李辉欣
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北师范大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省科技支撑计划项目河北省高等学校科学技术研究青年基金更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>
- 一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法
- 本发明公开了一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法。根据同源序列比对结果，通过定点突变技术将原玻璃蝇节杆菌(<I>Arthrobacter</I><I>protophormiae</I>,DSM15035)中D-...
- 鞠建松徐书景赵宝华李辉欣冯利伟
- 文献传递
- 原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶及突变体的酶学特性研究
- [目的]研究原核生物来源D-氨基酸氧化酶的酶学特性.[方法]通过PCR从原玻璃蝇节杆菌中克隆获得D-氨基酸氧化酶基因,构建原核表达载体,并以该表达载体为模板,采用QuickChange Site-Directed Mut...
- 冯利伟李辉欣徐书景鞠建松赵宝华
- D-氨基酸检测方法研究进展被引量：1
- 2013年
- 自然界中存在20种基本氨基酸,除甘氨酸外都有两种互成镜像的对映体D-型和L-型。长期以来,人们认为D-氨基酸仅存在于微生物中,参与构成细胞壁肽聚糖层。但随着分析方法的发展,人们相继在多种生物体中(包括人体)发现了多种D-氨基酸,D-氨基酸才引起人们的高度重视,并意识到它们在医药、农药和食品等的组成中起着重要作用。D-氨基酸检测方法还需要不断发展与完善,以便更好地分析和认识D-氨基酸的重要作用。主要介绍酶法、气相层析法、高效液相法及生物传感器等检测方法。
- 李辉欣鞠建松张琳琳徐书景
- 关键词：高效液相生物传感器
- 原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶及突变体的酶学特性被引量：3
- 2014年
- 【目的】研究原玻璃蝇节杆菌(DSM 20168)中D-氨基酸氧化酶的酶学特性。【方法】通过PCR从原玻璃蝇节杆菌(DSM 15035,20168)中克隆获得D-氨基酸氧化酶基因apdaao-1和apdaao-2,构建原核表达载体,以表达质粒pET-ApDAAO-2为模板,采用QuickChange Site-Directed Mutagenesis技术构建定点突变体,经过原核表达及纯化获得重组型和突变体酶蛋白,分析其酶学特性。【结果】通过原核表达及纯化成功获得了2个重组蛋白和4个突变体酶蛋白,SDS-PAGE检测显示其分子量均约为36 kDa;酶学特性分析表明,ApDAAO-2和突变体蛋白的最适反应温度为30℃;ApDAAO-2和T286A的最适反应pH范围为7.0-11.0,其它突变体为8.0-11.0;ApDAAO-2和突变体都具有较广泛的底物特异性,除T256K的最适底物为D-Phe外,其余均为D-Met;动力学参数测定结果显示,以二级表观常数kcat/Km表示,对于底物D-Met或D-Phe,ApDAAO-2和4个突变体的kcat/Km值均比ApDAAO-1和pKDAAO高数倍以上。【结论】ApDAAO-2及突变体具有比ApDAAO-1和pKDAAO更广泛的底物特异性和较高的催化效率,有一定的商业应用价值。
- 冯利伟郭姣洁李辉欣徐书景鞠建松赵宝华
- 关键词：D-氨基酸氧化酶定点突变
- 原核生物D-氨基酸氧化酶的克隆、表达及酶学特性表征
- 目的：克隆、表达、纯化原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶,研究其酶学性质;通过定点突变研究突变位点对其活性的影响。方法：利用PCR技术克隆目的基因,构建D-氨基酸氧化酶表达载体，通过Ni亲和层析法获得D-氨基酸氧化酶蛋白，以...
- 李辉欣徐书景鞠建松
- 关键词：D-氨基酸氧化酶基因突变酶学特性
- 文献传递
- 一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法
- 本发明公开了一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法。根据同源序列比对结果，通过定点突变技术将原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)中D-氨基酸氧化酶的115、119及286三个位点...
- 鞠建松徐书景赵宝华李辉欣冯利伟
- 文献传递
