周丽芹
- 作品数：7 被引量：11H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞抑制转基因小鼠HBV复制被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨经分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg18-27经CTP转导体内诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用. 方法 20只HBV转基因小鼠随机分组,100 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin,50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasi,50 μg CTP-HBcAg18-27及等渗盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次.流式细胞仪检测脾细胞中CTL水平,微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中HBsAg水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBVDNA水平,肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.数据用均数±标准差((x-)±s)表示,用SPSS16.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),组间两两比较采用LSD法. 结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.70％±0.20％),其水平高于对照组50 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin (1.66％±0.53％)及50μg CTP-HBcAg18-27 (1.26％±0.56％)和空白组(0.75％±0.71％),F=741.45,P=0.000.肝脏HE染色及免疫组织化学结果显示实验组肝组织中炎性细胞的数量明显增多及HBsAg的表达显著减少,同时对小鼠血清中HBsAg及HBV DNA有明显的抑制作用. 结论 分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg 18-27经CTP转导免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量,显著降低血清中HBsAg及HBV DNA水平,同时抑制肝脏中HBsAg的表达.
- 唐余燕陈小华周丽芹卓萌臧国庆汤正好余永胜
- 关键词：转基因小鼠TAPASIN
- 胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用被引量：5
- 2012年
- 目的观察融合蛋白胞质转导肽（CTP）-HBcAg18-27-Tapasin诱导体外培养的小鼠髓源性树突状细胞（Dc）成熟和对T淋巴细胞增殖的作用。方法体外分离、培养近交系BALB／c小鼠髓源性DC，加入重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和IL-4培养5d，再加入脂多糖诱导成熟。10,ug／LCTP—HBcAg18-27-Tapasin、50,ag／LCTP—HBcAg18-27-Tapasin、10p．g／LCTP-HBcAg18-27及RPMI-1640培养液加入培养介质。流式细胞术测定DC表面分子表达，EusA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平，细胞计数试剂盒检测T淋巴细胞增殖反应，流式细胞术检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子。多个样本均数间的比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。结果成功体外诱导小鼠髓源性DC；CTP—HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD86及主要组织相容性复合体-1分子的表达；509g／LCTP—HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平为（61．12±10．25）pg／mL，依次高于10／xg／LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组的（50．43±10．42）pg／mL、10〉g／LCTP-HBcAgl8m组的（40．17±8．54）pg／mL和空白组的（30．51±8．03）pg／mL（F=15．85，P=0．030和P=0．037）；CTP—HBcAg18-27-Tapasin诱导DC刺激T淋巴细胞增值能力明显高于对照组；流式细胞仪检测融合蛋白诱导的CTL水平50μg／LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组为（2．05±0．41）％、10μg／LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组为（1．06±0．10）％，高于10〉g／LCTP-HBcAg18-27组的（O．45±0．11）％和空白组的（O．09±0．02）％（F=60．22，P=0．003）。结论CTP-HBcAg18-27-Tapasin可以促进DC的分化、成熟，增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力并能增加CTL的表达。
- 刘红红陈小华周丽芹刘雪妮余永胜臧国庆汤正好
- 关键词：T淋巴细胞
- 抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达
- 2013年
- 目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.
- 卓萌唐余燕余永胜周丽芹潘庆春王鹏臧国庆汤正好
- 关键词：肿瘤坏死因子Α
- 强制泛素化HBcAg融合基因重组慢病毒对小鼠体内细胞毒性T细胞的诱导作用被引量：1
- 2013年
- 目的观察强制泛素化HBcAg（Ub-HBcAg）融合基因重组慢病毒（Lv）对小鼠体内细胞毒性T细胞（cIL）的诱导作用。方法包装重组LV、Ub及HBcAs基因分别获得LV-HBcAg及LV-Ub-HBcAg融合基因；选取Balb／c小鼠32只，分为磷酸盐缓冲液组（PIGS组，4只，200vLPBS）、LV组（4只，200uL PBS和2×107拷贝LV的混悬液）、慢病毒HBc鲰融合基因组（LV-HBcAg组，12只，200vLPBS和2X107拷贝LV-HBcAg的混悬液）、慢病毒Ub-HBcAg融合基因组（LV-Ub-HBcAs组，12只，200t,LPBS和2X107拷贝LV-Ub-HBcAg的混悬液），所有组别的小鼠均采用尾根部皮内注射。免疫后提取小鼠T细胞，流式细胞术双标法检测胞内IFN-γ水平，ELISA法检测T细胞培养液上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的分泌水平，CCK-8试剂盒检测T细胞增殖反应。结果LV-Ub-HBcAg组诱导的CTL数量高于LV-HBcAg组（t=2．30，P〈0．05）；LV-Ub-HBcAg组T细胞的增殖反应强于LV-HBcAg组（t=2．25，P〈0．05）；免疫后LV-Ub-HBcAg组分泌的IFN-γ（44．57±2．91pg／mL）和IL-2（152．77±12．39pg／mL）高于LV-HBcAg组分泌的IFN-γ（37．23±0．84pg／mL）和ID2（101．24±5．09pg／mL），差异均有统计学意义（t=2．12、2．66，P〈0．05），LV-Ub-HBcAg组和LV-HBcAg组细胞因子Ⅱ，4和IL-10分泌差异无统计学意义（t=0．83、1．00，P〉0．05）。结论LV-Ub-HBcAg能够有效刺激T细胞增殖、活化，促进Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的分泌。抗原强制泛素化能够促进抗原蛋白的有效提呈，诱导更高水平的免疫应答。
- 周丽芹卓萌陈小华余永胜臧国庆汤正好
- 关键词：CTL泛素
- CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin融合表达载体的构建及其表达和纯化被引量：2
- 2013年
- 目的构建CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合基因表达质粒并分离、纯化融合蛋白。方法以质粒pCMV-SPORT6中Tapasin基因为模板,设计一对引物,上游引物带有融合基因CTP-HBcAg18-27序列,进行PCR反应;PCR产物回收纯化克隆到质粒pREST-B中,双酶切及测序鉴定;将鉴定正确的质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达;镍柱亲和层析法纯化融合蛋白;Western blotting鉴定融合蛋白。结果由质粒pCMV-SPORT6 PCR扩增得到1 480 bp大小的条带,为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合序列;将其克隆到表达质粒pREST-B后经酶切、测序结果正确;表达质粒转化DE3后成功表达,经纯化得到52.3 KD的蛋白;Western blotting鉴定为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白。结论成功构建了CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合表达质粒,并成功表达,为进一步研究此融合蛋白的功能提供了实验基础。
- 刘红红陈小华周丽芹刘雪妮余永胜臧国庆汤正好
- 关键词：CTPTAPASIN融合蛋白
- CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白胞内转导功能的检测被引量：6
- 2012年
- 目的:观察融合蛋白CTP-HBcAg18-27-Tapasin在抗原提呈细胞内的转导功能。方法:体外分离培养近交系BALB/c小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4培养5d,再加入脂多糖诱导DC成熟。不同剂量的CTP-HBcAg18-27-Tapasin及RP-MI-1640培养液加入细胞培养介质中,激光共聚焦显微镜下观察免疫荧光在细胞内的分布及定位,并对荧光强度进行定量分析,进一步以West-ern blot观察不同组细胞中Tapasin表达的差异来检测CTP-HBcAg18-27-Tapasin的转导效率。结果:成功体外诱导培养并鉴定小鼠骨髓源性树突状细胞,免疫荧光法证实CTP-HBcAg18-27-Tapasin能够穿透树突状细胞膜进入细胞质,而不能进入细胞核,且荧光强度50μg/L CTP-HB-cAg18-27-Tapasin组依次高于10μg/L CTP-HBcAg18-27-Tapasin组和空白组,Western blot也证实CTP-HBcAg18-27-Tapasin能够穿透细胞膜进入树突状细胞,结果显示差异有统计学意义。结论:CTP-HBcAg18-27-Tapasin具有穿透树突状细胞膜定位于胞浆的能力。
- 刘红红陈小华周丽芹刘雪妮余永胜臧国庆汤正好
- 关键词：CTP
- 乙型肝炎病毒感染者体内树突细胞及树突细胞疫苗研究现状
- 2012年
- 树突细胞（DC）是目前已知功能最强的专职抗原提呈细胞（APC），为当前抗肿瘤、抗病毒等疾病免疫治疗研究的热点。近年来，对DC疫苗的探索和研究为多种疾病的免疫治疗提供了新的治疗前景。此文就DC在慢性乙型肝炎中的研究现状进行综述。
- 周丽芹汤正好
- 关键词：树突细胞DC疫苗肝炎乙型
