成基因表达
- 一种缺失核定位信号区的hbFGF的表达及纯化(英文)
- 2005年
- 目的:为了研究缺失核定位信号区的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)独特的转运机制,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化了缺失核定位信号区的hbFGF。方法:将PCR扩增得到的hbFGFcDNA片断克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白,MTT法检测促分裂活性。结果:hbFGF的表达量约为全菌体蛋白的20%,纯化的缺失核定位信号区的hbFGF的促分裂活性与缺失核定位信号区的hbFGF标准品相当。结论:BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达缺失核定位信号区的hbFGF,纯化得到的hbFGF可用于进一步的研究。
- 吴晓萍苏志坚郑青吴思娴冯雅曲红艳许华李校堃
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子核定位信号纯化
- 人碱性成纤维细胞生长因子突变体的高效表达被引量：4
- 2005年
- 用PCR法将人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因中编码第2 5、69和92位的半胱氨酸(Cys)密码子突变为丝氨酸(Ser)密码子,将突变的hbFGFcDNA片断与表达质粒pET3c连接,构建重组质粒pET3c hbFGFSer2 5,69,92 。hbFGFSer2 5,69,92 在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中的表达量大于30 %。通过阳离子交换和肝素亲和层析两步纯化,得到纯度大于95 %的hbFGFSer2 5,69,92 。MTT法测定纯化的产物活性表明,hbFGFSer2 5,69,92 突变体促Balb/c细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当,为下一步对hbFGFSer2 5 ,69,92 突变体进行定点化学修饰打下了基础。
- 吴晓萍李校堃苏志坚郑青吴思娴
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子突变体阳离子交换生物学活性化学修饰蛋白质类药物
- 一种促分裂活性降低的hbFGF突变体的表达及纯化(英文)被引量：1
- 2005年
- 为了降低由人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的广谱促分裂活性引起的潜在副作用,用中性氨基酸丙氨酸取代了hbFGF第108位的丝氨酸,构建了促分裂活性降低的hbFGF突变体(mhbFGF)。IPTG诱导突变体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。mhbFGF的表达量约为全菌体蛋白的30％。通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白。MTT法检测促分裂活性表明,mhbFGF的促分裂活性显著低于野生型hbFGF。纯化的:mhbFGF可用于进一步的药效和安全性研究。
- 吴晓萍李校堃苏志坚郑青吴思娴许华曲红艳
- 关键词：FGF活性人碱性成纤维细胞生长因子突变体IPTG
