单伟
- 作品数：64 被引量：161H指数：7
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- α-硫辛酸拮抗铅对幼年大鼠骨生长及代谢的影响
- 2009年
- 目的:探讨α-硫辛酸(LA)对染铅大鼠骨显微结构及骨髓生化指标的影响.方法:将SD大鼠随机分为2组,空白对照组和铅染毒组(230mg/L的醋酸铅灌胃),40d后各组取3只大鼠测血铅和骨铅,将已染铅大鼠随机分为4组,即铅对照组、3个LA治疗组[30,60,100mg/(kg.d)].LA治疗80d后处死动物,测定血铅、骨铅、HE染色观察骨小梁结构,免疫组化法检测碱性磷酸酶表达.结果:①LA各治疗组大鼠血铅、骨铅水平均低于铅对照组,差异有统计学意义(P<0.05).②LA100mg治疗组大鼠,HE染色观察骨小梁结构,碱性磷酸酶表达与铅对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:LA能够拮抗铅的骨毒性.
- 裴丹李俊林王志云单伟秦书俭郑德宇
- 关键词：Α-硫辛酸铅
- 维甲酸联合音猬因子诱导人脐带间充质干细胞分化为运动神经元被引量：5
- 2012年
- 目的：探讨单独和联合应用维甲酸（RA）与音猬因子（Shh）对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）向运动神经元分化的影响，为其进一步临床应用提供理论基础。方法：用双酶消化法提取纯化hUCMSCs，取传至第3代的hUCMSCs，检测表面抗原CD29、CD31、CD34、CD44的表达情况。根据培养液中加入不同诱导剂分为空白对照组，RA组（0．5μg／ml RA），Shh组（300ng／mlShh），RA＋Shh组（0．5μg／mlRA和300ng／ml Shh）。诱导细胞培养后第25天，观察细胞形态的变化；采用免疫细胞化学检测Nestin、MAP-2、Hb9和GFAP的表达，比较各组阳性率。用免疫印迹检测RA＋Shh组诱导后第5、10、15、20、25天Nestin、MAP-2、Hb9的表达情况。结果：流式细胞仪检测结果显示，CD29、CD44高表达，CD31、CD34阴性。空白对照组和Shh组细胞诱导后形态变化不明显，Nestin和MAP-2阳性表达率均很低，两者之间无差别。RA组和RA＋Shh组细胞诱导第25天后，细胞胞质以胞核为中心收缩，部分胞质收缩形成细胞的突起，突起之间有网状连接，具有典型的神经元样形态；Nestin和MAP-2的阳性表达率比其他2组增多。4组中只有RA＋Shh组细胞诱导后Hb9表达阳性，阳性率为33．62％，其他各组均无Hb9表达。各组GFAP表达阳性率均较低，无差异。免疫印迹检测结果显示，RA＋Shh组细胞从第5天起，可见Nestin的表达；第10天少量的MAP-2表达；第15天Hb9开始出现；第20天Nestin下降；第25天MAP-2和Hb9达到本次检测的高峰。结论：RA能促进hUCMSCs向神经元分化，单独使用Shh并没有明显效果，而RA联合Shh能促进hUCMSCs向运动神经元分化。
- 刘学元李德华单伟姜东房艳
- 关键词：人脐带间充质干细胞运动神经元维甲酸音猬因子
- 联合应用bFGF和维甲酸诱导hUCMSCs向神经元分化的实验研究
- 2012年
- 目的探讨单独和联合应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与维甲酸(RA)对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向神经元分化的影响,为其进一步临床应用提供理论基础。方法 hUCMSCs由天津国家干细胞中心提供。取传至第3代的hUCMSCs,根据培养液中加入不同诱导剂分为4组:空白对照组,不加任何诱导剂;bFGF组,加入20 ng/mL bFGF;RA组,加入0.5μg/mL RA;RA+bFGF组,加入0.5μg/mL RA和20 ng/mL bFGF。细胞诱导培养后第12 d,观察细胞形态的变化;采用免疫细胞化学方法检测神经前体细胞标记物Nestin、神经元标记物β-TubulinⅢ、神经胶质细胞标记物胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,每组随机选择8个视野计算阳性细胞数,比较各组细胞阳性表达比例。结果空白对照组和bFGF组细胞诱导后形态变化不明显,Nestin和β-TubulinⅢ阳性表达率均较低,但两者之间无统计学差别。RA组和RA+bFGF组细胞诱导第12 d后,细胞胞质以胞核为中心收缩,部分胞质收缩形成细胞的突起,突起之间有网状连接,具有典型的神经元样形态;RA+bFGF组的β-TubulinⅢ阳性表达率比RA组显著增高(P<0.01)。实验各组GFAP表达阳性率均较低,但无统计学差异。结论 RA能促进hUCMSCs向神经细胞分化,单独使用bFGF并没有明显效果,而RA联合bFGF能显著促进hUCMSCs向神经元分化。
- 刘学元李德华单伟姜东
- 关键词：人脐带间充质干细胞神经元碱性成纤维细胞生长因子维甲酸
- 不同分离方法对鼠胚胎成纤维细胞生长影响的比较被引量：5
- 2007年
- 目的:采用组织块培养法、单细胞悬液法、滤网过滤改良法分离培养鼠胚胎成纤维细胞,比较不同分离方法对其生长形态、生长曲线及细胞周期的影响。方法:实验于2006-03/09在辽宁医学院解剖实验室完成。①选取清洁级昆明种七八周龄雄性小鼠10只,4周龄雌性小鼠20只,雄雌鼠按1∶2合笼,次日晨检查有阴栓者记为孕0.5d,选择孕12.5～14.5d雌鼠断颈处死,取出胎鼠,去除胚胎头部、内脏和四肢,将躯干部用无菌眼科剪剪成1mm3以下的碎块,分别用以下方法进行分离培养。②组织块培养法:将剪碎的组织块吸置于离心管内,加入1mL消化液(含2.5g/L胰蛋白酶和0.4g/L乙二胺四乙酸的磷酸盐缓冲液),吹吸30s,加入等体积的完全培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)终止消化,弃上清液,留下鼠胚组织块沉淀物,按相互距离0.5cm放入培养瓶内,培养箱静置2～4h后,加入适量完全培养基,3d换液一次。③单细胞悬液法:将剪碎的组织块加入1mL消化液,吹打30s,室温下静置3～5min,吸取上层液体,再加入消化液,重复上述操作五六次,最后弃组织块,将收集的上层液离心,1000r/min离心5min,弃上清液,加入完全培养基5mL,吹打均匀后吸至培养瓶内培养。培养条件、换液时间与组织块培养法相同。④滤网过滤改良法:将剪碎的组织块加入1mL消化液,吹打30s,37℃水溶箱中轻摇3～5min,加入完全培养基1mL终止消化,室温下静置1.0～2.0min,用直径5cm、孔径为150目滤网过滤后,将过滤液以1000r/min离心5min;弃上清液,加入适量完全培养基,轻吹30～50下,吸至培养瓶内,37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养24h,半量换液,以后3d换液一次。⑤检测不同分离方法对鼠胚胎成纤维细胞生长形态、生长曲线及细胞周期的影响。结果:①鼠胚胎成纤维细胞生长形态观察:组织块培养法第2天可见少量成纤维细胞,细胞生长缓慢,需要七八天才能传代�
- 张海锋单伟秦书俭
- 关键词：成纤维细胞胚胎细胞分离细胞培养技术
- 人脐静脉间充质干细胞向胰岛β样细胞诱导分化的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的可行性。方法:采用胶原酶消化分离人脐静脉内皮及内皮下细胞进行贴壁培养;传代培养后,用高浓度葡萄糖(25mmol/l)培养液DMEM(含10%FBS)以及bFGF(basic Fibroblast Growth Factor)和尼克酰胺诱导脐静脉间充质干细胞向胰岛β样细胞分化。倒置显微镜下观察间充质干细胞诱导后形态变化,观察是否形成细胞团;用胰岛β细胞特异双硫腙染色鉴定诱导后细胞内是否含有高浓度游离锌离子;免疫细胞化学(Envision法)鉴定诱导后细胞是否分泌胰岛素。结果:第2代脐静脉间充质干细胞经过高糖诱导大约10天后,形成细胞团;呈双硫腙染色阳性;免疫细胞化学表明诱导后细胞内的细胞胰岛素染色阳性。结论:人脐静脉内皮及内皮下分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛β样细胞,这种胰岛β样细胞具有胰岛素的分泌功能。
- 李德华单伟韩静赵宝东秦书俭
- 关键词：人脐静脉间充质干细胞体外分化胰岛
- 端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用
- 2007年
- 目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附(ELISA)法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。
- 张英哲许德顺单伟孙大鹏任延鹏
- 关键词：端粒酶肝癌细胞
- bFGF复合骨基质明胶在兔股前区促血管化作用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨基质明胶(BMG)包埋血管束在兔股前内侧区的促血管化作用,为解决组织工程骨的血管化问题奠定实验基础。方法制备兔BMG。将36只兔随机分为A、B、C3组,每组12只。于股骨前内侧膝关节上方做一纵行切口。A组:bFGF+血管束+BMG;B组:血管束+BMG;C组:BMG,分别于术后4周、8周、12周给各组动物灌注墨汁后处死,取出植入物,做透明标本进行大体观察,并做Masson染色进行组织学观察和定量分析。结果组织学观察表明:术后12周,A组的新生血管排列较有序,B组的新生血管逐渐趋向于有序排列,C组新生血管排列杂乱,主要集中于材料边缘,中央较少。血管面积定量分析:各个时间点上A组血管面积均最大,与B组、C组之间差异有统计学意义(P<0.05)。新生骨面积定量分析:各个时间点上A组新生骨面积均最大,与C组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 bFGF对BMG包埋血管束有促血管化的正协同作用。血管化程度越高,新生骨面积越大,新生骨面积比与血管化程度呈正相关。
- 单伟秦书俭
- 关键词：成纤维细胞生长因子骨基质明胶血管化
- 锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响被引量：3
- 2009年
- 背景：锌通过直接和间接作用对DNA聚合酶和RNA聚合酶产生影响,在细胞的DNA复制、RNA转录、增殖、分化等活动中起重要作用。目的：探讨锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响。设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2008-09/12在辽宁医学院完成。材料：清洁级1月龄SD大鼠7只,由辽宁医学院动物中心提供。方法：全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代时,对照组向细胞中加入含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养液,锌处理组向上述培养液中加入硫酸锌,使锌终浓度分别达到0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0mg/L。胰酶消化后按5×10^7L^-1密度接种,培养21d。主要观察指标：细胞表面抗原的表达,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞DNA含量、蛋白质含量和增殖周期。结果：第3代细胞表面抗原CD106呈阳性表达。锌对骨髓间充质干细胞活性的促进作用呈量效关系,0.2-4.0mg/L锌处理组细胞活性显著高于对照组（P〈0.01）,尤以质量浓度为2.0mg/L时最为明显;当锌的质量浓度达6.0mg/L时,细胞活性明显降低（P〈0.01）。培养7,14,21d与对照组比较,2.0mg/L锌处理组骨髓间充质干细胞DNA含量、蛋白质含量均显著升高（P〈0.01）;细胞增殖指数、S期和G2^＋M期细胞百分率均明显升高,G0/G1期细胞百分率则显著下降（P〈0.01）。结论：0.2-4.0mg/L锌能促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、DNA复制和蛋白质合成,且2.0mg/L为最佳质量浓度。
- 刘霞任广达单伟曾瑞霞李德华秦书俭
- 关键词：锌骨髓间充质干细胞增殖DNA蛋白质
- 人脂肪源性干细胞多潜能分化特性被引量：5
- 2013年
- 目的原代分离培养人脂肪干细胞(ADSCs),探讨细胞增殖及多向分化,间充质干细胞相关特性。方法取人吸脂术的脂肪组织通过酶消化法分离培养ADSCs,观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和表面抗原的表达,用茜素红、甲苯胺蓝和油红O染色鉴定向骨、软骨及脂肪诱导分化。结果人ADSCs呈长梭形、旋涡状生长,传至第15代的ADSCs仍具较强的增殖能力,ADSCs具有干细胞特性,高表达标记CD90和CD44的间充质干细胞,不表达内皮细胞标记CD31,而CD49d低表达,CD106阴性。成骨诱导后可见钙结节形成并被茜素红染成紫红色,软骨诱导后分泌大量蛋白多糖,被甲苯胺蓝染成蓝色,成脂诱导后细胞内可见大量脂滴被油红O染色红色。结论人脂肪干细胞可分化成间充质干细胞,具有稳定增殖和成骨、成软骨和成脂等多向分化潜能。
- 房艳李德华倪伟民曾瑞霞单伟刘学元
- 关键词：人脂肪干细胞成骨细胞软骨细胞脂肪细胞
- siRNA沉默HLA-A2表达的hBMSCs对人异体T淋巴细胞分泌功能及其诱导成骨能力的影响
- 探讨应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的hBMSCs对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用及诱导成骨能力的影响。从成人骨髓中分离和培养hBMSCs,利用人工合成HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染至第3代hBMSCs,然...
- 秦书俭郑仕杰单伟郑德宇
