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董嘉文: 作品数：37 被引量：125H指数：6; 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>; 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目公益性行业(农业)科研专项广东省农科院院长基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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禽呼肠病毒σC基因的表达及ELISA抗体检测方法的建立: 2012年; 将RT-PCR扩增得到的禽呼肠病毒(ARV)S1133毒株的σC基因克隆至pMD-18T-Simple载体,经酶切及测序鉴定,证明该基因片段为ARVσC基因。将该基因亚克隆至pET32a(+)成功构建了表达载体pET32a-σC。该重组质粒在大肠埃希菌BL21中经1.0mmol/L IPTG诱导5h得到最佳表达。pET32a-σC蛋白的分子质量为55ku,Western blot分析表明,该重组蛋白能与ARV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。将纯化好的ARVσC蛋白作为包被抗原,确定了该方法的抗原最适包被浓度为2μg/mL,血清的最适稀释度为1∶400。用建立的ELISA方法检测接种过ARV疫苗的65份临床血清样品,测得44份为阳性,阳性率为67.7%;未接种ARV疫苗的30份血清样品检测结果均为阴性。; 董嘉文孙敏华李林林胡奇林; 关键词：禽呼肠病毒酶联免疫吸附试验

鸭新城疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立被引量：1: 2012年; 为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1。以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1∶10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1∶10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0。试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应;可以检测出0.2μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍;批间和批内变异系数均小于10%。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础。; 孙敏华董嘉文吕殿红周秀蓉李林林胡奇林; 关键词：单克隆抗体夹心ELISA

禽呼肠孤病毒RT-LAMP快速检测方法的建立: 根据GenBank中登录的禽呼肠孤病毒(ARV)S1基因序列,设计了特异对应靶序列中的6个基因区段的4条引物,以此建立了一种快速、准确的ARV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,并对此方法的反应条件进行了优化...; 董嘉文孙敏华尚毅胡奇林; 关键词：禽呼肠孤病毒; 文献传递

基因VIb亚型半番鸭源新城疫病毒基因组测序及分析: 2012年; 根据GenBank上发布的新城疫病毒基因组序列,设计了9对引物,对从福建福州地区发病半番鸭场分离的新城疫病毒FJ-SMD-03株进行了基因组cDNA扩增测序和分析.结果表明:FJ-SMD-03的基因组序列由15 192 nt组成,在NP基因非编码区比Lasota株多了6个核苷酸ACACTC;基因组由6个ORF组成,即3'-NP-P-M-F-HN-L-5'序列.BLAST结果显示:FJ-SMD-03基因组核苷酸与1.3、carrier-pigeon/Guangdong/2008、pigeon/Italy/1166/00、AV324/96和dove/Italy/2736/00相似性最高,达94.9%～98.5%;与疫苗株Lasota、Mukteswar和B1的相似性最低,为80.7%～83.3%;与我国标准强毒株F48E8及2002年从福建番鸭中分离到的基因VIId亚型强毒株Muscovy duck/China(Fujian)/FP1/02相似性较低,分别为82.5%和87.1%.F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特征,进化树分析发现,FJ-SMD-03属于ClassⅡ类基因VIb亚型,证明鸭群中有VIb亚型NDV强毒株;FJ-SMD-03株NDV与1.3、carrier-pigeon/Guangdong/2008和pigeon/Italy/1166/00亲缘关系较近,与carrier-pi-geon/Guangdong/2008形成一个小的进化分支,推测FJ-SMD-03株与carrier-pigeon/Guangdong/2008和pigeon/Italy/1166/00株来源于共同的祖代毒株,可能与鸽携带的病毒有关.; 黄秋芳孙敏华陈少莺吕殿红董嘉文尚毅吴玄光胡奇林; 关键词：新城疫病毒基因组

检测鸭坦布苏病毒NS1抗体ELISA方法的建立被引量：2: 2017年; 为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况,本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的基础上,建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.188μg/孔,待检血清1:200稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:16000倍稀释时反应条件最佳。在最佳反应条件下,阴阳性临界值判定标准为0.467。用建立的间接ELISA方法对番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为6%和10%,显示该方法具有很好的稳定性。用建立的ELISA方法检测临床鸭坦布苏病毒感染鸭及攻毒蛋鸭的55份临床血清样品,测得52份为阳性,阳性率为94.5%,对36份阴性鸭群血清样品进行检测,36份为阴性,阴性率为100%。该方法为鸭坦布苏病毒的诊断和流行病学监测奠定了基础。; 孙敏华郭建伟李林林董嘉文邝瑞欢吴玄光张建峰胡奇林张春红; 关键词：NS1蛋白 ELISA

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因重组鸭瘟病毒载体的构建被引量：6: 2011年; 为了构建含有Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞.原始病毒液在鸭胚成纤维细胞上盲传3代后仍能观察到绿色荧光;以Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清对pBlueSK-TK-EGFP-VP1转染的细胞样品作Westen-blot检测,出现特异条带,且相对分子质量约为54 000.结果表明该研究已成功构建携带Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体,其能够在真核细胞中正确表达.; 张婧董嘉文罗永文郭霄峰; 关键词：鸭瘟病毒 VP1基因

雏番鸭细小病毒病研究进展: 本文对近年来雏番鸭细小病毒的检测与诊断方法、分子流行病学、疫苗研究和防制等方面的研究进展进行了综述，并对番鸭细小病毒的研究方向做出展望。; 李林林孙敏华董嘉文胡奇林; 关键词：雏番鸭细小病毒分子流行病学

一株基因Ⅶb亚型新城疫病毒F和HN基因的序列分析: 本研究从2010年佛山市三水区某养殖户送检的鹅病料中分离鉴定出一株新城疫病毒，暂命名Goose/Foshan/2010。运用RT-PCR方法扩增出该病毒的F和HN基因的ORF序列，并进行序列测定。经序列对比、进化分析发现...; 孙敏华董嘉文李林林胡奇林; 关键词：F基因 HN基因基因序列

鹅细小病毒LAMP快速检测方法的建立被引量：10: 2011年; 根据GenBank中登录的鹅细小病毒(GPV)VP3基因序列,利用PrimerExplorer V3软件在序列保守区域设计1套特异识别VP3基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立一种基于LAMP技术的GPV检测方法.结果表明,该方法灵敏度是普通PCR方法的100倍,只能特异性扩增GPVDNA,其引物对于其他常见禽DNA病毒均无特异性扩增.在反应体系中加入SYBR GREEN I染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果.该方法特异性强、灵敏度高,重复性好,为快速检测鹅细小病毒提供了新方法和新思路.; 尚毅董嘉文孙敏华黄秋芳吴玄光胡奇林; 关键词：鹅细小病毒环介导等温扩增

番鸭细小病毒VP3基因和鸭IL-2基因真核融合表达载体的构建被引量：1: 2014年; 将番鸭细小病毒(MDPV)主要结构蛋白VP3基因和免疫刺激基序(CpG)依次克隆至质粒pIRES-dIL2上,构建了重组质粒pIRES-dIL2-VP3-CpG。核酸疫苗重组质粒转染BHK-21细胞进行间接免疫荧光试验,可在细胞浆中检测到绿色荧光,表明重组质粒可以成功地在真核细胞内表达。; 董嘉文李林林孙敏华袁建丰邝瑞欢胡奇林; 关键词：番鸭细小病毒 VP3基因 CPG基序真核表达

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