徐贤坤
- 作品数：29 被引量：97H指数：5
- 供职机构：广西动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西科技创新能力与条件建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 聚乙二醇化重组人白细胞介素6的放射性标记被引量：1
- 2006年
- 分别用常规氯氨T和改进的双相氯氨T法对PEG-rhIL-6进行放射性碘标记,用柱层析法和离心超滤法对标记物分离纯化,同时用三氯乙酸沉淀法和SDS-PAGE电泳法鉴定纯化后的标记化合物放射化学纯度,采用rhIL-6依赖细胞7TD1,用MTT比色法测定标记物的生物学活性。结果表明:1.改进的双相氯氨T法标记率为74.5%,高于常规氯氨T法的62.3%,放射性比活度分别为5.513×105和4.610×105Bq/μg。2.经柱层析法和离心超滤法对标记物分离纯化后,用三氯乙酸沉淀法测得放射化学纯度均能达到99%以上。3.用SDS-PAGE电泳法检测两种标记方法所得的标记物与非标记物的结果表明,常规氯氨T法标记物比非标记物多1条高分子量蛋白带,认为是标记过程中蛋白质受到部分损伤;改进的双相氯氨T的标记物与非标记物蛋白质条带一致,认为蛋白质标记后基本没有受到损伤。4.生物活性检测表明改进的双相氯氨T标记物与非标记物活性之间无显著差异,常规氯氨T法标记物活性略低于双相氯氨T的标记物活性。
- 徐贤坤王霜曾宪垠汪淑芳
- 关键词：放射性碘标记MTT比色法
- 猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank中5′端非编码区的靶序列设计了用于TaqMan荧光定量PCR的1对引物及TaqMan探针,以猪瘟活疫苗病毒为模板,在常规PCR的基础上优化了TaqMan荧光定量PCR反应条件,建立了猪瘟病毒(CSFV)TaqMan荧光定量PCR检测方法。其敏感性和特异性试验结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法对CSFV具有很高的特异性,其检测灵敏度可达5.03×10-2μg/μL。说明TaqMan荧光定量PCR适用于CSFV的快速检测。
- 马琳付薇何奇松徐贤坤易春华孙翔翔蒋家霞黄胜斌熊毅
- 关键词：猪瘟病毒TAQMAN探针
- 广西参与式农村发展模式研究——以辇田尾村开展参与式整村推进扶贫为例被引量：3
- 2012年
- 文章采用案例分析方法,以广西灵川县东田村辇田尾自然村实施实施参与式整村推进扶贫项目为依托,探讨参与式方法在贫困村扶贫开发项目制定和实施过程中,如何将贫困村长期积累的经验与参与式扶贫开发的积极性充分发挥出来,分析广西参与式整村推进扶贫开发工作的现实意义。
- 张展智左停徐贤坤
- 关键词：参与式扶贫
- 两种奶牛结核病检测方法的比较被引量：15
- 2010年
- 本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性为53.33%,特异性为70.49%,符合率为67.11%。本研究证实单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在非特异性强等缺点,易造成假阳性牛的误杀;用抗原特异性IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性,该方法在临床上有重要应用价值。
- 徐贤坤黄小武蓝纪黄胜斌熊毅刘棋韦正吉黄益泓
- 关键词：奶牛结核病皮内变态反应
- 2株鹅细小病毒的主要结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2008年
- 将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚,收集接毒后24～72h死亡的鸭胚尿囊液。根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物,对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明:PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp,PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%～96.7%,与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右,与匈牙利株的同源性仅为80.7%,而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%～80.7%。XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%,与番鸭细小病毒的同源性为76.8%～80.0%,与其他毒株的同源性为91.6%～98.3%。
- 胡晓静潘杰陈进喜付薇徐贤坤何丹刘棋熊毅
- 关键词：鹅细小病毒VP2基因克隆
- 水牛γ-干扰素单克隆抗体制备及水牛结核病夹心ELISA检测方法的初步建立
- 牛结核病/(tuberculosis,TB/)是由牛结核分枝杆菌引起的慢性消耗性疾病,呈世界性分布。牛结核病的诊断方法主要有病原鉴定和皮内变态反应。细菌学检查需要5～8周时间,检出率低,且常有假阴性结果出现而不适合于流行...
- 徐贤坤
- 关键词：牛结核病水牛Γ-干扰素原核表达单克隆抗体夹心ELISA
- 文献传递
- 广西猪源H9N2亚型流感病毒全基因组序列分析被引量：3
- 2012年
- 【目的】了解广西猪源H9N2亚型流感病毒的来源及变异情况,为有效防控广西猪源H9N2亚型流感病毒奠定基础。【方法】运用RT-PCR对广西分离株A/SW/GX/S11/05(H9N2)进行全基因组扩增,并克隆测序及对比分析。【结果】扩增获得的HA、NA、NP、M、NS、PB1、PB2和PA基因片段长度分别为1683、1401、1497、1027、890、2233、2280和2151bp,其推导氨基酸分别为561、467、499、349、338、744、760和717aa。经过序列分析,发现各基因片段的核苷酸及其推导氨基酸与A/Bird/GX/62/05株的同源性最高,分别为96.2%～100.0%和98.5%～99.6%;系统进化分析也表明A/SW/GX/S11/05株与A/Bird/GX/62/05株的亲缘关系最近。【结论】广西猪源H9N2亚型流感病毒属于欧亚谱系的北京亚系,且在一定时间内不同宿主间均有感染,在今后的流感病毒防治工作中,跨种属传播是一个不可忽视的问题。
- 伍和明韦达有易春华徐贤坤何奇松孙翔翔蒋家霞付薇熊毅
- 关键词：H9N2亚型全基因组
- 鹅源H9N2亚型禽流感病毒PB2和PB1基因序列分析被引量：1
- 2011年
- 采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和758个氨基酸。经同源性和系统进化树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2和PB1与H9N2亚型欧亚谱系中的第2亚群代表株QA/HK/G1/97的核苷酸和氨基酸同源性在95%以上,亲缘关系较近。
- 付薇覃芳芸马琳徐贤坤黄胜斌易春华孙翔翔何奇松蒋家霞熊毅
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型
- γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用被引量：12
- 2013年
- 【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头，阳性检出率分别为1.15％和1.08％，总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测，发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应，且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时，先以变态反应检疫牛群，再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断，更有利于牛结核病的检测与净化。
- 徐贤坤熊毅韦达有黄小武蓝纪黄胜斌马琳刘棋
- 关键词：牛结核病皮内变态反应流行病学调查阳性率
- 简便高效的蛋白质双相氯胺-T碘标法的建立及其应用
- 2005年
- 对双相氯胺-T碘标法实验装置作了改进并标记长效促红细胞生成素(LL-EPO),采用离心超滤技术代替传统的柱层析脱盐纯化标记蛋白质。结果显示125I-LL-EPO具有高比活性、高生物活性、高回收率。说明双相氯胺-T碘标法简单方便,是蛋白质同位素碘标记的理想方法;离心超滤技术适合放射性碘标记蛋白质的纯化。
- 包伦汪淑芳徐贤坤王霜曾宪垠
