张春杰
- 作品数：483 被引量：940H指数：14
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定被引量：5
- 2013年
- 试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd,通过双酶切和PCR对质粒进行鉴定。结果表明,携带NDV HN基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)构建成功。本研究结果为开发鸡新城疫的口服基因工程活载体疫苗奠定了基础。
- 田芳华程相朝张春杰李银聚李静刘一尘
- 关键词：HN基因减毒鼠伤寒沙门氏菌
- 支气管败血波氏杆菌PRN黏附素R1区蛋白的免疫原性被引量：2
- 2009年
- 百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实2种表达产物GST-R1和GST-PRN均具有良好的免疫学反应活性。在主动免疫保护试验中,GST-R1和GST-PRN免疫组小鼠均能产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的Bb强毒株HH0809进行鼻腔攻毒后,其保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50HH0809攻毒时,其保护率分别为33.3%(3/9)和77.8%(7/9)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-R1和GST-PRN兔抗血清均能100%(10/10)保护小鼠抵抗10 LD50HH0809的腹腔攻击,但经PRN吸附后的2种兔抗血清均失去了保护力(0/5)。这些研究结果表明,重组PRN的N端R1区多肽具有良好的免疫原性。
- 吴庭才赵战勤王臣张春杰吴斌程相朝何启盖
- 关键词：支气管败血波氏杆菌免疫原性
- 减毒猪霍乱沙门菌△cya△asdC78-1宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究
- 为开发适用于猪的能够稳定携带外源基因的口服活疫苗载体,本研究在减毒猪霍乱沙门菌△cyaC78-1基础上,利用自杀性质粒介导的等位交换技术,构建△cya△asdC78-1宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。P...
- 尚珂张俊峰程相朝张春杰李银聚吴庭才余祖华赵战勤丁轲陈桂华
- 文献传递
- 应用降落PCR检测减蛋综合征病毒的研究被引量：5
- 2003年
- 根据已发表的减蛋综合征病毒 (EDSV)核苷酸序列设计了 1对扩增长度为 1 .1kb左右的引物 ,采取降落PCR对EDSV gDNA进行扩增。结果 ,从 2份EDSV鸭胚尿囊液、3份人工感染鸡输卵管组织液的核酸抽提物中 ,均扩增出与设计大小完全一致的目的片段 ,而对照样品的扩增均为阴性 ,该方法最低可检测到 32pg的EDSV gDNA。表明该降落PCR用于检测EDSV特异性和敏感性均较强 。
- 张春杰李银聚程相朝吴庭才郑祥海
- 关键词：减蛋综合征病毒降落PCR敏感性蛋鸡
- 减毒猪霍乱沙门菌△crp△cya△asdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究
- 为开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体,本研究在减毒猪霍乱沙门菌△crp△cyaC78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株△crp△cya△asdC78-1,再将携带asd...
- 尚珂张俊峰程相朝张春杰李银聚余祖华丁轲颜云飞陈桂华金修哲赵战勤
- 文献传递
- 减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建
- 应用降落PCR技术扩增出减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因并将其克隆至pMDT-18载体上,经酶切、PCR鉴定及测序结果表明插入的片段为目的基因,全长2.733 kb,共编码910个氨基酸。切下该目的基因定向克隆至pET-28...
- 张春杰吴庭才程相朝李银聚郑祥海
- 关键词：减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因
- 猪源A型和D型多杀性巴氏杆菌强毒菌株的生物学特性比较研究被引量：10
- 2016年
- 为分析猪源A型和D型多杀性巴氏杆菌(PM)的生物学特性差异,本研究对5株A型和5株D型猪源PM强毒菌株的生化特征、生长特性、毒力特性、16SrRNA基因分子特征等生物学特性进行了比较研究。在TSB液体培养基中的生长曲线测定结果表明这些菌株均能够高密度发酵培养;21种生化试验的反应结果表明,10株PM的生化反应均不一致,即使同一血清型的不同菌株之间也具有较大差别。对小鼠毒力试验结果表明,A型PM菌株的毒力(LD_(50)为4 cfu^26 cfu)显著强于D型菌株(LD50为2.1×10~4 cfu^5.2×10~5 cfu)。16SrRNA基因的序列分析结果表明,16SrRNA基因非常保守,这10株PM之间的同源性均在99.8%以上;在1 505 bp序列中,仅存在第57 bp(T/C)、239 bp(T/C)和376 bp(G/C)处3个多态性位点,并且不具有型特异性。本研究为猪源PM灭活疫苗菌株的筛选等提供了实验依据。
- 赵战勤刘倩玉席晓剑王乐邓雯薛云张春杰
- 关键词：多杀性巴氏杆菌血清型生物学特性
- 用于检测副猪嗜血杆菌的LAMP引物、试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种用于检测副猪嗜血杆菌的LAMP引物、试剂盒及检测方法，属于病原微生物检测技术领域。本发明根据GenBank登录号为CP015099的副猪嗜血杆菌的脂多糖组蛋白基因的6个不同区域设计LAMP引物，与常规PC...
- 丁轲李艺璇余祖华王国杰邱静静赵战勤汪洋李旺李元晓何万领张春杰
- 文献传递
- 减毒鼠伤毒沙门菌SL1344ΔsseK1Δasd宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究
- 杨亚东张春杰廖成水郁川余祖华程相朝王二鑫张晓洁
- 稳定表达猪瘟病毒NS5A蛋白的细胞系的建立
- 2015年
- 为了探索猪瘟病毒非结构蛋白5A(NS5A)的功能,成功扩增了猪瘟病毒NS5A基因的DNA片段并构建了猪瘟病毒NS5A基因的重组表达质粒pGFP-NS5A和pNS5A-GFP。然后,将阳性质粒pGFPNS5A、pNS5A-GFP和对照质粒pEGFP-C1在Lipofectamine 2000介导下转染猪血管内皮细胞(SUVEC),活细胞状态下直接观察GFP-NS5A和NS5A-GFP蛋白在SUVEC细胞中的表达与定位。结果显示,猪瘟病毒NS5A蛋白主要定位于细胞质中;进一步的激光共聚焦共定位显示,NS5A蛋白主要定位于SUVEC细胞的内质网上面。在此基础之上,通过含有1 500μg/mL新霉素(G418)的抗性培养基筛选出稳定表达猪瘟病毒NS5A蛋白的细胞克隆。RT-PCR和Western-blot检测结果表明,猪瘟病毒NS5A蛋白可以在SUVEC细胞中稳定转录和表达。上述结果表明,本研究建立了稳定表达猪瘟病毒NS5A蛋白的SUVEC细胞株,为进一步研究NS5A蛋白对SUVEC细胞的生理功能的影响及其在猪瘟病毒致病过程中的作用奠定了基础。
- 何雷张彦明程敏梁武龙林吉辉陈宝玉张春杰程相朝
- 关键词：猪瘟病毒非结构蛋白NS5A蛋白
