刘云龙
- 作品数：12 被引量：52H指数：4
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自噬在乙二醇诱导的大鼠肾内晶体形成中的调控作用被引量：3
- 2019年
- 目的:探讨自噬在乙二醇诱导的大鼠肾内晶体形成中的调控作用。方法:健康雄性SPF级SD大鼠40只,分为正常对照组、结石模型组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理组(0.75%乙二醇+NAC)、雷帕霉素处理组(0.75%乙二醇+雷帕霉素)和氯喹处理组(0.75%乙二醇+氯喹),每组8只。干预4周后,应用Western blot和免疫组化检测各组肾脏组织中自噬关键蛋白LC3-II的表达水平;透射电镜观察各组肾组织中自噬泡的数量;应用试剂盒检测各组24 h尿液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;全自动生化仪检测各组血清肌酐及尿素氮的水平;ELISA法检测各组24 h尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(Kim-1)的水平。钙盐染色法观测各组肾脏晶体的沉积情况,评价肾组织的病理学变化。结果:与结石模型组相比,雷帕霉素处理组和氯喹处理组中LC3-II的表达水平和自噬泡数量均增加,而在NAC处理组中LC3-II的表达水平和自噬泡数量均减少(P<0.05)。与结石组相比,雷帕霉素处理组中T-SOD和GSH-Px水平降低,而氯喹处理组和NAC处理组中T-SOD和GSH-Px的活性增加(P<0.05)。与正常组相比,结石组中血清肌酐、尿素氮、NGAL和Kim-1的水平及肾脏内晶体沉积增加(P<0.05);在雷帕霉素处理组中肾脏损伤进一步加重,晶体沉积进一步增加,而在氯喹处理组和NAC处理组中肾脏损伤明显减轻,晶体的沉积明显减少。结论:乙二醇激活自噬后可以促进大鼠肾内晶体的形成。应用抗氧化剂和自噬抑制剂不仅可以降低肾脏内的自噬水平,还可以减轻肾脏损伤,减少晶体沉积,降低肾结石的形成率。
- 李德荣刘云龙王翔孙焱康珏宁刘权何子奇陶芝伟关晓峰邓耀良
- 关键词：自噬乙二醇草酸钙肾结石活性氧
- 体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化被引量：1
- 2015年
- 目的：观察在体外培养条件下,使用成骨诱导培养液或不同浓度钙离子诱导人肾间质成纤维细胞发生成骨分化的效果,初步探讨肾脏Randall斑形成可能的细胞机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞,实验分为5组：成骨诱导组（加成骨诱导液）、CaⅠ组（加0.5 mmol/L Ca2＋液）、CaⅡ组（加1.5 mmol/L Ca2＋液）、CaⅢ组（加2.5 mmol/L Ca2＋液）和对照组（加PBS）。各组细胞分别培养至第1、3、6、9天时,采用MTT法检测细胞活力;诱导至第9天时,用细胞钙茜素红染色液和钙钴法磷酸酶染色液对各组细胞进行染色,观察钙结节形成和碱性磷酸酶的表达情况。另外,分别采用real-time PCR和Western blot检测各组细胞不同时间点Runt相关转录因子2（Runx2）的mRNA和蛋白表达水平。结果：在1.5 mmol/L和2.5 mmol/L Ca2＋浓度条件下细胞的活力明显受抑制。细胞染色结果证实成骨诱导液组和钙离子组均可以见到典型的红色钙结节和黑色块状的硫化钴沉淀物。成骨诱导组细胞Runx2的mRNA和蛋白相对表达量（0~9 d）逐渐升高（P〈0.05）;诱导至第9天时,3个钙离子组细胞Runx2的mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性升高（P〈0.05）。结论：在体外培养环境下,人肾成纤维细胞可以在成骨诱导培养液的刺激作用下发生成骨分化;另外,在高钙离子环境,人肾成纤维细胞也发生了类似的成骨分化。肾乳头组织中的成纤维细胞在高钙离子等因素的作用下发生成骨分化,这可能是肾脏Randall斑形成的细胞学基础。
- 严一杰黎承杨邓耀良曾国华陶芝伟刘云龙孙春王扬
- 关键词：成骨分化高钙尿症
- 高浓度草酸作用下HK-2细胞系中外泌体的提取与鉴定被引量：5
- 2017年
- 目的 探讨高浓度草酸作用下HK-2细胞系中外泌体提取与鉴定的方法.方法 2016年6月至2017年1月进行实验.配制含草酸浓度分别为0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00、8.00、10.00mmoL/L的DMEM/F12无血清培养基,分别对HK-2细胞干预48 h,然后用CCK-8法检测不同浓度草酸对HK-2细胞生存率的影响.结合倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,选择2.00 mmol/L的草酸作为实验浓度.用2.00 mmol/L草酸对HK-2细胞系干预48 h,收集干预后的HK-2细胞系的上清液,采用超速离心法提取外泌体;透射电镜观察外泌体的形态、大小;Nanosight系统检测外泌体的粒径与分布;蛋白质印迹法检测外泌体特异性蛋白HSP70、CD63的表达.结果 CCK-8法检测结果显示0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00、8.00、10.00 mmol/L组细胞的生存率分别为（100.0±4.0）％、（97.7±1.5）％、（97.3±2.1）％、（87.7±2.1）％、（76.0±1.0）％、（58.1±2.6）％、（52.7±1.5）％、（37.7±3.2）％、（31.3±2.0）％.透射电镜下外泌体呈杯口状,包膜为典型的双层膜结构.Nanosight系统显示2.00mmoL/L组外泌体峰值粒径为56 nm,整体平均粒径为87 nm,粒径为30～150 nm的比例为91.2％.蛋白质印迹法检测结果显示外泌体中明显表达HSP70和CD63蛋白,提取外泌体后的HK-2细胞表达HSP70蛋白,不表达CD63蛋白.结论 2.00 mmol/L草酸作用HK-2细胞48 h后,可以通过超速离心法提取丰富的、较高纯度的外泌体,这将为后续深入研究高浓度草酸背景下外泌体的信号转导奠定基础.
- 何子奇关晓峰刘权刘云龙邓耀良
- 关键词：外泌体肾结石草酸
- 穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物的制备及活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的制备穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其穿膜活性和酶活性。方法采用异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯(SPDP)将穿膜肽—增强型绿色荧光蛋白融合蛋白(CPPs-EGFP)、β-葡萄糖苷酶进行共价交联,经Ni-NAT Superflow Cartridge、Sephadex G-75层析柱分离纯化。采用还原型和非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对偶联物进行鉴定;偶联物与膀胱癌EJ细胞共同孵育,置于荧光显微镜下观察,鉴定其穿膜活性;采用β-葡萄糖苷酶测试盒(DBGD-100)鉴定其酶活性。结果偶联物SDS-PAGE非还原型电泳高分子量端可见明显条带,而还原型电泳分别在穿膜肽和β-葡萄糖苷酶分子量相应位置可见明显条带;在荧光显微镜下与偶联物共同孵育后的膀胱癌EJ细胞内可见明显绿色荧光;用β-葡萄糖苷酶测试盒(DBGD-100)测定,偶联物仍然保持良好的酶活性,约为同等浓度β-葡萄糖苷酶活性的80%。结论应用SPDP成功制备了穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物,并且偶联物保持良好穿膜活性和酶活性。该方法有助于解决酶—前药系统药物难以进入细胞内的问题。
- 王光文周洁王启辉刘云龙
- 关键词：穿膜肽Β-葡萄糖苷酶偶联物
- 西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物的制备及鉴定
- 2014年
- 目的制备西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其酶活性与抗体活性。方法采用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(Sulfo-SMCC)将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶进行共价交联。采用非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、比色法、间接免疫荧光法对偶联物进行鉴定并检测β-葡萄糖苷酶、西妥昔单抗的活性。结果在电泳图上可分别见到β葡萄糖苷酶、西妥昔单抗、西妥昔单抗-β葡萄糖苷酶偶联物的清晰条带。比色法测定结果显示,西妥昔单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物的酶活性低于β-葡萄糖苷酶(U/L:672.97±46.19 vs869.50±57.28,t=5.972,P<0.05),但仍保持良好的酶活性。在荧光显微镜下可见到与偶联物共同作用的人膀胱癌EJ细胞带有红色荧光。结论 Sulfo-SMCC可成功将西妥昔单抗、β-葡萄糖苷酶偶联,且偶联物仍能保持良好的酶活性与抗体活性。
- 刘云龙周洁王光文聂振
- 关键词：西妥昔单抗Β-葡萄糖苷酶偶联物膀胱肿瘤
- 羟基磷灰石诱导巨噬细胞炎性反应及凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的观察羟基磷灰石（HAP）对巨噬细胞炎性反应及凋亡的影响。方法将HAP用无血清1640培养基稀释至50、100、200、400 μg/ml，空白对照组为0 μg/ml，分别加入巨噬细胞中，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力，微量酶标仪法检测细胞上清液的乳酸脱氢酶（LDH）活性，实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β mRNA相对表达量，流式细胞术检测凋亡率，荧光酶标仪法测线粒体膜电位，Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Cleave Caspase-3）的表达。结果巨噬细胞暴露于不同浓度HAP下，与空白对照组比较，细胞活力逐渐降低，LDH活性逐渐升高，HAP浓度为400 μg/ml最显著（P＝0.000、P＝0.001）。TNF-α、IL-1β mRNA相对表达量均逐渐上升[（1.49±0.07、1.77±0.12、1.92±0.53、2.20±0.49）、（1.51±0.06、2.70±0.17、3.19±0.12、4.32±0.59）]，HAP浓度为400 μg/ml最显著（P＝0.000、P＝0.000）。凋亡率逐渐增加[（3.68±1.16）%、（4.69±1.61）%、（8.14±1.08）%、（15.20±0.88）%、（22.90±0.99）%]，线粒体膜电位荧光强度逐渐下降，bcl-2蛋白的表达逐渐降低，Cleave Caspase-3蛋白表达逐渐增加，HAP浓度为400 μg/ml时均最显著（P＝0.000）。结论HAP可诱导巨噬细胞经线粒体途径凋亡并上调炎症基因TNF-α、IL-1β mRNA的表达。
- 刘权陶芝伟关晓峰吴基华刘云龙何子奇邓耀良
- 关键词：羟基磷灰石巨噬细胞脱噬作用炎性反应肾结石
- 原发性肾小细胞神经内分泌癌1例报道并文献复习被引量：3
- 2017年
- 目的探讨肾脏小细胞神经内分泌癌的起源、临床病理特征、诊断、治疗方法,以提高对该病的认识。方法分析我科收治的1例肾脏小细胞神经内分泌癌患者的临床资料,结合国内外文献对该病进行复习总结。结果患者无明显症状及阳性体征,因体检发现左肾占位入院。术后标本大体观:左肾上中极见一肿物,大小9cm×8cm×8cm,切面灰白,质软呈实性,肾盂、肾盏结构破坏。镜下观:肿瘤细胞为小圆形或梭形,小梁状、巢状或片状排列,核分裂易见。免疫组化:CD10(-)、CD117(+)、CD56(+)、CD99(+)、CgA(-)、CK(部分+)、CK7(-)、CK8(+)、Ki-67(≥25%)、Syn(+)、Vim(+)。结论肾脏小细胞神经内分泌癌临床罕见,临床表现缺乏特异性,确诊主要依靠组织学特点和免疫组织化学检查,治疗以根治性手术为主,预后较差。
- 赵嘉闻赵雨桐黎承杨邓耀良刘云龙
- 关键词：肾脏神经内分泌癌
- M2型巨噬细胞对草酸钙晶体刺激肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：1
- 2018年
- 目的探讨M2型巨噬细胞对草酸钙晶体(CaOx)刺激肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响。方法将人单核细胞(THP-1)经佛波酯(PMA)及白细胞介素(IL)-4、IL-13序贯诱导为M2型巨噬细胞,使用实时定量PCR、Western Blot、ELISA法检测其表型标志物,以鉴定诱导分化情况。用浓度为0.5 mg/m L的CaOx刺激HK-2细胞,利用Transwell建立M2型巨噬细胞(上室)与HK-2细胞(下室)共培养模型,实验分组为HK-2细胞组、HK-2细胞+M2型巨噬细胞共培养组、HK-2细胞+CaOx组、HK-2细胞+CaOx+M2型巨噬细胞共培养组。使用CCK-8法检测各组HK-2细胞活力、微量酶标仪法测各组HK-2细胞上清液的乳酸脱氢酶(LDH)活性、DAPI进行凋亡染色和Western Blot检测各组HK-2细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。划痕实验观测M2型巨噬细胞对HK-2细胞的迁移、修复的影响。结果表型标志物鉴定结果显示,成功将THP-1细胞序贯诱导为M2型巨噬细胞。CCK-8法结果显示M2型巨噬细胞显著增加CaOx对HK-2细胞损伤后的活力,且M2型巨噬细胞对HK-2细胞增殖具有促进作用(P<0.05)。LDH活性检测结果显示M2型巨噬细胞显著性降低CaOx刺激HK-2细胞的LDH活性(P<0.05)。DAPI染色及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达结果显示M2型巨噬细胞具有抑制CaOx刺激HK-2细胞凋亡的作用。划痕实验显示M2型巨噬细胞对HK-2细胞具有促进迁移、修复的作用。结论 M2型巨噬细胞对CaOx刺激HK-2细胞的损伤具有一定的抑制作用,且可促进HK-2细胞增殖、迁移。
- 刘权关晓峰陶芝伟王翔吴基华刘云龙何子奇邓耀良
- 关键词：M2型巨噬细胞草酸钙晶体肾小管上皮细胞
- 细胞-晶体反应介导的炎症在肾内草酸钙晶体形成中的作用被引量：15
- 2018年
- 草酸钙肾结石是泌尿外科的常见病，其形成机制迄今不明。目前认为，细胞一晶体反应诱导的肾脏炎症损伤在肾内草酸钙晶体的形成过程中扮演着十分重要的角色。新近的研究结果显示，细胞．晶体反应介导的炎症可以导致肾脏细胞损伤，刺激细胞内的NADPH氧化酶表达，引发活性氧簇大量生成，激活核因子KB信号转导通路，释放大量的炎性因子，引发炎症级联反应，促进钙盐晶体的聚集、成核和生长过程，最终导致肾内晶体乃至结石的形成。巨噬细胞、NLRP3。高迁移率族蛋白炎症网络、胎球蛋白A、自噬激活等多种调控因子和作用机制参与这一过程。
- 邓耀良刘云龙陶芝伟王翔
- 关键词：肾结石草酸钙炎症
- 尿钙对含钙肾结石患者尿液MCP-1、TFF1及HMGB1生成的影响被引量：18
- 2015年
- 目的观察尿钙水平对含钙肾结石患者尿液炎症细胞因子生成的影响,探讨尿钙和炎症细胞因子在结石形成过程中的作用。方法选取含钙肾结石患者81例,分为两组:24 h尿钙≥4 mg/(kg·d)纳入高钙尿结石组(H组,32例),24 h尿钙<4 mg/(kg·d)纳入低钙尿结石组(L组,49例),随机选取30例无泌尿系结石的健康者作为对照组(C组)。检测3组晨尿中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、三叶因子1(TFF1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)的水平,比较尿钙水平与各细胞因子之间以及各细胞因子之间的相关性。结果 MCP-1在H组、L组、C组分别为196.2(35.22,502.89)、217.60(66.62,766.87)和72.45(18.87,196.79)pg/mg;组间比较,H组和L组均高于C组(P<0.05),但H组与L组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TFF1在H组、L组、C组分别为15.24(9.68,29.88),30.04(12.12,43.39)和22.45(15.31,42.09)ng/mg;与其他两组对比,H组TFF1生成减少(P<0.05);TFF1在L组和C组间差异无统计学意义(P>0.05)。HMGB1在H组、L组、C组分别为(单位pg/mg):2 896.24(1 592.80,7 057.64),3 052.76(1 194.95,6 838.55)和1 717.32(733.69,2854.56);组间比较,H组和L组HMGB1均高于C组(P<0.05),但H组与L组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析:H组尿钙水平与尿液TFF1呈负相关(r=-0.384,P<0.05);与MCP-1水平呈正相关(r=0.353,P<0.05)。在总体111个样本中,尿液MCP-1与尿液TFF1呈负相关(r=-0.21,P<0.05)。结论含钙肾结石患者尿液MCP-1、HMGB1水平有明显升高。高钙尿可以促使含钙肾结石患者尿液TFF1下降,但尿钙水平对MCP-1、HMGB1无明显影响,结石患者尿液MCP-1和HMGB1升高可能是多种损伤因素共同作用的结果。炎症细胞因子之间存在相关关系。
- 孙春黎承杨邓耀良曾国华王翔陶芝伟关晓峰严一杰刘云龙王扬
- 关键词：高钙尿MCP-1TFF1HMGB1
