林良波 作品数:9 被引量:26 H指数:3 供职机构: 重庆医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市卫生局医学科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
Wnt/β-catenin信号对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的影响 目的:初步探讨经典Wnt/β-catenin信号通路协同BMP9对诱导间充质干细胞成骨分化的影响。 方法: (1)以C3H10T1/2为目的细胞,重组腺病毒介导BMP9过表达,联用β-catenin重组腺病毒上调经典... 林良波关键词:WNT通路 Β-CATENIN信号通路 间充质干细胞移植 骨钙蛋白 成骨分化 碱性磷酸酶活性 Wnt3a协同BMP9调控间充质干细胞成骨分化及机制研究 被引量:7 2012年 目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通路,联合BMP9作用于细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测定、钙盐沉积实验、real time PCR、免疫细胞化学染色等方法观测BMP9与经典Wnt信号通路联合后对MSCs成骨分化的影响。结果:Wnt3a明显促进了BMP9诱导的ALP活性的增加[F=264.962,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=7.19,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=16.36,P=0.000],同时也明显增加了成骨标志物骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)[F=3 920.102,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=39.10,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=62.56,P=0.000]和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)[F=1 935.824,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=40.88,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=56.42,P=0.000]的表达以及Runx2的mR-NA的表达[F=3 635.980,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=79.37,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=86.96,P=0.000],并且还促进了钙盐沉积。结论:Wnt3a与BMP9相互协同诱导MSCs的骨向分化,其中成骨转录因子Runx2可能作为二者的交汇点起了重要作用。 张晓 徐道晶 林良波 梁熙 黄伟关键词:WNT3A 间充质干细胞 骨向分化 Wnt信号抑制剂DKK1对BMP9诱导干细胞骨向分化的影响及机制研究 第一部分:重组腺病毒BMP9及DKK1的扩增及有效转染小鼠骨髓间充质干细胞 目的:通过HEK293细胞对已经构建好的带有目的基因的重组腺病毒BMP9及DKK1进行扩增,以获得高滴度的重组腺病毒浓缩液。确认重组腺病毒是否... 林良波关键词:间充质干细胞 骨向分化 WNT信号 钛颗粒和炎症因子对人滑膜细胞MMP-2表达的影响 2013年 目的研究钛颗粒和炎症因子(TNF-α、IL-1β)对人滑膜细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达及活性的影响,探讨滑膜在钛磨损颗粒诱导的金对金人工关节假体周围骨溶解中的可能机制。方法用钛颗粒和TNF-α、IL-1β处理体外培养的人膝关节滑膜细胞,处理后12、24、48、72 h收集培养上清液,用明胶酶谱法检测MMP-2的活性。结果直径最小的钛颗粒(≤5μm)能刺激人滑膜细胞MMP-2蛋白表达4倍于对照组;与对照组相比,钛颗粒、TNF-α、IL-1β及相互联合作用均明显增加了MMP-2的表达(P<0.01),三者联合作用更明显(P<0.01)。钛颗粒和TNF-α、IL-1β能够刺激人膝关节滑膜细胞增加MMP-2蛋白活性,并具有协同效应。结论金对金人工关节置换术后,磨损钛颗粒可能和炎性因子协同刺激滑膜细胞,增加骨细胞外基质的降解,导致假体的骨性支持结构力学性能下降,促使假体无菌性松动的发生。 符纯锋 黄伟 梁熙 胡宁 宋国立 谢静 陈荣富 王春莉 林良波 王志强 陈诚关键词:钛颗粒 滑膜 炎症因子 无菌性松动 β-catenin对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响 被引量:3 2014年 目的探讨经典Wnt信号通路关键节点β-catenin对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响。方法用重组腺病毒介导BMP9在C3H10T1/2细胞中过表达,联用β-catenin重组腺病毒上调β-catenin的表达,并通过RNA干扰抑制β-catenin的表达。分析C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的变化;RT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙蛋白(osteocalcin,OC)基因mRNA的转录水平;茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积。结果 BMP9单独作用能诱导C3H10T1/2细胞向成骨方向分化,并增强细胞ALP活性;单独的β-catenin无成骨诱导作用,但可剂量依赖性地增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性,并促进BMP9诱导的细胞OPN和OC基因mRNA的转录水平及钙盐沉积;抑制β-catenin表达可显著降低BMP9诱导的C3H1OT1/2细胞的ALP活性(P<0.05),下调OPN和OC基因mRNA的转录水平,并抑制钙盐沉积。结论经典Wnt信号通路可能通过β-catenin协同BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,且BMP9诱导的成骨分化可能需要通过Wnt/β-catenin途径来实现。 林良波 徐娇 张晓 符纯锋 王志强 周建武 毕杨 黄伟关键词:WNT Β-CATENIN 间充质干细胞 成骨分化 微创与传统膝关节置换术失血量比较 被引量:6 2013年 目的比较微创全膝关节置换术(minimallyinvasivesurgerytotalkneearthroplasty,MIS—TKA)与传统全膝关节置换术(conventional total knee arthroplasty,C—TKA)围术期失血量的差异。方法回顾性分析2009年1月一2012年1月收治的84例单侧TKA患者围术期失血量,按手术方式分为微创组(42例)和传统组(42例),计算围术期失血量(显性失血量+隐性失血量),对两组患者的失血量和输血量进行比较。结果传统组围术期失血量为(1466±493)ml,输血量为(223±208)ml;微创组围术期失血量为(1379±475)ml,输血量为(257±239)ml(P〉0.05)。结论MIS—TKA不能减少围术期失血量。 王志强 黄伟 梁熙 胡宁 徐伟 林良波 符纯峰 程强钛颗粒和TNF-α对人膝关节滑膜细胞MMP-1、2、3表达的影响 2013年 研究钛颗粒和肿瘤坏死因子(TNF-α)对人滑膜细胞基质金属蛋白酶(MMP-1、2、3)表达及活性的影响,从而探讨滑膜在钛磨损颗粒诱导的金对金人工关节假体周围骨溶解中的可能机制。用钛颗粒和TNF-α处理体外培养的人膝关节滑膜细胞,在处理后2h提取总RNA;逆转录PCR、荧光实时定量PCR对人滑膜细胞MMP-1、2、3基因的表达进行半定量和定量分析。处理后12、24和48h收集培养上清液,用明胶酶谱法检测MMP-2的活性。结果显示,与对照组相比,钛颗粒、TNF-α均明显增加了MMP-1、2、3基因的表达(P<0.05),两者联合作用更明显(P<0.01)。MMP-2蛋白水平和基因表达趋势基本一致,钛颗粒和TNF-α处理分别增加MMP-2活性1.3倍和1.5倍(P<0.05),联合处理作用更为明显,增加1.7倍(P<0.01)。钛颗粒和TNF-α能够刺激人膝关节滑膜细胞MMP-1、2、3基因表达的增加以及MMP-2蛋白活性。本研究表明,金对金人工关节置换术后,磨损钛颗粒可能刺激滑膜细胞,增加骨细胞外基质的降解,导致假体的骨性支持结构力学性能下降,促使假体无菌性松动的发生。 符纯锋 谢静 陈荣富 王春莉 许春明 陈诚 王志强 林良波 黄伟 梁熙 宋国立关键词:钛颗粒 无菌性松动 滑膜 肿瘤坏死因子 基质金属蛋白酶 Dkk1对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响 2014年 目的:探讨经典Wnt信号通路胞外拮抗因子Dkk1对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响。方法:以C3H10T1/2为目的细胞,通过重组腺病毒介导BMP9过表达,联用重组腺病毒Dkk1抑制经典Wnt信号通路。检测各处理组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性变化、钙盐沉积、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨桥素(osteopontin,OPN)变化;体内异位成骨实验分析Dkk1对BMP9诱导MSCs成骨分化的影响。结果:BMP9可诱导C3H10T1/2细胞成骨分化;Dkk1显著降低BMP9诱导的C3H10T1/2细胞ALP活性(F=1 467.21,P=0.000)、钙盐沉积、OC(F=32.95,P=0.000)和OPN(F=127.23,P=0.000)蛋白表达;异位成骨模型中Dkk1抑制BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化和骨块成熟。结论:Wnt信号通路胞外拮抗因子Dkk1可降低BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化可能需要经典的Wnt信号通路参与。 廖军义 林良波 周年 梁熙 胡宁 毕杨 黄伟关键词:DKK1 间充质干细胞 骨向分化 联合表达BMP2和Sox9促进体外培养间充质干细胞成软骨分化 被引量:8 2014年 目的探讨联合表达骨形态发生蛋白2(BMP2)和Sox9对间充质干细胞(MSCs)成软骨分化的影响,为构建组织工程软骨提供实验依据。方法以小鼠胚胎骨髓MSCs(C3H10T1/2)为种子细胞,重组腺病毒BMP2诱导其分化,联用重组腺病毒Sox9过表达Sox9信号,重组腺病毒GFP作为对照。Real-Time PCR检测成软骨标志物Ⅱ型胶原(Col2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)、X型胶原(Col10a1)表达变化;Alcian blue染色了解细胞基质糖胺聚糖合成情况;免疫组化和Western blotting检测Col2a1合成情况。结果 BMP2能诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化,当与Sox9联合作用时,Sox9可促进BMP2诱导的(Col2a1、Aggrecan、Col10a1)基因表达上调;促进细胞基质糖胺聚糖、Col2a1蛋白合成。结论 BMP2与Sox9联合作用可以促进体外培养MSCs成软骨分化,可能为组织工程软骨提供新的方法。 廖军义 周年 林良波 易世雄 凡廷旭 赵辰 胡宁 梁熙 司维柯 黄伟关键词:骨形态发生蛋白2 SOX9 间充质干细胞 成软骨分化 BONE SOX9