张永欣
- 作品数：8 被引量：52H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家科技攻关计划中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 应用基因芯片集成系统快速诊断8种猪病病原
- 本实验以严重影响猪生长、健康、繁殖的8种重要的病原为研究对象，构建了能同时、快速、诊断这8种病原的cDNA芯片检测技术的平台。本实验研究的相关病原有猪日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，...
- 张永欣
- 关键词：病原检测
- 文献传递
- 中国东北地区3株日本脑炎病毒株的分离鉴定及基因分型被引量：10
- 2009年
- 从黑龙江省某3个猪场采集疑似为日本脑炎病毒感染的病、死猪的脏器以及全血，进行病毒的细胞培养，蚀斑纯化，间接免疫荧光试验，电镜下观察病毒粒子的形态，及RT—PCR检测。结果显示，盲传三代后，出现明显的细胞病变（CPE＋～CPE＋＋＋）；荧光显微镜下细胞胞质内呈现不同强度的绿色荧光信号；电镜下的病毒粒子为40-60nm的球型粒子；PCR检测为日本脑炎病毒阳性。通过对3株分离株腑扩增序列比较，此3株分离株为基因Ⅲ型。
- 张永欣符芳宋淑萍李曦吴东来
- 关键词：JEV间接免疫荧光电镜
- 五种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其应用被引量：20
- 2010年
- 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上,以这5种细胞毒的核酸作为模板,进行不对称PCR扩增,制备靶物,经绿色荧光染料Cy3标记后,分别与cDNA微阵列的芯片探针进行杂交,杂交信号经Genepix 4000A扫描仪扫描。结果显示,该芯片探针可以特异地与Cy3标记的这5种靶物结合。用该基因芯片对100份现地采集的猪全血样品进行检测,检出PRRSV阳性样品26份,PCV-2阳性样品47份,PRRSV和PCV-2混合感染阳性样品17份,PPV阳性样品5份,PRV阳性样品2份,CSFV阳性样品20份。表明,本试验研制的cDNA芯片探针可以特异地检测这5种猪病病毒,具有良好的诊断应用前景。
- 符芳杨玉菊陈微晶张永欣蔡雪辉李曦宋淑萍
- 关键词：基因芯片猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪瘟病毒
- PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR GreenⅠ实时荧光PCR鉴别方法的建立被引量：11
- 2009年
- 根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性。应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、142、1 d分别采集全血,检测结果均为阳性。证实,本试验所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株。
- 柴政李曦王小武符芳张永欣肖晶蔡雪辉周艳君宋淑萍
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒SYBR
- 新城疫病毒HN基因真核细胞定位表达的重组质粒的构建被引量：2
- 2009年
- 目的构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN（hemagglutinin—neuraminidase）基因。方法应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，以新城疫病毒D90株RNA为模板，分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段，将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒pcDNA3．1（＋）中，经过定向插入组织凝血酶原激活物（tPA）的前导序列和／或A型流感病毒血凝素（HA）基因跨膜区（TM）片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒。结果所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确。经过体外转染真核细胞，间接免疫荧光和SDS．PAGE蛋白质电泳检测，证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外。结论成功构建了定位表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型。
- 隋红李曦张永欣肖晶符芳李乐静白玉贤
- 关键词：新城疫病毒细胞定位质粒构建
- Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：1
- 2010年
- 为了研究PCV2 Cap蛋白的检测方法,试验应用哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室猪病分子诊断组已构建的基因工程重组菌NLS-Cap M15,经IPTG诱导表达获得原核表达Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白,经亲和层析纯化后免疫6周龄Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选获得了3株分泌Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2C3、2F3、1E10。结果表明:2C3、2F3均属于IgG1型,1E10属于IgG2a亚型,轻链都是κ链;经Western-blot检测,获得的3株单抗均可以特异性的识别Cap蛋白;ELISA检测其腹水效价均为1.0×105;间接免疫荧光检测单抗2C3、2F3、1E10反应均为阳性,表明这3株单抗能够识别PCV2病毒。
- 李海忠符芳张永欣李曦宋淑萍
- 关键词：CAP蛋白单克隆抗体
- 鸡白痢沙门氏菌病的研究进展被引量：7
- 2008年
- 文章综述了鸡白痢沙门氏菌病的流行病学、病原菌及其预防、治疗方法,为近几年来在养鸡场经常出现的鸡白痢病的诊断及防治提供理论依据。
- 朱长清张永欣
- 关键词：病原学鸡白痢沙门氏菌
- 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建
- 2009年
- 为应用CloneminerTMcDNA Library Construction Kit构建高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪的外周血单核细胞cDNA文库,以1×105TCID50PRRSV肌肉接种健康猪,攻毒后第3、5、7、9、14、21及28 d分别采集感染猪外周血,分离单核细胞,提取总RNA、mRNA,以mRNA为模板,通过引物Biotin-attB2-Oligo(dT)、SuperScript.ⅡRT合成5′末端具有attB1接头的cDNA。用柱层析方法纯化cDNA,纯化后的cDNA与pDONRTM222载体进行BP重组,于大肠杆菌DH10B转化,进行文库容量测定。结果表明,构建的高致病性PRRSV感染猪外周血单核细胞cDNA文库的库容量为1.36×107CFU,平均插入片段长度大于1 200 bp,重组率为94.3%,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。
- 肖晶符芳李海忠张永欣柴政蔡雪辉宋淑萍李曦
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒外周血单核细胞CDNA文库
