刘顺梅
- 作品数：40 被引量：102H指数：7
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 摄食转基因集胞藻牙鲆的安全性评价被引量：4
- 2007年
- 评价转牙鲆生长因子基因集胞藻作为鱼类饲料添加剂的安全性。将摄食转基因集胞藻的牙鲆肌肉以10.0 g/kg.BW.d剂量给小鼠连续灌喂8周,对试验鼠的摄食量、体重、血液常规和血生化指标、脏体系数以及生殖机能进行了检测,对组织器官进行了病理学检查。研究结果显示,灌喂摄食转基因藻牙鲆的小鼠,其摄食量、体重、血液常规、血生化指标及脏体系数与对照小鼠无显著差异(P>0.05),其生殖机能和肝、肾等组织器官未受损害。表明转基因集胞藻作为牙鲆饲料添加剂不能通过食物链对食鱼生物造成不良影响,是安全无毒的。
- 刘顺梅臧晓南张学成刘滨张维芬孙平楠况成宏
- 关键词：牙鲆小鼠安全性评价
- PLK1基因RNAi慢病毒载体的构建及对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究慢病毒介导的PLK1(Polo-like kinase1)基因RNAi对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响.方法:利用RT-PCR和Western blot检测不同食管鳞癌细胞中PLK1的表达.根据人PLK1mRNA序列设计干扰片段,Western blot检测干扰效率;利用划痕愈合实验及Transwell实验研究靶向PLK1的RNAi对食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的影响.将有效干扰序列构建至慢病毒干扰载体pGLV/H1/GFP+Puro中,测序鉴定.重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,制备的重组病毒感染食管鳞癌细胞,利用荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率;利用裸鼠肺转移模型实验研究慢病毒介导的PLK1基因RNAi对食管鳞癌细胞在体内侵袭转移能力的影响.结果:筛选出一种高表达PLK1的食管鳞癌细胞株TE-8用于实验研究;筛选出有效的干扰片段,并成功构建靶向干扰PLK1基因的慢病毒载体,制备重组病毒颗粒用于感染食管鳞癌细胞;靶向PLK1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移.结论:靶向干扰PLK1基因的重组慢病毒能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移,PLK1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.
- 于文静张宝刚陈丽梅王守训冯卫国杜长青刘顺梅赵春玲
- 关键词：PLK1慢病毒载体RNAI食管鳞癌
- 孕妇外周血中胎儿特异性mRNA的筛选及其临床意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨从孕妇外周血中筛选和分离胎儿21号染色体上的PLAC4、COL6A1基因mRNA的方法及其临床应用价值。方法选择2008年10月至2009年11月在潍坊市人民医院行产前检查的孕7～16周的单胎健康孕妇30例为孕妇组，来院体检的非孕妇女9例为对照组。采用荧光定量PCR技术检测两组妇女外周血中PLAC4 mRNA和COL6A1 mRNA的表达水平。并对外周血中PLAC4、COL6A1 mRNA表达水平与孕龄进行相关性分析。结果（1）PLAC4：孕妇组妇女外周血中PLAC4 mRNA表达水平的最小值为2．105×10^3copy／ml，最大值为12．760×10^3copy／ml，中位数为6．612×10^3copy／ml；而对照组妇女外周血中均未检测到PLAC4 mRNA的存在，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）COL6A1：两组妇女外周血中均能检测到COL6A1 mRNA的表达，孕妇组妇女外周血中COL6A1 mRNA的表达水平中位数为6．847×10^3copy／ml，对照组妇女7．322×10^3copy／ml，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）相关性分析：孕妇组妇女外周血中PLAC4 mRNA和COL6A1 mRNA表达水平与孕龄均无相关性（r分别为0．29和0．31，P值分别为0．121和0．168）。结论健康孕妇和非孕妇女外周血中均能检测到COL6A1 mRNA的表达，对妊娠不具有特异性；而PLAC4 mRNA只在孕妇外周血中可以检测到，而非孕妇女中则检测不到，PLAC4 mRNA具有妊娠特异性，可作为21三体综合征产前诊断的生物学标志物。
- 刘红英杨利丽厉锋杨和军刘顺梅张金宝
- 关键词：产前诊断唐氏综合征生物学标记
- 岩藻黄素对H_2O_2诱导BNL CL.2细胞氧化损伤保护作用研究被引量：3
- 2019年
- 建立BNL CL.2细胞氧化损伤模型,探讨岩藻黄素对细胞氧化损伤的保护作用。采用H2O2诱导,以MTT法筛选最佳诱导条件建立BNL CL.2氧化损伤模型。用不同浓度(1~20μmol/L)的岩藻黄素处理模型细胞,MTT法检测细胞活力,LDH试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶释放量,GSH试剂盒检测胞内还原型谷胱甘肽含量,荧光酶标仪分析岩藻黄素对胞内活性氧(ROS)的清除能力。1 000μmol/L的H2O2处理BNL CL.2细胞24h成功建立了氧化损伤模型。20μmol/L岩藻黄素可显著提高模型细胞的活力(P <0.05);1~20μmol/L岩藻黄素可明显降低模型细胞乳酸脱氢酶释放量(P <0.05),可显著提高细胞内源性抗氧化剂谷胱甘肽的含量(P <0.05);1~10μmol/L岩藻黄素可显著降低模型细胞内ROS的含量(P <0.05)。岩藻黄素具有抗氧化作用,可抑制H2O2引起的BNL CL.2细胞的氧化损伤。
- 齐佳崔艳君王广策唐娜成敏孙恒一綦慧敏刘顺梅
- 关键词：岩藻黄素H2O2
- 锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达被引量：4
- 2012年
- 目的:研究锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达。方法:从小鼠脑、肝、卵巢和不同发育阶段睾丸组织中提取总RNA,采用半定量RT-PCR法检测ZNF185的表达;制备小鼠不同发育阶段睾丸冰冻切片,应用免疫细胞化学分析法检测ZNF185蛋白的定位。结果:①ZNF185在睾丸中的表达显著高于脑、肝和卵巢组织。②ZNF185在小鼠性成熟前组睾丸中的表达显著低于性成熟期和老年期,而性成熟期和老年期之间差异不显著。③在性成熟前,ZNF185主要定位于睾丸间质细胞和类肌细胞;在性成熟期和老年期小鼠中,ZNF185主要定位于睾丸间质细胞、类肌细胞和精子。结论:ZNF185在小鼠性成熟后睾丸中的表达升高,定位更广泛。
- 冯卫国潘智芳连波陈丽梅刘顺梅刘晓影高志芹
- 关键词：睾丸精子发生免疫细胞化学小鼠
- 岩藻黄素抗D-gal诱导SH-SY5Y细胞衰老作用及机制研究被引量：1
- 2021年
- 衰老相关的神经退行性疾病发病率不断增高,严重影响老年人生活质量,为探讨岩藻黄素(Fucoxanthin,FUCO)对神经细胞的抗衰老作用及其机制,采用D-gal诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)衰老,然后在细胞培养基中添加FUCO对细胞进行干预,检测其细胞活力、SA-β-半乳糖苷酶活性及细胞内丙二醛(MDA)含量,细胞内自噬体形成及自噬(Autophagy)相关蛋白的表达。研究结果显示,5,10μmol/L FUCO可明显抑制D-gal诱导的细胞衰老,显著提高SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),降低SH-SY5Y细胞内SA-β-半乳糖苷酶的活性(P<0.05)和MDA含量(P<0.05),但20μmol/L FUCO的抑制作用不明显(P>0.05)。光学显微镜观察结果显示,5,10,20μmol/L FUCO组细胞内自噬体数量明显比模型组增多;Western blot检测结果显示,与模型组比较,10,20μmol/L FUCO组自噬相关蛋白ATG5表达增多、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增大、p-mTOR/mTOR减小(P<0.05)。表明FUCO具有抗D-gal诱导的SH-SY5Y细胞衰老的作用,其作用机制可能与适度调节自噬途径有关。
- 朱敏敏李云鹏张淼李晓双成敏周珍琼刘顺梅
- 关键词：岩藻黄素SH-SY5Y细胞自噬D-GAL
- RNAi双沉默Survivin和hTERT基因抑制人结肠癌SW480细胞增殖促进凋亡被引量：8
- 2015年
- 目的探讨双向沉默Survivin和h TERT基因对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据。方法设计并构建能够稳定转录shRNA并可分别及联合干扰Survivin和h TERT分子表达的质粒,将其转染结肠癌SW480细胞后,分阴性对照组、空白质粒对照组、Survivin RNAi组、h TERT RNAi组和Survivinh TERT RNAi组。转染48h后TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测Survivin和h TERT mRNA的表达,Western blot检测Survivin和h TERT蛋白的表达,流式细胞仪及cck-8法分别检测细胞凋亡和细胞增殖的变化。结果 Survivin-h TERT RNAi组SW480细胞端粒酶活性明显下降(P<0.01),Survivin-h TERT RNAi组Survivin及h TERT的mRNA水平较正常对照组分别减低82.8%和73.6%(P<0.01),蛋白表达抑制率分别为79.2%和66.7%(P<0.01)。实验各组中Survivin-h TERT RNAi组细胞增殖抑制率和凋亡率最高,分别为43.6%±0.1%和39.2%±2.3%(P<0.01)。结论 Survivin和h TERT双干扰质粒可明显下调Survivin和h TERT蛋白的表达,抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡。
- 肖琳王平董俊红王守训刘顺梅
- 关键词：SURVIVINTERT结肠癌
- 7种鲽形目鱼类生长激素基因cDNA序列的克隆及系统分析被引量：11
- 2008年
- 从7种重要鲽形目经济鱼类——高眼鲽（Cleisthenes herzensteini）、黄盖鲽（Limanda yokohamae）、木叶鲽（Pleuronichthys Cornutus）、宽体舌鳎（Cynoglossus robustus）、石鲽（Platichthys bicoloratus）和条鳎（Zebrias zebra）、夏鲆（Paralichthys dentatus）的脑垂体中提取mRNA，通过RTPCR方法，克隆了含开放阅读框的生长激素（growth hormone，GH）cDNA序列，与本实验室已克隆的大菱鲆和漠斑牙鲆、已报道的鲆鲽鱼类及外群鱼类共22条生长激素基因cDNA进行了序列比对和同源性分析．测序结果显示，高眼鲽、黄盖鲽、木叶鲽、宽体舌鳎、石鲽、条鳎和夏鲆的GHeDNA长度依次为479，564，519，440，564，440，522bp，编码140～170个氨基酸的成熟GH多肽片段．通过序列比对，这7种蛋白序列与其他已知的鲆鲽鱼类GH序列具有较高的同源性，同科的鱼类之间同源性更高．运用PAUP软件对15种鲽形目鱼类与另外7种不同种属鱼类进行了分子系统进化树分析，结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致，大菱鲆和塞内加尔鳎各自单独形成一个分支且与鲆科和鲽科鱼类相距较远，其中寒内加尔鳎等种类的分类地位与根据线粒体DNA序列分析的系统发生模式基本吻合．说明生长激素基因可以有效地用于研究鲽形目等硬骨鱼类的亲缘关系及分类地位．
- 刘滨臧晓南刘顺梅张学成雷霁霖
- 关键词：鲽形目生长激素CDNA
- 链脲佐菌素诱导C57BL/6J和昆明小鼠1型糖尿病模型的比较被引量：7
- 2016年
- 目的比较相同剂量STZ处理时C57BL/6J和昆明小鼠1型糖尿病模型的成模率及稳定性,探究经济有效的糖尿病小鼠建模品系。方法健康雄性C57BL/6J和昆明小鼠分别随机分为3组(20只/组):正常对照组、150 m g/kg组(单次腹腔注射)、50mg/kg组(连续注射5 d)。末次注射STZ后每天测量小鼠摄食量和饮水量,每周测量小鼠空腹血糖及体重一次,连续观察4周。结果 2种建模方法均能使C57BL/6J和昆明小鼠表现出糖尿病的"三多一少"症状,且空腹血糖值比对照组显著增加(P<0.01),但2种小鼠的血糖差异无统计学意义。实验结束时,C57BL/6J和昆明小鼠的成模率没有差别,50 mg/kg组均为80%,150 mg/kg组均为65%。C57BL/6J小鼠的死亡率略低于昆明小鼠。结论相同剂量STZ处理下C57BL/6J和昆明小鼠1型糖尿病的成模率和模型稳定性基本一致,昆明小鼠是较C57BL/6J小鼠更为经济有效的建立糖尿病模型的小鼠品系。
- 郑国亚张金宝刘顺梅齐佳尹金良马娟
- 关键词：昆明小鼠链脲佐菌素
- 转牙鲆生长激素基因酵母及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种转牙鲆生长激素基因酵母及其制备方法和应用，所述的转基因酵母是将牙鲆生长激素基因转入酿酒酵母中获得的，得到的酿酒酵母表达牙鲆生长激素。酿酒酵母发酵技术成熟，表达量较高，而且安全无毒，得到的表达牙鲆生长激素的...
- 张学成刘滨臧晓南刘顺梅
- 文献传递
