陈旖
- 作品数：16 被引量：27H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 不同直径山羊卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力被引量：9
- 2008年
- 目的研究山羊卵巢表面不同直径卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力,优化山羊早期胚胎体外生产系统。方法收集繁殖期和非繁殖期山羊卵巢,采集表面直径小于1.5 mm、1.5-2.5 mm、2.5-3.5 mm和大于3.5 mm4种卵泡卵母细胞,以Hoechst33342染色检查核发育阶段;同时,利用体外培养方法观察不同直径卵泡卵母细胞的成熟、受精和早期胚胎发育能力。结果直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞主要处于GVI期;1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞以GVⅠ、GVⅡ和GVⅢ期为主;2.5-3.5 mm卵泡卵母细胞在GVⅡ到GVⅣ期间平均分布;大于3.5mm卵泡卵母细胞主要为GVⅢ到GVBD期。体外培养实验发现,直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞仅有个别能完成成熟和卵裂;大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,能完成成熟和受精,但1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞的受精卵通常阻滞于4-8细胞期;当卵泡直径大于2.5 mm时,卵母细胞才能较好地支持胚胎继续发育,其桑/囊胚的比例达到30%以上。卵泡卵母细胞的发育特征和体外发育能力与动物所处的繁殖季节无关。结论山羊卵巢上直径大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,大于2.5 mm卵泡卵母细胞能支持早期胚胎继续发育。
- 叶华虎袁菊芳刘宏伟张小飞隋丽华陈旖胡娟峰曾林
- 关键词：卵母细胞发育能力山羊
- 埃博拉病毒截短型糖蛋白GPdmucin的表达与纯化
- 2017年
- 目的:确定黏蛋白区缺失的埃博拉病毒包膜糖蛋白(GPdmucin)的最佳表达系统,并获得纯化的GPdmucin。方法:从埃博拉病毒的包膜糖蛋白(GP)全长基因上扩增GPdmucin序列,构建至pET32a、pFast Bac1和pcDNA3.4三种不同表达系统的质粒中,分别在原核、昆虫和哺乳动物表达系统中进行表达,并用特异抗体鉴定表达情况。结果:原核系统表达的GPdmucin不稳定,活性差;在昆虫表达系统中,GPdmucin在细胞内以不溶形式表达;利用Expi293瞬时蛋白表达系统,GPdmucin在哺乳动物细胞中可溶性表达,Ni柱亲和层析获得的目的蛋白纯度达90%以上,且与特异抗体具有很好的结合活性。结论:获得哺乳动物细胞表达系统表达的GPdmucin蛋白,将用于GPcl的制备、GP抗体筛选、疫苗效果评价及病毒致病机理的研究。
- 范鹏飞迟象阳宋小红房婷吴诗坡陈旖王潇霖张冠英于长明陈薇
- 关键词：埃博拉病毒生物学活性
- BABL/c小鼠感染大肠杆菌O127模型的建立及TGF-β1因子的荧光定量检测被引量：8
- 2013年
- 目的建立BABL/c小鼠感染大肠杆菌O127的模型及TGF-β1的荧光定量PCR方法检测方法。方法通过灌胃的方式建立肠炎性小鼠模型,并利用嵌合荧光定量的方法对其结肠TGF-β1定量分析实验。结果成功建立了肠炎性小鼠模型,荧光定量PCR试验结果表明实验组TGF-β1表达量明显高于对照组。结论利用经口灌胃的方法可以成功的建立肠炎性小鼠动物模型,TGF-β1定量方法可以作为模型建立的评价标准。
- 刘一隋丽华曾林宋宏立武际荣陈旖赵彦斌刘冰孙兆增王新
- 关键词：动物模型荧光定量TGF-Β1
- 猴B病毒被膜糖蛋白gC的原核表达及诊断价值评价被引量：1
- 2011年
- 目的:原核表达猴B病毒糖蛋白gC胞外区片段,评价其在猴B病毒血清学检测中的特异性和敏感性,为猴B病毒检测奠定基础。方法:利用PCR方法扩增gC胞外区基因片段,同时合成该片段的优化密码子序列,将其插入表达载体pET-28b(+)形成重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达;纯化蛋白先以Western印迹进行验证,再以ELISA方法和标准阳性、阴性血清评价其诊断价值。结果:直接从病毒DNA模板上获得的基因片段未能表达,而优化后的基因片段表达水平较高,表达蛋白的相对分子质量约为48×103,为包涵体形式,占菌体总蛋白的30%左右;Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;34份标准阳性血清和25份阴性血清的ELISA检测结果显示,重组蛋白的敏感性和特异性分别为94.1%(32/34)和100%(25/25)。结论:利用原核表达系统制备的gC胞外区重组蛋白,可作为猴B病毒血清学检测抗原,其特异性和敏感性都较好。
- 王代平叶华虎董罡张文韬陈旖白杰英胡娟峰曾林聂奎
- 关键词：原核表达血清学诊断
- 金黄地鼠与白化地鼠遗传生化基因位点概貌被引量：1
- 2014年
- 目的建立金黄地鼠和白化地鼠遗传生化基因位点。方法选用小鼠和大鼠的遗传生化基因位点,采用蛋白质和同工酶醋酸纤维电泳的方法,对金黄地鼠和白化地鼠进行生化基因位点检测。结果建立了金黄地鼠和白化地鼠25个生化基因位点,分析金黄地鼠和白化地鼠遗传生化基因位点的多态性,为进一步研究金黄地鼠白化突变系的遗传机理奠定基础。结论金黄地鼠生化基因位点存在多态性,白化地鼠与金黄地鼠生化基因位点存在差异。
- 王冬平崔晓霞尚世臣陈旖张小飞陈振文王全新黄斌尙玉璞李桂军
- 关键词：金黄地鼠生化基因位点
- 白化地鼠和金黄地鼠的血清生化指标的测定被引量：3
- 2014年
- 目的测定白化地鼠和金黄地鼠的血清生化指标,比较两者间的差异,为医学实验研究提供数据参考。方法用眼球取血的方法采集动物全血,制备血清,全自动生化分析仪进行测定,应用SPSS10.0软件包对结果进行统计分析。结果初步建立了金黄地鼠和白化地鼠的血清生化指标,并且反应出部分指标存在差异。结论金黄地鼠的白化基因对血清生化指标有影响。
- 崔晓霞尚世臣张小飞陈旖黄斌尚玉璞王冬平陈振文王全新隋丽华李桂军
- 关键词：金黄地鼠生化指标
- 恒河猴五日热巴尔通体的分离和柠檬酸合成酶基因的序列分析被引量：2
- 2012年
- 目的初步研究巴尔通体在恒河猴体内的存在情况,并分析其柠檬酸合成酶(gltA)的基因序列,判断巴尔通体的种属。方法 16只来自福建的恒河猴,用血琼脂培养基分离可能存在的巴尔通体。根据NCBI数据库上的巴尔通体gltA的基因序列,设计一对引物,以巴尔通体菌落为模板进行扩增,将获得的序列进行克隆测序。结果从3只恒河猴体内成功分离到了巴尔通体病原,并获得了巴尔通体gltA全长基因序列,测序结果表明该序列与五日热巴尔通体同源性99%。结论福建来源的恒河猴种群携带巴尔通体病原,巴尔通体流行地区可能存在鼠与灵长类动物之间病原体的流行和传播。
- 隋丽华曾林张广州白杰英赵彦斌张小飞陈旖赵爽孙兆增
- 关键词：柠檬酸合成酶
- 犬α干扰素基因的密码子优化及高效表达被引量：1
- 2008年
- 根据密码子优化原则,利用重组PCR方法扩增犬α干扰素基因,将测序正确的基因分别克隆于三种原核表达载体pET22b（＋）、pET24b（＋）和pET28b（＋）中。再将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表明,目的蛋白主要以包涵体形式表达,大小约为25 kDa;其中,pET22b（＋）载体的表达量较高,约占总蛋白的50%-60%。
- 张小飞叶华虎隋丽华陈旖刘永梅曾林
- 关键词：原核表达重组干扰素
- 利凡诺方法分离纯化犬血浆蛋白络合及解离条件探讨
- 2012年
- 目的普通犬血浆和高免血清分别是白蛋白和特异性免疫球蛋白分离纯化的原材料,针对不同的血浆确立相应的络合条件和解离条件,以分离纯化白蛋白和丙种球蛋白。方法血浆按1∶1体积加入利凡诺溶液,用2%Na2CO3调pH值,使犬血浆与利凡诺进行充分络合;上清液两次络合后解离,获得丙种球蛋白;沉淀解离获得白蛋白。分别对上清液、两次解离液进行蛋白浓度、纯度的测定。结果确定pH 8.5,室温络合2 h,利凡诺浓度在2.3%时为白蛋白的最佳络合条件;pH 6.0,室温络合2 h,利凡诺浓度2.3%为丙种球蛋白最佳络合条件。0.6%氯化钠,0.25%辛酸钠,pH 1.37为白蛋白解离最佳条件;0.85%氯化钠,1.3%甘氨酸,pH 6.8为丙种球蛋白的最佳解离条件。结论利用利凡诺方法,可以成功分离和纯化犬白蛋白和丙种球蛋白。
- 隋丽华陈旖李瑞生刘宏伟赵彦斌张小飞黄永莉刘红燕刘永梅叶华虎
- 关键词：犬血浆分离纯化
- 比格犬ERβ_(1293)基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位被引量：1
- 2014年
- 目的观察比格犬Myc标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长。Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。
- 甘艺钟睿任秀梅赵彦斌胡仲明刘冰陈旖孙兆增曾林杨焕民
- 关键词：比格犬蛋白定位
