赵媛媛
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军后勤指挥学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 人内皮抑素和人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达
- 目的：为了构建编码人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒，并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中获得高效表达。
方法：通过重叠延伸PCR的方法，将ES和HSA两片断连接，并将其克隆入pGEM-T载体中...
- 赵媛媛吕茂民杨梅玛晶晶章金刚
- 关键词：人内皮抑素人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母重组表达质粒增殖活性
- 文献传递
- 猪α-干扰素的原核表达及活性测定被引量：3
- 2009年
- 目的:表达并纯化出具有生物学活性的重组猪α-干扰素。方法:根据前期合成的猪α-干扰素基因序列设计引物,用PCR方法扩增出猪α-干扰素基因,并将其定向克隆入原核表达载体pET28中,酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,对表达产物通过镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化、透析法复性后,采用微量细胞病变抑制法测定重组猪α-干扰素的活性。结果:测序结果表明构建了猪α-干扰素原核表达载体pET28-poIFN-α;诱导表达后经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约21×103的位置出现明显的诱导蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经分析表达产物主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的36%,纯化后的目的蛋白纯度约为90%;采用微量细胞病变抑制法测定其活性约为1.67×106U/mg。结论:获得了纯度较高并具有较高活性的重组猪α-干扰素,为下一步研究猪α-干扰素药物价值及其生物制剂的生产、应用奠定了基础。
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- 关键词：原核表达抗病毒活性
- 内皮抑素及其在抗肿瘤中的应用被引量：2
- 2009年
- 内皮抑素是一种抗血管生成的抑制因子,它特异性地作用于新生微血管的内皮细胞,其水平与肿瘤血管生成有着明显的相关性。体内外的研究均表明,内皮抑素具有无毒副作用、不容易产生耐药性和易达到有效药物浓度等优点。我们简要综述了内皮抑素的特性、作用机制,及其在抗肿瘤应用等方面的研究进展。
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- 关键词：内皮抑素血管生成肿瘤
- 内皮抑素—人血清白蛋白融合蛋白的表达及鉴定
- 1997年,O’Reilly从体外培养的鼠血管内皮瘤细胞的上清液中发现了内皮细胞生长抑素/(简称内皮抑素,endostatin,ES/),其分子量为20kDa,它能够特异性地作用于内皮细胞,特别是对微血管的内皮细胞,可以...
- 赵媛媛
- 关键词：生物学活性半衰期
- 文献传递
- 纤维蛋白止血贴肝脏植入试验
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- 重组人凝血因子Ⅶ在Flp-In-CHO细胞中的表达及鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的利用Flp/FRT位点特异性重组技术,在Flp-In-CHO细胞中表达重组人凝血因子Ⅶ(rhFⅦ),并进行鉴定。方法用限制性内切酶EcoRⅠ和EcoRⅤ分别双酶切质粒pT-FⅦ与表达载体pcDNA5/FRT/TO,将回收的目的基因片段和载体片段连接,构建重组表达质粒pcDNA5/FRT/TO-FⅦ,并与辅助质粒pOG44共转染Flp-In-CHO细胞,经400μg/ml潮霉素B压力筛选,获得抗性细胞株。采用PCR、RT-PCR、Western blot和PT等方法对筛选出的细胞株分别进行基因组水平、mRNA水平、表达水平和蛋白活性的鉴定。结果重组表达质粒pcDNA5/FRT/TO-FⅦ经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;筛选出9株抗性细胞;外源基因FⅦ定点整合到Flp-In-CHO细胞基因组中并得到表达;重组蛋白表现出与血浆FⅦ相一致的促凝活性。结论利用位点特异性表达系统Flp/FRT,在Flp-In-CHO细胞中成功表达了hFⅦ,为其制备和纯化奠定了基础。
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- 关键词：位点特异性重组
- 水痘-带状疱疹病毒快速微量中和试验的建立与初步应用被引量：3
- 2015年
- 目的 建立水痘-带状疱疹病毒（VZV）的快速微量中和试验筛查技术,用于高免原料血浆的筛选和VZV特异性免疫球蛋白（VZIG）的制备。方法 参考美国FDA批准的VZIG制品,设立原料血浆筛选滴度的下限;通过病毒滴度优化,设立快速微量中和试验筛查体系中的病毒使用滴度;建立筛选体系并引入VZIG国际标准品作为质量控制,对1∶2~1∶256倍比稀释的各滴度的单人份和混合原料血浆进行测定,同时利用抗VZV中和抗体ELISA检测试剂盒Vacc Zyme复核快速微量中和筛选结果,对其灵敏度进行分析。结果快速微量中和筛选试验中原料血浆的最低筛选下限为1∶16（VZV中和抗体滴度不低于0.4 U/ml）;筛选体系病毒使用滴度为1500 PFU/ml;20份单采血浆中有8人份的滴度≥1∶16,混合血浆中无符合筛选标准的样本;ELISA的复核结果与快速微量中和试验呈良好的直线关系（r=0.895 24,P〈0.0001）。结论 快速微量中和试验的灵敏性、通量和可操作性等,适于VZV高免原料血浆的筛选,解决了VZIG制备中原料血浆筛选的关键技术问题。
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- 关键词：水痘-带状疱疹病毒免疫球蛋白类血浆
- 人内皮抑素-白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并在毕赤酵母(pichia pastoris)中获得高效表达。方法通过重叠延伸PCR的方法 ,构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并克隆至pGEM-T载体中,测序正确后,将其亚克隆至酵母表达载体pPIC9中,然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9/ES-HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选高表达菌株,对高表达菌株进行扩大培养,将表达上清液盐析后分别经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化,获得了重组融合蛋白,采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。结果成功构建了人内皮抑素-白蛋白融合基因和重组表达质粒pPIC9/ES-HSA,并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9/ES-HSA/GS115,经甲醇诱导表达后纯化,融合蛋白的纯度达到92%以上,并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。结论本方法可成功获得具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素-人血清白蛋白融合蛋白。
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- 关键词：人内皮抑素人血清白蛋白毕赤酵母
- 一种快速筛选酵母高表达菌株的新方法被引量：3
- 2008年
- 为建立一种快速筛选酵母高表达菌株的方法,将生长在固体培养基上的新转化的表达菌落原位转移到醋酸纤维素薄膜上,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获醋酸纤维素薄膜上的蛋白,然后用免疫印迹的方法检测原位转印到硝酸纤维素膜上菌落分泌蛋白,根据免疫印迹的强弱进行高表达菌株的筛选。结果显示,经过菌落原位转印和免疫印迹显色,显色信号强的菌落表达量相对较高。因此,双膜法原位检测是一种快速、高效的筛选酵母高表达菌株的方法。
- 冯晶晶赵媛媛杨梅吕茂民
- 关键词：酵母
