吕振华
- 作品数：56 被引量：368H指数：9
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青岛市科技发展计划项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腰椎间盘内X型胶原基因表达的观察被引量：1
- 2004年
- 西永明胡有谷吕振华郑洪军陈岩齐宗华
- 关键词：腰椎间盘X型胶原基因表达
- 体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901被引量：19
- 2007年
- 目的：观察CIK细胞增殖情况，了解扩增后的最佳应用时机，并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞，计数培养不同时间的CIK细胞，用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性，对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用，并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长，数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍，CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％，其后两者数量增长缓慢；体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用，最高杀伤效率为73．13％，其杀伤作用优于5-FU，P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性；体外培养15～20d时应用较为合适；联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。
- 代震波毛伟征牛兆建曹永献隋爱华刘希春吕振华
- 关键词：细胞因子诱导杀伤细胞胃癌细胞株SGC-7901
- 重组mOP-1原核细胞高效表达和纯化的研究
- 2004年
- ①目的 探讨重组mOP 1 (rmOP 1 )的克隆化、原核高效表达载体的构建以及rmOP 1制备和纯化简单有效方法。②方法 于胎龄为 2周的CD 1小鼠胚胎组织中提取、纯化mRNA ,应用ligo(dT)引物反转录酶合成cDNA ,PCR筛选扩增OP 1全长开放读框 ,产物TA克隆入质粒载体pCR 3.1 Uni;亚克隆入高效原核表达载体pTrcHis2B ,经大肠杆菌JM 1 0 9、IPTG诱导表达rmOP 1蛋白 ;经Ni NTA树脂纯化 ,SDS PAGE分析。 ③结果限制性酶切分析、DNA测序确认mOP 1的全长开放读框 ,Ni NTA亲和层析纯化重组蛋白PAGE分析满意。④结论 胚胎期约 2周的CD 1小鼠有OP 1mRNA的高水平表达 ,RT PCR筛选OP 1全部开放读框 ,产物TA克隆化方法便捷 ,原核高效表达质粒 pTrcHis 2B能够方便、快速回收和纯化重组蛋白。
- 李延江郑宝钟吕振华孙立江
- 关键词：原核细胞纯化提纯
- LIGHT基因和干扰素-γ转染诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究
- 2009年
- 目的探讨脂质体介导LIGHT基因和IFN-γ转染诱导肝癌HepG2细胞的促凋亡作用。方法以脂质体介导LIGHT基因和IFN-γ转染肝癌HepG2细胞，设立转染组（单转、联合转染组）和对照组（未转染组）。分别于转染后12、24、48h检测肝癌HepG2细胞的凋亡率、Bcl-2及Caspase-8的表达量，并采用方差分析。结果（1）细胞凋亡率：单转组转染后12、24、48h为18．8％±3．5％、25．7％±2．8％、36．4％±3．6％；联合转染组为23．8％±2．4％、31．1％±2．1％、42．5％±4．5％；对照组为8．7％±2．1％、9．3％±1．6％、10．9％±1．2％。3组比较差异有统计学意义（F=15．69，53．33，48．28，P〈0．01）。（2）Bcl-2表达量：单转组在转染后12、24、48h为16．4％±5．0％、13．4％±3．5％、8．6％±2．3％；联合转染组为14．7％±3．8％、9．1％±2．0％、4．6％±2．0％；对照组为25．3％±6．3％、19．8％±4．4％、10．1％±3．8％。3组比较差异有统计学意义（F=6．19，12．29，5．81，P〈0．05）。（3）Caspase-8表达量：单转组在转染后12、24、48h为19．3％±2．4％、27．2％±1．9％、33．7％±3．0％；联合转染组为22．7％±2．2％、30．9％±3．1％、38．2％±3．2％；对照组为1．2％±0．8％、1．8％±0．6％、3．2％±1．5％。3组比较差异有统计学意义（F=71．54，112．78，101．61，P〈0．01）。结论LIGHT基因转染肝癌HepG2细胞后通过调节Bcl-2及Caspase-8的表达来发挥促凋亡作用，IFN-1能增强LIGHT基因诱导肝癌HepG2细胞的凋亡。
- 李金朋吴力群韩冰卢云吕振华刘相萍杨堃隋爱华
- 关键词：肝细胞HEPG2细胞干扰素-Γ凋亡
- ACTH受体在人淋巴组织中的表达被引量：5
- 2004年
- 目的 通过检测ACTH受体及其mRNA在人淋巴组织中的表达情况 ,寻求神经内分泌系统 免疫系统之间功能双向调节的形态学依据。方法 应用免疫组化SP法及核酸分子原位杂交法检测ACTH受体及其mRNA在人淋巴结、脾脏及肠道淋巴组织中的表达。结果 免疫组化显示ACTH受体在人各种淋巴组织中表达的阳性率为 82 .5 % ,与原位杂交阳性率 70 .0 %之间的差异无显著性。结论 人的免疫活性细胞不但可以表达ACTH受体蛋白 ,还可以合成其mRNA ,ACTH受体为神经内分泌系统 免疫系统网络共有的生物学语言媒介 。
- 孟云霄纪祥瑞李玉军孙显路吕振华
- 关键词：淋巴组织免疫组织化学原位杂交
- FasL mRNA在椎间盘细胞中表达的分布被引量：3
- 2008年
- 目的观察凋亡相关基因FasL mRNA在椎间盘细胞中表达的分布。方法收集胎儿及成人病理腰椎间盘髓核标本,PHA-P激活单个核细胞诱导FasL表达,提取总RNA,RT-PCR制备FasL基因片段。定向克隆入质粒载体pSPT19多克隆位点构建重组质粒,体外转录制备Dig-FasL cRNA探针。cRNA探针原位杂交进行FasL mRNA表达分布的观察。结果克隆化FasL序列经DNA测序准确无误,体外转录cRNA探针标记效果满意;胎儿腰椎间盘组织脊索细胞、软骨样细胞中可检测到FasL mRNA的较高杂交信号,成人突出椎间盘细胞中罕见正常细胞,未检出FasL mRNA信号。结论FasL基因在胎儿期腰椎间盘细胞内表达,细胞凋亡发生早。成年时期,细胞数急剧减少,代谢功能低下,无法检出凋亡基因表达。
- 司春祥陈伯华吕振华
- 关键词：椎间盘原位杂交
- 促肾上腺皮质激素受体在人淋巴组织中表达的研究
- 2003年
- 孟云霄纪祥瑞姜天福孙显路吕振华
- 关键词：ACTH受体促肾上腺皮质激素淋巴组织免疫活性细胞相关性疾病
- 腰椎间盘纤维性主胶原基因表达的观察被引量：24
- 1998年
- 目的探讨腰椎间盘组织主要胶原成分——Ⅰ型、Ⅱ型胶原在细胞中基因表达的规律，作为今后的基因调控工作的基础。方法利用核酸分子的原位杂交技术，分别以Ⅰ型、Ⅱ型胶原基因的ｃＤＮＡ探针对胎儿、成人和病理椎间盘组织切片中椎间盘细胞的胶原ｍＲＮＡ进行原位杂交，观察不同阶段胶原基因表达的水平。以胶原的特异性天狼星红染色进行不同阶段的胶原蛋白水平的观察。结果Ⅰ型胶原ｍＲＮＡ的阳性杂交信号集中于纤维环的外层，Ⅱ型胶原基因在髓核中高表达。成人和病理椎间盘组织中未检出Ⅱ型胶原基因的杂交信号，Ⅰ型胶原ｍＲＮＡ表达水平减弱，髓核中出现其阳性杂交信号。对胶原的天狼星红染色结果与之相符。结论随着年龄的增长，胶原基因表达的规律发生显著变化。成人和病理椎间盘呈现胶原基因的低表达，Ⅰ型、Ⅱ型胶原基因的表达出现异常现象；髓核内出现Ⅰ型胶原基因表达。
- 吕振华胡有谷冯传汉
- 关键词：椎间盘腰椎胶原原位杂交纤维性
- Epo及其受体在宫颈癌及癌前病变组织的表达被引量：1
- 2007年
- 目的了解促红细胞生成素(Epo)及其受体(EpoR)在宫颈癌及其癌前病变组织的表达及其意义。方法用半定量RT-PCR法,检测30例宫颈癌组织Epo、EpoR mRNA含量,用免疫组化PV-6000方法检测50例宫颈癌及其癌前病变组织Epo、EpoR蛋白表达,并与正常宫颈组织比较。结果Epo、EpoR mRNA在宫颈癌及正常宫颈组织中均有表达,在宫颈癌组织中的表达水平较高,各组间比较差异有显著性(F=11.83、173.73,q=4.83、10.86,P<0.05)。Epo、EpoR蛋白表达均为阳性,各组间表达率比较,差异有显著性(χ2=5.78、15.88,P<0.05),Epo、EpoR蛋白表达率随宫颈病变程度的加重明显增加;EpoR蛋白表达与Epo蛋白表达呈显著正相关(r=0.57,P<0.01)。结论Epo/EpoR的表达可能与宫颈癌发生发展有关。
- 王崇娟崔竹梅孙显路李玉军吕振华刘相萍
- 关键词：促红细胞生成素受体宫颈上皮内瘤样病变宫颈癌
- 人β-神经生长因子和神经生长因子基因重组真核表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 目的:入神经生长因子包括β-神经生长因子、神经生长因子这两种活性形式,拟分别构建这两种活性形式的基因重组真核表达载体,为进一步的转基因实验作好前期准备。方法:实验于2001～2004年在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①对象:健康志愿者5人,均对本实验知情同意。流产胎儿由青岛大学医学院妇产科提供,产妇均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:根据人β-神经生长因子与神经生长因子的全长基因序列设计合成特异性引物。抽取正常人外周血1.5 mL,提取基因组DNA后克隆出人β-神经生长因子基因片段。取胎儿海马部位脑组织100 mg,采用RT-PCR技术从胎儿脑组织中克隆出人神经生长因子基因片段。分别将纯化的β-神经生长因子产物与神经生长因子产物连接于真核表达载体pcDNA_4上,构建重组真核表达载体。转入JM109大肠杆菌中,扩增后小剂量质粒提取,酶切鉴定及计算机自动测序。结果:β-神经生长因子和神经生长因子的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示,在预期位置均有阳性条带。酶切鉴定结果及计算机自动测序均证实插入片段为目的基因片断。结论:实验分别从人外周血和胎脑海马组织中成功克隆获得β-神经生长因子与神经生长因子,并顺利构建这两种活性形式的重组真核表达载体pcDNA_4-β-NGF与pcDNA_4-NGF,为进一步将神经生长因子基因转入真核细胞并比较二者表达效率作好准备工作。
- 李东侃宋跃王传富张悦吕振华
- 关键词：神经生长因子
