罗建平
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：温州医学院检验医学院浙江省医学遗传学重点实验室更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金宁波市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- NK4蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性研究被引量：4
- 2009年
- NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂。为规模化生产NK4蛋白,将NK4基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4,并转化大肠杆菌Rosseta(DE3)。转化菌经IPTG诱导后以包涵体形式大量表达重组蛋白,占菌体总蛋白的42%。包涵体用盐酸胍溶解后经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,蛋白纯度约为95%,经Western blot证实为NK4蛋白。纯化的重组蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙,并诱导其凋亡,证实制备的NK4蛋白具有生物活性。NK4蛋白的成功制备将有助于NK4相关功能的深入研究。
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- 关键词：纯化生物活性
- NK4蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化与活性研究
- NK4是肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)α-链的含447个氨基酸的片段,包括N-末端的发夹结构和4个Kringle结构,编码序列长度1434 bp,相对分子量50 kDa,可经胰...
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- 文献传递
- NK4蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化与活性研究
- 2010年
- 目的通过构建NK4基因的重组原核表达载体,规模化制备NK4蛋白。方法将NK4基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4,并转化E.coli Rosseta(DE3)。IPTG诱导转化菌表达NK4蛋白,然后采用Ni-NTA树脂亲和层析进行纯化。观察复性后NK4蛋白对Hela细胞的生物学性状的影响,评价制备的NK4蛋白的生物活性。结果NK4基因重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4获成功构建。转化pET-26b(+)-NK4的E.coli Rosseta(DE3)以包涵体形式大量表达目的蛋白,占菌体总蛋白的42%。经Ni-NTA树脂亲和层析纯化后NK4蛋白纯度约为95%,并经Western blot证实。NK4蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙并促进其凋亡。结论成功构建NK4基因的重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4,并可在E.coli Rosseta(DE3)表达。制备的NK4保留了其生物学活性。
- 岑东罗建平赵行滑世轩吕建新涂植光裴仁治
- 关键词：纯化生物活性
