熊安英
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：石河子大学医学院新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 毕赤酵母表达Neuritin蛋白的纯化及鉴定被引量：2
- 2014年
- 为研究重组Neuritin的毕赤酵母表达蛋白的纯化方法及鉴定。应用甲醇诱导GSll5/pPIC9K-Neuritin毕赤酵母工程菌株表达Neuritin蛋白,采用硫酸铵盐析、His-Trap Crud亲和层析等方法,对该表达产物进行纯化。纯化后的蛋白进行SDS-PAGE、western-blot和生物质谱鉴定。结果显示,SDS-PAGE分析显示经甲醇诱导后表达的蛋白获得了与Neuritin分子量理论值相符的条带,western-blot分析它能够与抗表位抗体特异反应,进一步生物质谱分析证实该纯化重组蛋白为Neuritin重组蛋白。由此可知,本研究建立了一种有效的纯化方法,获得高纯度的Neuritin重组蛋白,为大量制备Neuritin纯化蛋白,开展其功能和机制研究奠定基础。
- 张云华朱井玲熊安英单莉娅朱美意郑艳郝慧星黄瑾
- 关键词：NEURITIN蛋白纯化
- Neuritin对Neuralzied表达水平及Notch信号途径的影响
- 目的：探讨Neuritin对细胞内Neuralized表达水平及其环节的影响，并进一步明确Neuritin对Neuralized介导的Notch信号途径受体及其下游靶基因的影响。 方法： (1)利用脂质体介导法将pc...
- 熊安英
- 关键词：NOTCH信号途径RNA干扰技术
- 文献传递
- Neuritin siRNA表达载体的构建及对细胞中Neuritin表达的影响被引量：1
- 2012年
- 为构建neuritin siRNA干扰载体并观察对细胞中neuritin表达水平的影响。采用化学合成法获取靶向neu-ritin的短发夹寡核苷酸序列,与线性化pGPU6/Neo质粒退火连接。转化后获取的neuritin siRNA经酶切及测序鉴定正确后,转染293T细胞。Western-Blot和间接免疫荧光分析观察构建的neuritin siRNA载体对细胞中neu-ritin表达及其定位的影响。neuritin siRNA干扰载体经酶切及测序分析的结果显示,目的核苷酸序列成功插入了预计位点且序列完全正确。neuritin siRNA干扰载体转染293T细胞后,Western-Blot检测显示,neuritin siRNA干扰载体明显降低了细胞中neuritin基因的蛋白表达;间接免疫荧光结果显示,4种neuritin siRNA明显减弱了定位于细胞膜上的neuritin蛋白的荧光强度(其中neuritin siRNA4的抑制效果最为明显)。由此可知,neuritin siRNA干扰载体成功构建,且能明显抑制细胞中neuritin的表达。
- 熊安英张云华朱美意单莉娅郑艳郝慧星黄瑾
- 关键词：NEURITINRNA干扰
