刘晓娟
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种条件复制型重组单纯疱疹病毒、疫苗及其应用
- 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需...
- 寸韡宫悦毕研伟刘晓娟李智华杨耀云肖红剑李海巍
- 文献传递
- 白介素2基因佐剂协同单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗免疫诱导的特异性免疫应答被引量：14
- 2005年
- 目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响,以及在HSV-1病毒角膜攻击时的保护效果。方法利用pcDNA3.1载体分别构建HSV-1糖蛋白D和IL-2的真核表达质粒pgD和pIL-2,体外鉴定其表达。动物实验分为pcDNA3.1空载体对照组、pgD单独免疫组和pgD+pIL-2联合免疫组3组,具体为通过肌肉免疫接种BALB/c小鼠3次,间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体滴度并做亚型分析,利用3H-TdR掺入法进行Th细胞增殖实验,ELISA试剂盒检测Th细胞分泌的IL-2、IFN-γ和IL-10水平,耳廓肿胀实验检测迟发型超敏反应(DTH)反应;HSV-1病毒角膜攻击后,裂隙灯显微镜观察角膜上皮病变。结果与pgD单独免疫组相比,pIL-2的协同免疫可以显著提高IgG2a抗体滴度、Th细胞增殖反应和DTH反应,Th细胞分泌IL-2和IFN-γ水平也显著提高,IL-10水平明显下降。在动物保护实验中,pIL-2的协同免疫明显增强了pgD疫苗在病毒攻击时对角膜的保护效果。结论IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高pgD核酸疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,增加核酸疫苗的免疫保护效果。
- 刘晓娟朱明昭宋国兴许于飞刘宏伟王盛杨宝玲董方田许雪梅
- 关键词：白介素2单纯疱疹病毒1型
- 人乳头瘤病毒16型修饰后E6E7基因免疫原性增强被引量：1
- 2003年
- 利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fmE6E7,瞬时转染Cos 7细胞 ,免疫荧光法检测证实其表达后 ,在C5 7BL 6小鼠后腿肌肉进行裸DNA免疫 ,5 1Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性 (cytotoxicTlymphocyte,CTL) ,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。研究表明修饰后的中国地方株E6E7融合基因可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应 ,与单独野生型E7基因免疫相比 ,E6E7融和基因可更好的活化CTL反应。表明修饰后消除转化活性的中国地方株E6E7融合基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因。
- 许雪梅朱明昭张明策刘晓娟宋国兴
- 关键词：人乳头瘤病毒16型基因修饰E6E7基因DNA疫苗癌前病变
- TPA对Bcl-X前体mRNA在U251细胞中选择性剪接调控的初步研究被引量：1
- 2004年
- 以含有部分Bcl X序列的微小基因为研究模型 ,研究了TPA对Bcl X前体mRNA选择性剪接在体内和体外的调控作用。通过RT PCR和定点突变实验检测 ,结果表明PKC信号系统能调控Bcl X前体mRNA选择性剪接 ,其机制可能是通过应答序列来调控Bcl X前体mRNA
- 李长友褚嘉祐刘晓娟俞建昆黄小琴史荔朱泳璋纳剑波谢久永
- 关键词：选择性剪接灯盏花乙素
- 修饰后中国山东地方株HPV16 E6E7基因的转化活性检测及免疫原性研究被引量：4
- 2002年
- 目的 利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型 (HPV16 )E6E7基因 ,研制HPV16DNA疫苗。方法 定点突变E6的终止密码 ,并保证E7读码框架不变 ;定点突变E7蛋白的Rb结合区中对其转化活性维持起关键作用的第 2 4位氨基酸。突变修饰后的基因命名为fmE6E7。PCR扩增fmE6E7,重组入pLNCX载体 ,脂质体法转染 3T3细胞 ,免疫荧光组织化学及Westernblot检测转染细胞蛋白的表达。经软琼脂集落培养法和BALB c裸鼠皮下接种法检测fmE6E7的转化活性。然后PCR扩增fmE6E7,构建pVR10 12 fmE6E7真核表达质粒 ,于C5 7BL 6小鼠肌肉内直接进行裸DNA免疫 ,51 Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性 ,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。结果 测序证实获得了预期的突变结果。pLNCX fmE6E7转染细胞体外软琼脂培养 3周未见集落形成 ;裸鼠皮下接种 2月后未见移植瘤形成 (0 3)。免疫鼠获得了较好的E7特异性的抗体E和抗原特异性的CTL。结论 修饰后E6E7基因可融合表达 ,转化活性消除的同时还可诱发特异的细胞免疫和体液免疫 ,表明中国山东地方株的E6E7基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因。
- 许雪梅张明策罗利群刘晓娟朱明昭司静懿郭秀婵宋国兴
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6基因E7基因
- 微针皮内免疫增强新型冠状病毒S1蛋白免疫原性研究
- 2023年
- 目的研究新型皮内免疫方法对新型冠状病毒重组S1(rS1)蛋白的免疫效果。方法112只BALB/c小鼠随机分为对照组[只注射Al(OH)3佐剂]、5μg S1组、5μg S1+Al(OH)3组、10μg S1组、10μg S1+Al(OH)3组、20μg S1组、20μg S1+Al(OH)3组,每组分别进行肌内免疫和微针皮内免疫,各组免疫所用S1蛋白与佐剂Al(OH)3质量比为1∶10,共14组,每组8只。免疫程序为0、2和4周3次免疫。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)比较不同免疫途径和免疫剂量诱导的IgG、IgG1和IgG2a结合抗体水平。用SARS-CoV-2野生型(WT)和Omicron(BA.5)假病毒来评估中和抗体的水平。通过酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunosorbent spot,ELISpot)对细胞免疫反应进行评估。抗体终点滴度和中和数据通过Kruskal-Wallis检验进行分析,细胞免疫数据使用单因素方差分析进行分析。结果皮内免疫新型冠状病毒rS1蛋白诱导IgG、IgG1、IgG2a抗体效价高于肌内免疫。免疫rS1蛋白产生的特异性抗血清对新型冠状病毒野生型和Omicron BA.5有明显的中和效果,并且皮内免疫组诱导小鼠产生的中和抗体水平高于肌内免疫组,皮内免疫10μg+Al(OH)3对野生型新型冠状病毒的中和抗体GMT为922,对Omicron BA.5的中和抗体GMT为99。免疫rS1蛋白的小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4水平上升,且皮内组免疫诱导小鼠产生的细胞免疫反应高于肌内免疫组,皮内免疫20μg组引起的IFN-γ水平最高[(370.7±42.36)个免疫斑点];皮内免疫10μg+Al(OH)3组引起的IL-4水平最高[(416.7±51.83)个免疫斑点]。结论皮内免疫引起的免疫应答强于传统的肌内免疫方法,可应用于后续疫苗接种策略。
- 孙鑫陈彩迪毕研伟刘晓娟李俊李俊肖红剑姚宇峰李智华
- 关键词：新型冠状病毒微针
- 单纯疱疹病毒I型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步研究被引量：7
- 2002年
- 目的构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白Ｄ重组质粒ＤＮＡ疫苗，初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果，为研制ＨＳＶ－１新型疫苗奠定基础。方法用ＰＣＲ的方法从ＨＳＶ－１病毒基因组中扩增糖蛋白Ｄ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｄ，ｇＤ）基因，利用基因重组技术构建重组质粒；将重组质粒体外转染真核细胞ＣＯＳ－７，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测表达产物；于ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后腿胫前肌注射免疫，０、２周各免疫１次，１００μｇ／次。初次免疫后０、２、４、６周眼眶采血，ＥＬＩＳＡ间接法检测抗体。结果重组质粒酶切出相应大小片段，经测序证实为ＨＳＶ－１ｇＤ序列。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ证实能够在体外真核细胞中表达。免疫小鼠后，产生特异性抗体，抗体滴度１∶２０００。结论ＨＳＶ－１ｇＤ重组质粒ＤＮＡ有可能作为ＨＳＶ－１的ＤＮＡ疫苗，用于防治ＨＳＶ－１感染及其相关疾病。
- 朱明昭刘宏伟刘晓娟韩晔华杨宝玲宋国兴
- 关键词：单纯疱疹病毒角膜炎DNA疫苗糖蛋白D
- 一种条件复制型重组单纯疱疹病毒、疫苗及其应用
- 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需...
- 寸韡宫悦毕研伟刘晓娟李智华杨耀云肖红剑李海巍
- 观察佛波脂和二甲基亚砜联合诱导人肺腺癌GLC分化过程中的形态和超微结构被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨佛波脂 (TPA)和二甲基亚砜 (DMSO)联合诱导分化剂对人肺腺癌GLC细胞形态的影响。 方法 采用细胞计数 ,光镜、扫描电镜与透射电镜观察 ,经过TPA和DMSO联合诱导的人肺腺癌GLC细胞增殖以及形态和超微结构的变化。 结果 经过联合诱导分化剂作用后 ,细胞增殖受到抑制 ,细胞体积增大 ,呈现扁平铺展状态 ,细胞核质比例变小 ,核仁数量减少。细胞表面微绒毛减少 ,细胞边缘丝状伪足减少 ,片状伪足增多 ,核形态较规则 ,核内异染色质减少 ,常染色质增多 ,细胞质中的细胞器数量增多 ,结构趋于正常。
- 李长友褚嘉祐朱泳璋刘晓娟林克勤黄小琴谢久永
- 关键词：诱导分化超微结构人肺腺癌细胞
- MICA基因微卫星多态在中国13个群体中的分布被引量：11
- 2001年
- 通过对中国 1 3个群体 (云南汉族、广东汉族、山东汉族、白族、傣族、拉族、黎族、纳西族、撒拉族、畲族、土族、佤族和云南藏族 )共 5 77例无亲缘关系的研究对象的DNA样本进行MICA基因微卫星扫描分型 ,获得了该微卫星的不同等位基因在各群体中的遗传数据。结果表明 ,该微卫星在不同群体中的分布存在差异 ,并有较高的多态信息含量 (PIC) ,是一个有用的遗传标记 ,在人类进化研究、个体识别、亲子鉴定。
- 班贵宏褚嘉祐许绍斌杨昭庆钱亚屏俞建昆纳剑波刘晓娟张思仲
- 关键词：MICA基因微卫星多态性中国人
