王洪法
- 作品数：52 被引量：238H指数：9
- 供职机构：山东省医学科学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 南水北调与血吸虫病扩散被引量：4
- 2007年
- 王洪法文衍秋仲维霞
- 关键词：南水北调东线工程南水北调工程京杭大运河中间宿主长江下游长江水
- 抗菌肽的研究进展被引量：6
- 2009年
- 抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛地存在于生物界。它是机体免疫系统的重要成分,构成宿主防御病原微生物入侵的第一道屏障。抗菌肽除了具有分子量小、热稳定性好、免疫原性较低等特点,还由于其独特的化学结构,能有效地抑杀真菌、病毒、细菌、寄生虫,而不易产生耐药性;能选择性地杀灭肿瘤细胞,而对人畜毒副作用极小。因此,抗菌肽作为新药开发具有广阔的前景。本文综述了抗菌肽的分类、生物学活性、基因工程和存在的问题。
- 魏艳彬王洪法
- 关键词：抗菌肽生物学活性基因工程
- 抗弓形虫感染ROP2核酸疫苗的研究被引量：5
- 2005年
- 目的研究弓形虫核酸疫苗,以用于弓形虫病的防治。方法根据ROP2基因序列,设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物,扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体,然后再亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗;应用裸pc-DNA3-ROP2免疫小鼠,通过免疫学指标的检测,评价小鼠的免疫应答反应,最后应用弓形虫RH株攻击实验,评价出该疫苗的有效保护率、安全性和在人类及畜类的应用价值。结果以ROP2基因为模板,PCR扩增出1.7kbDNA条带,与预想结果一致;将扩增DNA回收并成功的克隆了ROP2(PUCm-T-ROP2),然后亚克隆并构建了pc-DNA-ROP2重组体,通过酶切、PCR扩增和基因测序证明亚克隆的重组子正确,ROP2扩增基因包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列;在应用疫苗免疫接种小鼠结果显示,疫苗接种能使小鼠产生强烈的细胞、体液免疫反应;攻击实验结果显示,实验组小鼠的存活时间明显延长,并且开始死亡时间明显延迟(P<0.001),实验组9只小鼠中有1只长期存活;在实验的整个过程中,没有发现小鼠对免疫接种的毒性和异常反应。结论该疫苗免疫原作用强,具有很好的开发应用价值,目前可在动物群体中试验应用。
- 韩广东魏庆宽张佃波李瑾崔勇李桂萍王洪法刘玉冰刘克义
- 关键词：弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 山东省班氏丝虫病传播阈值的研究被引量：6
- 1997年
- 在鲁南原班氏丝虫病高度流行区的郯城县胜利乡花园村，于基本消灭后第５年（１９８４）开始，在不采取防治措施的情况下，纵向观察１０年，微丝蚴率由观察前的０．５６％降至０．１２％，观察前９例残存微丝蚴血症者，其中有８例陆续自然转阴。原残存微丝蚴血症者第１０年检测血中ＩｇＧ４抗体转阴率为８８．８９％。蚊媒自然感染率１９８４～１９８６年分别为０．２１％、０．１９％和０．０６％，第１０年（１９９３年）未再发现蚊媒幼丝虫。年传播潜势由３．４７降到０。结果表明，在当地自然环境条件下，蚊媒密度以人饵诱捕法调查不用蚊帐人群叮人率为２４．１～５２．５只／人·夜，使用蚊帐人群叮人率为１３．５～２１只／人·夜，居民微丝蚴率为０．５６％及残存微丝蚴血症者６０μｌ血微丝蚴平均密度为６．６～２０．７条的情况下，班氏丝虫病处于传播阈值以下，居民微丝蚴率逐步降低，趋于终止传播。
- 王培义尹舜高长兰盛琦赵中平李登俊曹新春刘伦华万功群刘波公茂庆刘新张佃波王洪法
- 关键词：丝虫病班氏丝虫病低密度微丝蚴血症
- 抗弓形虫感染DNA疫苗的研究
- 目的研究一廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因的引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2...
- 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇王用斌张佃波王洪法付斌刘玉冰宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 文献传递
- 四川省黑水县利什曼原虫家犬感染率的检测被引量：5
- 2010年
- 目的 了解四川省黑水县利什曼病流行区家犬的利什曼原虫感染现状,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能.方法 2009年5月在犬源型利什曼病疫区四川省黑水县随机选取的无内脏利什曼病现症的家犬,采集静脉血,采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体,用两组PCR引物RV1、RV2和K13A、K13B检测血样中利什曼原虫特异DNA,并比较两种检测方法的敏感性.结果 PCR法检测抗凝静脉血阳性检出率为30.47%（32/105）,ELISA法检测血清阳性检出率为19.05%（20/105）.结论 四川省黑水县存在大量的利什曼原虫无症状感染犬,PCR是检测无症状感染较敏感的方法.
- 屈金辉赵桂华余清顺王洪法仲维霞陈志荣王淮东西格基崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：利什曼病感染率PCRELISA
- 弓形虫棒状体蛋白ROP16的研究进展被引量：10
- 2015年
- 棒状体蛋白16(ROP16)是弓形虫棒状体蛋白家族成员,其蛋白结构存在丝氨酸、苏氨酸激酶区,是弓形虫入侵过程中的重要毒力因子。ROP16可分泌到宿主细胞核,能磷酸化宿主细胞的转录活化因子STAT3/6,干扰宿主细胞信号通路传导,在弓形虫入侵宿主细胞过程中发挥着重要作用。本文对弓形虫ROP16的发现、功能、免疫保护性等方面进行综述。
- 刘功振王彬王洪法
- 关键词：弓形虫磷酸化
- 杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4)。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18T-cp1-ds4经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后构建重组表达载体pPICZαA-cp1-ds4,测序验证开放阅读框(ORF)正确后经SacⅠ线性化处理,然后电转化毕赤酵母X-33(800V,1mm电转化杯,15s电击1次)并利用Zeocin筛选阳性重组子。重组子接种BMGY、BMMY培养基,采用5%的甲醇诱导表达,采用Tricine-SDS-PAGE分析表达上清,表达上清浓缩后进行抑菌试验。结果在本研究中拼接引物经SOE-PCR拼接后得到优化的长度为120bp的Dermaseptin S4基因基因片段,该片段与Cecropin P1基因连接形成约197bp杂合抗菌肽片段,成功构建pPICZαA-cp1-ds4表达载体,电转化获得重组酵母菌pPICZαA-cp1-ds4/X-33,经诱导后可产生分子质量单位约为9.7ku的目的多肽,该多肽对大肠埃希菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用。结论杂合肽CP1-DS4可以在毕赤酵母X-33中融合分泌表达,且具有抗菌活性。
- 孙长峰仲维霞王洪法崔勇赵桂华
- 关键词：CECROPINP1DERMASEPTIN毕赤酵母分泌表达
- 无症状感染利什曼原虫快速分子检测方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立适合快速检测利什曼原虫无症状感染者的分子生物学方法。方法选择利什曼原虫k DNA小环保守区的2对快速诊断特异性引物RV1-RV2、K13A-K13B,以杜氏利什曼原虫山东分离株前鞭毛体抽提的k DNA为模板进行PCR扩增,并通过对扩增条带测序比对来鉴定方法的可靠性。运用该法对四川省黑水县105例无症状家犬和新疆喀什地区部分乡镇75例无症状易感人群的静脉血样进行检测,并同时对上述地区确诊的部分病犬及病人(均为7例)进行检测,以验证该方法的可行性及准确性。结果 RV1-RV2、K13A-K13B两对引物扩增出与预期片段大小一致的条带,序列比对结果显示扩增产物在利什曼原虫种内保守性高;该方法对105例无症状家犬及75例无症状居民静脉血样的阳性检出率分别为37.14%(39/105)和82.67%(62/75),且对同地区确诊病犬及病人血样本检测的阳性率均为100%(7/7)。结论该方法适于目前我国黑热病流行区利什曼原虫无症状感染者的检测,且灵敏快速准确,具有较好的推广应用价值。
- 赵桂华尹昆仲维霞崔勇王洪法
- 关键词：利什曼原虫无症状感染PCR
- 弓形虫ROP2核酸疫苗免疫保护作用的研究被引量：22
- 2006年
- 目的研究ROP2核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法42只BALB/c小鼠随机分为3组:实验组、空质粒组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注pc-DNA3-ROP2重组质粒50μg、pc-DNA3空质粒50μg和PBS50μl,共免疫3次,每次间隔3周,末次接种量均加倍。末次免疫后2周,各组分别取4只小鼠的血清、脾和淋巴组织,检测CD4+、CD8+及各细胞因子。其余各组每鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子500个,观察其存活时间等。结果ROP2核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠血清抗体滴度高并能识别由基因重组体外诱导表达的ROP2蛋白抗原;实验组小鼠的CD4+T细胞增殖明显(69.5±3.4)%、CD4+/CD8+比值显著升高(4.69±1.32)%(P<0.01);其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)均有不同程度的升高,尤其是血清中升高最为显著。弓形虫攻击感染180h后,实验组小鼠免疫保护率为88.9%,与对照组相比,小鼠存活时间明显延长、初始死亡时间明显推迟(P<0.01)。结论ROP2核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用。
- 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇张佃波王洪法刘玉冰付斌宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护
