黄学明 作品数:36 被引量:137 H指数:7 供职机构: 南昌大学第一附属医院 更多>> 发文基金: 江西省自然科学基金 国家自然科学基金 江西省卫生厅中医药科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
骨髓间充质干细胞的体外培养及定向诱导分化 被引量:6 2004年 目的:探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的体外培养生长特性及其在体外定向分化为神经样细胞的条件。方法:采用Ficoll-paque(1.077g/ml)分离液密度梯度分离hMSCs,显微镜下观察其生长特性,测定生长曲线;取传至3~6代的hMSCs,用阿魏酸钠对其进行诱导培养,并以β-巯基乙醇作对照观察诱导培养后细胞的形态变化,分别在6h、1d、3d和7d通过免疫荧光细胞化学染色方法测定诱导后细胞的神经元烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glia fiber acidprotein,GFAP),进行定量分析。结果:体外培养条件下hMSCs呈长梭形,细胞生长曲线呈S形,细胞倍增时间约为72h。阿魏酸钠诱导培养后6h可见细胞形态明显变化,NSE和GFAP表达阳性。24h后诱导细胞表现为典型的神经细胞样形态。第3天,NSE和GFAP表达最高,分别为67±3.5%和39±1.8%。结论:人骨髓间充质干细胞在体外具有自我更新能力及多分化潜能;阿魏酸钠具有诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。 汪泱 邓志锋 赖贤良 王共先 黄学明关键词:骨髓间充质干细胞 体外培养 神经细胞 细胞分化 蟾酥对白血病CEM细胞的抑制作用及诱导其凋亡的研究 被引量:13 2007年 目的研究蟾酥对CEM细胞的抑制作用及其机制。方法应用MTT比色试验观察蟾酥对CEM细胞的抑制作用;采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变;利用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率。结果①蟾酥能明显抑制CEM细胞的生长,药物浓度在0.032μg/ml即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为0.16μg/ml,当药物浓度为4μg/ml,作用72 h后,其抑制率达85.50%;②细胞形态学改变,细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;③流式细胞术证实蟾酥能诱导CEM细胞凋亡,凋亡率也呈剂量和时间依赖性。结论蟾酥对白血病CEM细胞的生长具有极强的抑制作用,诱导细胞凋亡是其机制之一。 朱大诚 尹小明 黄学明 陈秀珍 伍庆华 肖纯关键词:蟾酥 白血病 CEM细胞 凋亡 氯化镧对脂多糖与单核细胞的结合及CD14表达的影响 被引量:2 2004年 用流式细胞术检测氯化镧(LaCl3)对内毒素(LPS)与单核细胞的结合及CD14表达的影响。结果显示LPS能够与单核细胞结合,LaCl3具有抑制LPS与单核细胞结合的作用;LPS可以上调全血单核细胞表面CD14的表达,并在一定范围内呈剂量依赖关系,LaCl3对LPS上调单核细胞表面CD14的表达具有一定的抑制作用,但不能完全阻断。 汪泱 郭菲 王共先 胡峰 黄学明 张红艳关键词:细胞生物学 氯化镧 CD14 单核巨噬细胞 骨髓干细胞诱导大鼠心脏移植免疫耐受的实验研究 2009年 目的探讨注射供者的骨髓干细胞对大鼠异位移植心的影响。方法以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者,制作Wistar大鼠的骨髓干细胞,建立大鼠同种异体异位心脏移植模型。心脏移植术前2h经受者阴茎静脉注射骨髓干细胞0.3ml,心脏移植术后分别观察受者注射同一供者和无关供者的骨髓干细胞后移植心脏的存活时间;心脏停跳后取移植心做病理检查及免疫组织化学检测。结果心脏移植术前受者接受同一供者和无关供者的骨髓干细胞后,前者移植心脏存活时间延长,分别为(37.0±16.5)d和(9.5±2.4)d,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);且前者心肌出血、坏死程度更轻,心肌组织内IgM和IgG沉积更少。结论注射同一供者的骨髓干细胞能特异性减轻大鼠移植心脏的排斥反应,明显延长其存活时间。 刘通 黄学明 鄢业鸿 彭贵祖 王共先 郭昌平关键词:骨髓干细胞 心脏移植 免疫耐受 骨髓干细胞诱导大鼠心脏移植免疫耐受的实验研究 目的探讨注射供者的骨髓干细胞对大鼠异位移植心的影响。方法以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者。制作Wistar大鼠的骨髓干细胞;建立大鼠同种异体异位心脏移植模型。心脏移植术前2h经受者阴茎静脉注射骨髓干细胞0.3ml... 刘通 黄学明 鄢业鸿 王共先 郭昌平关键词:骨髓干细胞 心脏移植 免疫耐受 文献传递 骨髓间充质干细胞—聚乳酸聚乙醇酸共聚复合物支架修复组织损伤的实验研究 被引量:8 2006年 目的探讨骨髓间充质干细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚复合物(PLGA)的构建及对损伤组织的修复效果。方法(1)分离培养新西兰幼兔骨髓间充质干细胞(MSC),4,6联脒2苯基吲哚(DAPI)标记后接种于PLGA支架上。扫描电镜和免疫荧光显微镜观察不同时间段MSC在支架上的生长情况。(2)分别将MSC-PLGA复合物及PLGA支架移植于新西兰大白兔背部皮肤创面。术后观察创面愈合情况,5周后取移植物行HE染色、VG染色及细胞角蛋白AE1/AE3免疫荧光组化检测。结果MSC在支架上生长良好,细胞数量随时间增长而逐渐增加,第10天细胞达到90%融合。MSCPLGA复合物所修复创面,随着聚合材料的降解,逐渐形成新生皮肤,HE染色及VG染色示新生皮肤与正常皮肤结构相似,且荧光显微镜下可见胞核呈蓝色荧光的角化层细胞及毛囊细胞,其胞浆同时表达角蛋白。PLGA支架所修复创面则新生皮肤仅见少量毛囊,并见增厚的纤维瘢痕。结论骨髓间充质干细胞复合PLGA聚合物是良好的移植替代物。 王共先 汪泱 刘伟鹏 张中华 黄学明 谢安关键词:骨髓 干细胞 细胞支架 长春新碱对白血病CEM细胞生长抑制及诱导凋亡作用的研究 被引量:5 2007年 目的探讨长春新碱(vincristine,VCR)对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验检测长春新碱作用于CEM细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术检测凋亡率、细胞周期分析探明细胞凋亡的可能机制。结果长春新碱能显著抑制CEM细胞的生长,其抑制作用具有一定的时间和剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为0.16μg/mL;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形,有的形成胞膜完整的凋亡小体等典型的凋亡特征;随药物浓度增加和时间延长,CEM细胞凋亡率增大,同时G2/M期细胞减少,S期细胞相对增多。结论长春新碱对白血病CEM细胞具有显著的抑制作用,其机制可能主要是抑制细胞有丝分裂时纺锤体形成,阻滞细胞分裂,从而诱导细胞凋亡。 朱大诚 黄学明 尹小明 陈秀珍 肖纯关键词:长春新碱 白血病 CEM细胞 细胞凋亡 脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化 被引量:2 2004年 目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LPS使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/mlLPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h。用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI)。结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P<0.01。TLR2MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P<0.05。2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%±1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P<0.01。TLR4MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P<0.05。结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应。 郭菲 汪泱 方方 邢娟娟 彭燕 黄学明关键词:LPS 阳性率 骨髓间充质干细胞向前列腺癌趋向转移的研究 被引量:15 2006年 目的探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体内向前列腺癌微环境趋向转移的特性。方法应用人前列腺癌细胞株PC-3异种皮下种植建立前列腺癌严重联合免疫缺陷小鼠 (SCID)模型,通过密度梯度离心和贴壁法分离、培养hMSCs,将体外4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI) 标记的4~6代hMSCs经尾静脉和肿瘤周围注射入荷瘤SCID鼠体内,分别在经尾静脉注射后17 d 和肿瘤周围注射后7、10、14 d处死小鼠,收集肿瘤和肝、肺、脾、肾等脏器作冰冻切片和石蜡切片, 在荧光显微镜下观察肿瘤及各脏器中hMSCs的分布情况。结果前列腺癌SCID鼠模型成瘤率 83.3%,经尾静脉注射DAPI标记的hMSCs后17 d和肿瘤周围注射DAPI标记的hMSCs后7、10、 14 d,荧光显微镜下显示,前列腺癌组织中可见DAPI标记的hMSCs的核呈蓝色荧光,而肝、肺、脾、肾等脏器中均未见hMSCs的存在。结论 hMSCs在体内具有向前列腺癌微环境趋向转移的特性。 王共先 汪泱 胡红林 黄学明 袁铿 詹以安关键词:骨髓间充质干细胞 前列腺癌 骨髓间充质干细胞体内分化为肾小管上皮细胞的实验研究 被引量:7 2007年 目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)能否在体内分化为肾小管上皮细胞。方法取SD雄性大鼠胫、股骨骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,采用4,6-联脒-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)进行标记。32只雌性SD大鼠复制缺血再灌注肾损伤模型后随机分为移植组和对照组,移植组于缺血45min后经下腔静脉注入用DAPI标记的MSCs,对照组注入等量的生理盐水。分别于术后1d、2d、3d、4d处死大鼠,留取肾组织,荧光显微镜观察移植的MSCs在肾组织中的分布,采用能与肾小管内腔壁特异结合的蓖麻血凝素(Ricinus communis agglurinin,RCA)对迁移入肾脏的MSCs分化状况进行鉴定。结果移植组术后第三天肾组织内可见DAPI标记细胞,第四天DAPI标记细胞明显增多(P<0.05),且多数DAPI标记细胞能结合RCA。对照组没有发现DAPI标记细胞。结论移植的外源性MSCs能够迁移、定居于肾组织中并分化为肾小管上皮细胞。 张中华 王共先 汪泱 胡峰 黄学明关键词:骨髓间充质干细胞 肾小管上皮细胞 细胞分化