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PER1与RACK1蛋白作用位点分析被引量：3: 2007年; 目的筛选人下丘脑视交叉上核(SCN)区域内与PERIOD1(PER1)相互作用的新蛋白,研究RACK1与PER1的作用特点,明确其结合的关键结构域。方法采用酵母双杂交方法,筛选得到人SCN区域内与PER1-PAS结构域相互作用的新蛋白,并构建5种表达不同长度RACK1片段的酵母文库质粒与PER1诱饵质粒共转染酵母AH109进行杂交,通过营养缺陷筛选、报告基因检测获得阳性克隆,并采用体外转录、免疫共沉淀实验证实阳性克隆蛋白间的相互作用。结果酵母双杂交筛选得到人SCN区域内表达RACK1蛋白的克隆,重组RACK1表达质粒与PER-PAS诱饵质粒进行酵母双杂交筛选后得到三个阳性克隆:RACK1(WD1-7)、RACK1(WD4-7)和RACK1(WD5-7),β-半乳糖苷酶测试阳性证实报告基因表达,免疫共沉淀结果显示阳性克隆与PER1蛋白间存在相互作用。结论RACK1与PER1存在直接相互作用,RACK1含有7个WD40结构域,本研究发现与PER1结合的最小区域位于、、三个WD40结构域,提示其碳端序列为其结合的关键部位。; 鲁芳胡丽娟刘德松汪宇辉刘彦友甘露薛建新万朝敏王正荣; 关键词：近日节律蛋白相互作用 RACK1 酵母双杂交

穿膜肽mCLOCK’s DNA-BIND作为药物载体的生物安全性初步评价: 2007年; 目的研究一种新的来源于节律蛋白mCLOCK's DNA结合域的穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND(CDB)作为药物携带载体的生物安全性。方法化学合成穿膜肽CDB。体外采用Phorbol12-Myristate13-acetate(PMA)诱导NIH3T3细胞的近日节律。于诱导后不同时间点,CDB与小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞共孵育,RT-PCR检测其对近日节律核心分子mPeriod1(mPer1)基因表达的影响。此外,培养的NIH3T3直接与CDB共孵育12h和24h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的作用。结果CDB没有明显影响PMA诱导的mPer1节律基因表达。此外,CDB不干扰NIH3T3细胞增殖及生长周期,亦无明显的诱导凋亡作用。结论CDB对细胞近日节律、细胞增殖、生长周期及细胞凋亡均无明显毒副效应,可望作为一种安全有效药物载体,并具有广泛的临床应用前景。; 甘露薛建新刘延友汪宇辉鲁芳王正荣; 关键词：近日节律穿膜肽 CLOCK基因细胞周期

clock基因干扰质粒的构建及干扰效率测定: 2009年; 目的:构建clock基因的干扰质粒,为深入研究clock基因在信号转导通路中的作用提供有效手段。方法:采用M-folder生物软件选择2个clock基因干扰位点,并根据3个干扰片段及一个阴性对照片段,定向克隆到pGenesil-1干扰载体并测序验证。将干扰质粒及对照质粒分别转染至NIH3T3细胞,并通过检测RT-PCR产物量以获得干扰效率。结果:RT-PCR产物检测结果显示干扰质粒pGenesil-1/clock-Ⅱ干扰效率最高,其clock表达量降低了74%,而pGenesil-1/clock-Ⅰ干扰组clock表达量只降低了2%。结论:成功构建了对clock基因具有显著干扰效率的pGenesil-1/clock-Ⅱ干扰质粒,为进一步研究clock基因的功能奠定了基础。; 付天明鲁芳刘延友汪宇辉江舟甘露薛建新邹晏王正荣; 关键词：时间生物学生物节律干扰质粒 RNA干扰 RT-PCR CLOCK基因

PMA诱导C6细胞rPer1,rDbp基因的近日节律表达被引量：1: 2006年; 目的寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况。方法采用PMA(phorbol12-myristate13-acetate),100nmol/L)及50%的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞,RT-PCR检测不同时间点mPer1mRNA的表达水平,比较两者的诱导效率;PMA刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞,RT-PCR检测不同时间点rPer1,rDbpmRNA的表达水平。结果PMA及50%的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPer1的近日节律表达且诱导效率近似;并首次发现C6细胞的rPer1,rDbp基因存在着近日节律振荡。结论PMA是一种有效的体外节律诱导剂;经PMA诱导后,C6细胞的节律基因存在近日振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供依据。; 薛建新甘露鲁芳刘延友肖静汪宇辉王正荣; 关键词：近日节律 PMA

Intermedin介导的促肿瘤新生血管形成作用被引量：1: 2009年; 肿瘤新生血管形成(tumor angiogenesis)是一个多因子参与和多种机制调控的复杂过程。探寻新的血管形成机理、寻找新的抗血管作用靶位,是目前的重要研究课题之一。; 张巍柯薇汪理筠甘露周锐吴思思蒋维辛洪波; 关键词：INTERMEDIN 肿瘤治疗

RACK1干扰质粒的构建及其干扰效率的鉴定: 2008年; 目的构建高效针对RACK1(Gnb2l1基因)的干扰质粒,为进一步研究RACK1功能构建有效平台。方法采用M-folder生物软件选择2个Gnb2l1干扰位点,根据位点序列合成2个干扰片段及1个阴性对照片段,定向克隆入pGenesil-1干扰载体并测序验证。将干扰及对照质粒分别转染至NIH3T3细胞后,实时定量RT-PCR鉴定干扰效率。结果实时定量RT-PCR结果显示,干扰质粒转染组的Gnb2l1mRNA量分别为未转染组的58%和7%,阴性对照质粒转染组与未转染组一致,提示干扰质粒pGene-sil-1/Gnb2l1-Ⅱ干扰效率达到90%以上。结论成功构建并筛选到具有显著干扰效率的干扰质粒,为进一步研究RACK1及其伴侣分子的功能联系奠定了基础。; 邹晏鲁芳刘延友汪宇辉甘露付天明王正荣; 关键词：生物节律干扰质粒 RNA干扰

节律基因mClock在肿瘤实验化疗中的作用被引量：2: 2008年; 目的研究节律基因mClock在顺铂诱导小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)凋亡中的作用。方法体外采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)诱导LLC细胞近日节律,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测细胞mClock基因的节律性表达。于诱导后不同时间点,顺铂(CDDP)处理细胞,24h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法和流式细胞术检测(FCM)其对细胞的增殖与凋亡的影响。采用脂质体介导方法将mClock基因转染至LLC细胞,顺铂处理细胞,24h后MTT法和流式细胞术检测其对细胞的增殖与凋亡的影响。结果PMA作用LLC后,mClock基因呈现节律性表达。PMA诱导LLC节律表达的不同时间点,细胞对顺铂的敏感性不同。mClock过表达使顺铂作用后LLC凋亡率下降,细胞增殖明显。结论mClock能够抑制顺铂诱导LLC的凋亡。; 要然段志青张太明甘露林丽刘延友汪宇辉王正荣; 关键词：近日节律顺铂 LEWIS肺癌细胞 PMA

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