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李伟芳: 作品数：33 被引量：170H指数：10; 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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UBAP1蛋白在鼻咽癌细胞中的表达和定位被引量：1: 2005年; 目的:研究泛肽相关新基因编码产物的特性和在鼻咽癌细胞内定位与表达。方法:利用生物信息学分析编码蛋白的一般性质并预测其定位,构建增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent prote in,EGFP)与UBAP1融合基因的真核表达载体pEGFP-C2-UBAP1,通过脂质体介导转染人鼻咽癌细胞系HNE1,荧光显微镜观察UBAP1基因编码蛋白在HNE1活细胞内定位。结果:融合蛋白可在HNE1细胞中高表达,主要定位在细胞核,有较为明显的核膜聚集现象。结论:UBAP1基因编码产物在HNE1中的表达差异可能是NPC发生的原因之一。; 曾朝阳钱骏熊炜周艳宏张文玲李小玲唐珂李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽癌绿色荧光蛋白细胞定位

高频等位基因不平衡位点D6S1581与鼻咽癌的遗传易感性研究被引量：10: 2003年; 目的　探讨鼻咽癌高频等位基因不平衡位点 D6 S15 81及在其附近克隆的鼻咽癌相关基因FBXO30与鼻咽癌发生的关系。方法　应用基因扫描技术 ,对 12个湖南鼻咽癌高发家系、85例散发鼻咽癌患者及 181名正常对照 D6 S15 81位点进行了基因分型、参数 /非参数连锁分析及关联分析。结果　在鼻咽癌家系中 D6 S15 81与鼻咽癌发病连锁 ,L ods值最高为 2 .6 114 36 (P=0 .0 0 2 4 5 ) ,关联分析结果也提示家族性鼻咽癌 D6 S15 81等位基因频率与正常对照组差异有显著性 (P<0 .0 0 5 )。结论　 D6 S15 81与湖南家族性鼻咽癌的发病之间可能有着密切的联系 ,该基因附近可能存在一个或多个与鼻咽癌发生发展有关的基因 ,FBXO30基因很可能就是其中之一。; 熊炜曾朝阳沈守荣李小玲李伟芳王蓉熊芳彭聪张秋红周鸣杨一新周厚德黄河李桂源; 关键词：鼻咽癌遗传易感性基因分型

鼻咽癌细胞中表达上调的新基因NAG23(FBXO30)的克隆与分析被引量：9: 2001年; 目的:分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581(6q25.3-27)附近与鼻咽癌相关的新基因。方法:运用差异RT-PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签(expressedsequencetags,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及其所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA,对该序列进行初步分析。结果:获得了一个位于6q25.3-27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23(FBXO30)(GenBank收录编号:AF248640)。该基因在68.9%的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F-box基序。结论:NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F-box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。; 李忠花曹利向娟娟张必成向秋唐珂周鸣李小玲李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽肿瘤基因克隆 F-BOX蛋白

利用动态等位基因特异性杂交技术进行单核苷酸多态高通量分型被引量：18: 2002年; 动态等位基因特异性杂交 (dynamicallele specifichybridization ,DASH)是新发展起来的一种单核苷酸多态(singlenucleotidepolymorphisms,SNP)等位基因分型技术 ,具有快速、经济、准确、高通量、重复性好等优点 .利用DASH技术 ,对 96份正常人外周血DNA样品成功地进行了两个SNP位点的基因分型 ,并摸索实验条件。; 曾朝阳熊炜沈守荣朱诗国李小玲李伟芳李江周鸣范松青马健周洁肖炳燚贺林李桂源; 关键词：单核苷酸多态基因分型

新克隆的硝基还原酶基因NOR_1的表达及其产物的纯化被引量：9: 2003年; 背景与目的:NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤/易感基因候选者之一,本实验旨在构建NOR1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化NOR1基因所编码的蛋白。方法:抽提人鼻咽正常组织中总RNA,利用RT-PCR扩增NOR1基因全长,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后插入同样经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后的pGEX-4T-2质粒,构建表达载体pGEX-4T-2/NOR1重组表达质粒;转化大肠杆菌Jm105,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-thiogalactoside,IPTG)诱导pGEX-4T-2/NOR1/Jm105表达GST融合蛋白后,采用Westernblot验证,并用GST琼脂糖亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序验证成功地构建了NOR1基因原核表达载体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析在大肠杆菌Jm105中成功诱导表达了一分子质量约为74kDa的融合蛋白;该融合蛋白存在于细菌裂解液的上清和沉淀中,Westernblot证实表达获得了成功;并利用亲和层析法获得了纯化蛋白。结论:成功获得了高效表达NOR1基因的原核表达产物,通过对该融合蛋白的纯化为它的多抗制备奠定了基础。; 聂新民肖炳李小玲张必成李伟芳王蓉曹利李桂源; 关键词：鼻咽肿瘤 RT-PCR 肿瘤生物学

一种细胞芯片制作方法及其器具: 本发明涉及一种细胞芯片。细胞芯片的制作方法为细胞固定、脱水、透明后，将经透明处理后的细胞置于一定规格的条形模具中浸蜡制成条状石蜡细胞芯条，然后直接将一定长度的条状石蜡细胞芯条按序放置于受体石蜡块中，利用胶带转移辅助系统进...; 李桂源范松青周洁肖炳燚熊炜曹利欧阳珏李伟芳唐珂; 文献传递

应用EST策略鉴定人类新基因UBAP1的数字化差异表达图谱被引量：13: 2002年; 背景与目的:UBAP1(ubiquitinassociatedprotein1)基因是我们先前在人类染色体9p21-22鼻咽癌杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)高频区所获得的一个鼻咽癌相关新基因。进一步地,我们应用EST策略鉴定UBAP1基因在多种肿瘤组织中的差异表达谱。方法:采用基于生物信息学的电子杂交方法,即以UBAP1基因的全长cDNA为“探针”,利用计算机对人类表达序列标签(expressedsequencetag,EST)和Unigene等数据库中代表UBAP1的EST在各类肿瘤及相应正常组织cDNA文库中的分布进行综合分析,研究UBAP1基因的数字化差异表达图谱。同时采用差异RT-PCR方法对UBAP1在3种肿瘤活检组织中的差异表达进行验证。结果:电子杂交结果表明UBAP1基因不仅在42种人类正常组织中广泛表达,而且在11种肿瘤组织中存在可能的表达差异,尤其是在脑瘤、乳腺癌、结肠癌、皮肤癌、睾丸癌和宫颈癌等肿瘤组织中表达显著下调(P<0.05),而在肾癌、胰腺癌中高表达(P<0.05)。进一步采用差异RT-PCR方法发现UBAP1基因在64%的脑膜瘤和72%的结直肠癌活检组织中具有明显表达缺失/下调。结论:UBAP1基因有可能与多种肿瘤的发生发展密切相关,有必要深入研究UBAP1基因的表达异常参与肿瘤发生发展的分子机制。; 钱骏张晓梅李小玲王洁如李伟芳王蓉李桂源; 关键词：表达序列标签基因表达数字化鼻咽癌

表达序列标签数据库搜索鉴定小鼠UBAP1基因及其数字化表达分析被引量：13: 2002年; UBAP1(ubiquitinassociatedprotein 1)基因是最近克隆的一个定位于人类染色体 9p2 1 2 2鼻咽癌杂合性丢失高频区的泛肽相关蛋白家族新成员 .为了深入研究UBAP1基因的功能 ,利用计算机对表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)、UniGene等数据库进行综合搜索分析 ,结合cDNA克隆测序的方法 ,成功地获得了UBAP1基因在小鼠中的同源基因 .小鼠UBAP1基因cDNA全长为 2 6 76bp ,编码一个由 44 1个氨基酸组成的蛋白质 ,在其蛋白质C端只有一个泛肽相关功能域 (UBAdomain) .与人UBAP1基因相比 ,两者编码的氨基酸序列有 89%相同 .基于EST的数字化表达分析显示UBAP1基因在小鼠正常组织中广泛高表达 .; 钱骏董利张必成王洁如周鸣李忠花李伟芳李小玲李桂源; 关键词：表达序列标签数据库搜索小鼠鼻咽癌基因克隆

染色体7q32-ter最小共同缺失区鼻咽癌抑瘤基因候选者的筛选被引量：4: 2000年; 目的：在明确 7q32- ter区域等位基因杂合性丢失最小共同缺失区位于以 D7S509为中心的 D7S500- D7S509- D7S495的基础上，筛选和克隆位于该区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用定位—候选克隆策略筛选位于该最小共同缺失区的 3′末端 ESTs(expressed sequence tags,ESTs),RT- PCR和 Northern杂交筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达下调的 ESTs,采用 cDNA克隆测序和生物信息学资源获取候选 EST的全长 cDNA。 Southern杂交和甲基化分析研究候选基因表达下调的机制。结果：筛选 D7S500- D7S495区域内的 12个代表新基因的 3′末端 ESTs序列，发现一个 EST（ AI290024）在鼻咽癌细胞株及 50％（ 6/12）的鼻咽癌活检组织中表达下调， Multiple Tissue Northern(MTNTM) Blot杂交结果显示该 EST在心、肝、肾等多种组织中存在大小 2.0 kb的转录本。通过测定包含该 EST的 cDNA克隆，获得该新基因（命名为 NAG- 22基因） 2.3 kb转录本的全长 cDNA(GenBank登录号： AF247820),编码 77AA，含有 disintegrin的结构域。 NAG22在 NPC中表达下调的机制不是高甲基化和基因拷贝数的丢失。结论： NAG22是定位于 7q32- ter最小共同缺失区的一个与鼻咽癌相关的抑瘤基因候选者。; 张小慧钱骏王洁如董利曹利周鸣唐珂李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽肿瘤

利用全基因组表达谱筛查鼻咽癌分子标志物: 本文为了寻找鼻咽癌的分子标志物,在鼻咽癌全基因组表达谱分析的基础上利用监督聚类方法筛选到的100个鼻咽癌差异表达基因,然后使用Weighted Voting算法最终筛选到6个基因,包括鼻咽癌上调基因RB1,STMN1,D...; 周艳宏李桂源曾朝阳熊炜李小玲肖岚张文玲武明花曹利李伟芳; 关键词：鼻咽癌分子标志物; 文献传递

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