彭素芳
- 作品数：10 被引量：42H指数：3
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人外周血CD8^+T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础。方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG30℃诱导4h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定。结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1248bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致。成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白。
- 李雅贞王胜军石燕戴晓莉彭素芳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：RUNX3基因CDNA克隆原核表达
- 胃癌患者外周血单个核细胞RORγt和IL-17 mRNA水平的检测及临床意义被引量：5
- 2009年
- 目的检测胃癌患者外周血中单个核细胞(PBMC)中转录因子RORγt和细胞因子IL-17的表达水平及血浆IL-17的表达,探讨Th17细胞特异性RORγt及IL-17的变化在胃癌临床监测中的意义。方法收集43例胃癌患者外周血标本,40例健康志愿者标本;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-17的表达;采用直线相关检验方法对健康人群和胃癌患者转录因子RORγt和IL-17表达水平进行相关性分析。结果胃癌患者外周血PBMC的RORγt、IL-17mRNA表达水平均明显高于健康对照组(P<0.05),且二者呈现明显正相关(P<0.01);胃癌转移组与未转移组相比,RORγt和IL-17 mRNA明显升高(P<0.05),此外,血浆IL-17的表达也明显升高(P<0.01)。结论胃癌患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA表达水平及血浆IL-17明显升高,提示Th17细胞与胃癌的发生发展可能存在着一定的关系。
- 彭素芳王胜军陈建国陈勋李雅贞戴小莉苏兆亮薛渊吴燕夏圣邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：胃癌RORΓTIL-17
- 铜绿假单胞菌多表位核酸疫苗的构建及其生物学作用的研究被引量：9
- 2008年
- 目的:构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)多表位-MyD88基因疫苗并对其免疫原性进行研究。方法:将PA外膜蛋白F(OprF)的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,采用重叠PCR方法合成DNA,并在此序列前插入组织型纤溶酶原(tPA)的信号肽基因,将此获得的片段与MyD88基因分别克隆入pIRES载体构建重组质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,并将该质粒免疫Balb/c小鼠,采用ELISA法测定特异性抗体水平。气管内接种PA,进行肺组织匀浆PA细菌计数。结果:成功构建真核表达质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,用该质粒免疫小鼠,能刺激机体产生高度特异性抗体,气管接种PA后,免疫组小鼠肺匀浆细菌计数明显低于其他对照组。结论:成功构建了重组有MyD88基因的PA表位核酸疫苗,接种小鼠后可诱导特异性免疫应答,产生较好的抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。
- 陈建国苏兆亮柳迎昭王胜军彭素芳李雅贞邵启祥许化溪
- 关键词：铜绿假单胞菌MYD88表位疫苗免疫原性
- 人脐血单个核细胞H1x基因的克隆、表达及其融合蛋白的免疫原性分析
- 1991年,Allen等人[1]从鼠前B细胞中分离得到一种新型同源盒基因(homeobox genes,HOX),该基因和果蝇的同源盒基因H2.0高度类似,被命名为H2.0样实框(H2.0-likehomeobox ge...
- 戴晓莉王胜军苏兆亮彭素芳李雅贞薛渊何志强陈建国邵启祥黄新祥许化溪
- 文献传递
- 胃癌患者Th17/Treg转录因子及相关细胞因子mRNA的检测及其临床意义
- 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,每年死于胃癌的病人占全部恶性肿瘤死亡患者的1/5。有研究表明,Treg细胞在肿瘤患者诱导免疫耐受,促进肿瘤增长,是肿瘤免疫的重要负向调节因素。Th17细胞是CD4+T细胞的一个新亚群,在炎症和...
- 彭素芳王胜军陈建国戴小莉石燕李雅贞苏兆亮薛渊夏圣邵启祥黄新祥许化溪
- 文献传递
- 胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子与相关细胞因子的检测及临床意义被引量：24
- 2010年
- 目的了解胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的转录因子及其相关细胞因子的表达水平，探讨其在胃癌发展进程中的作用。方法收集57例胃癌患者、31例胃部良性疾病患者和40例健康志愿者的外周血，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）技术，检测外周血单个核细胞中Th17和Treg细胞的特异性转录冈子RORγt和FoxP3mRNA的表达水平；采用酶联免疫吸附试验（ELISA），检测胃癌患者血浆中IL一17、IL-23、转化生长因子β（TGF一β）和IL一10的浓度。结果胃癌组FoxP3和RORγt／tmRNA的表达水平分别为2．349±0．491和0．794±0．304，明显高于健康对照组和良性疾病组（均P〈0．05），FoxP3／RORγt比值也高于健康对照组和良性疾病组（P〈0．05），而良性疾病组与健康射照组差异无统计学意义（P〉0．05）。中晚期胃癌组的FoxP3／RORγ／t比值明显高于早期胃癌组（P〈0．05）。胃癌组血浆中IL一17、IL一23、TGF一β和IL一10的水平明显高于健康对照组（P〈0．05），中晚期胃癌组TGF一β和IL一10水平明显高于早期胃癌组（P〈0．05）。结论胃癌患者存在高Th17和Treg细胞水平，且随着病程的进展Treg细胞仍维持强势，FoxP3／RORγt比值明显增高。监测胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子和相关细胞因子水平，有助于对病程的判断。
- 彭素芳王胜军陈建国戴晓莉石燕李雅贞苏兆亮薛渊何志强黄新祥许化溪
- 关键词：RORΓTFOXP3TREG细胞
- 人脐血单个核细胞Hlx基因的克隆、表达及其融合蛋白的免疫原性分析
- 2009年
- 目的克隆人Hlx基因全长编码区,利用载体pQE30在大肠埃希菌M15中原核表达人Hlx基因,对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体。方法利用RT-PCR技术从人脐血单个核细胞中克隆出Hlx基因,构建重组表达质粒pQE30/Hlx,并于大肠埃希菌M15中表达,经Western blot判断,以可溶形式存在带6×His标签的融合蛋白,用Ni2+-MAC层析柱对其进行纯化;将纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果成功克隆人Hlx基因编码区全长,包含1467bp,编码488个氨基酸残基。获得人Hlx融合蛋白和多克隆抗体,ELISA和Western blot结果表明融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。结论成功构建了原核表达质粒pQE30/Hlx,经纯化获Hlx蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究人Hlx的生物学功能奠定了基础。
- 戴晓莉王胜军苏兆亮彭素芳李雅贞薛渊何志强陈建国邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 胃癌患者Th17//Treg细胞转录因子及相关细胞因子的检测与临床意义
- 目的:
检测胃癌患者Th17主要转录因子与Treg细胞特异性转录因子及Th17//Treg相关的细胞因子的表达水平,分析Th17//Treg在胃癌患者的变化情况,观察其与临床病理组织分型之间的关系,并初步探讨...
- 彭素芳
- 关键词：RORΓTFOXP3
- 文献传递
- 临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的筛查与Ⅰ类整合子结构分析被引量：2
- 2009年
- 目的调查镇江地区临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的检出情况,分析I类整合子-基因盒结构特征。方法对临床收集的细菌采用PCR方法、T-A克隆以及基因测序技术对3类整合酶基因以及I类整合子的结构进行分析。结果296株革兰阴性肠杆菌科细菌和不发酵糖菌中I类整合酶基因的检出率最高为43.2%。其中在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌中的检出率分别为61.0%、14.3%、37.3%和20.0%,而Ⅱ、Ⅲ类基因的检出率较低。对I类整合子基因盒结构分析发现共检测到5种不同基因盒,分别为:dfrA17、aadA5、aadA1、aadA2、dhrfⅪ,有4种不同的基因盒排列方式。结论镇江地区临床分离的细菌I类整合子-基因盒检出率较高。
- 戴晓莉苏兆亮陈建国彭素芳李雅贞许化溪
- 关键词：整合子基因盒革兰阴性菌
- 铜绿假单胞菌B细胞表位-MyD88表达质粒的构建及其相关研究
- 2009年
- 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）外膜蛋白F（OprF）的主动免疫能诱发机体产生特异性体液免疫应答，发挥局部保护作用。然而OprF的完整蛋白对机体具有潜在的危害性。现有研究表明OprF蛋白含有大量的B细胞表位，因此，应用OprF优势抗原表位设计的疫苗，既能诱导机体产生抗Pa的中和抗体，又能克服非抗原决定簇成分潜在的毒副作用。考虑到表位蛋白的免疫原性较弱，不足以引发良好的免疫应答，
- 陈建国王胜军柳迎昭苏兆亮李雅贞戴晓莉彭素芳邵启祥许化溪
- 关键词：铜绿假单胞菌B细胞表位表达质粒体液免疫应答抗原决定簇主动免疫
