冷超粮
- 作品数：60 被引量：437H指数：10
- 供职机构：南阳师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究被引量：13
- 2011年
- 为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清。间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异。病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体。以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体。
- 冷超粮安同庆陈家锃宫大庆李登云杨永倩彭金美张祎郭娟娟吴江童光志田志军
- 关键词：GP5中和抗体
- 1株猫源铜绿假单胞菌的分离鉴定及全基因组分析被引量：3
- 2022年
- 为了探究浙江大学教学动物医院就诊患猫鼻窦炎眶内感染的病原菌特点,试验采集患猫额窦、鼻腔、鼓泡部位的内容物,采用细菌分离纯化、16S rDNA基因序列分析对分离菌株进行鉴定;通过药敏试验、小鼠致病性试验、全基因组序列分析对分离菌株进行耐药性、致病性分析和遗传进化分析。结果表明:仅从患猫鼓泡内容物中分离得到1株铜绿假单胞菌,命名为ZJU2021。ZJU2021属于多重耐药菌株,对左氧氟沙星、氨曲南、多黏菌素B等5种药物敏感,而对美罗培南、万古霉素、多西环素等30种药物耐药。ZJU2021菌株基因组全长为6868280 bp,含有6426个基因;其中氨基糖苷类、氟喹诺酮类、β-内酰胺类等药物相关耐药基因48个;抗生素抗性基因61个,形成抗生素外排、抗生素靶向、抗生素灭活等耐药机制;毒力因子编码基因687个,其产物主要关于抗菌活性、铁摄取、调控系统、毒性蛋白等。ZJU2021毒力基因toxA和exoT与GenBank中的铜绿假单胞菌相应基因核苷酸相似性高于99%,其中toxA与从天津包装饮用水中分离的铜绿假单胞菌TJ2019-022株(登录号为CP065865.1)位于同一分支上,且二者构成独立分支;exoT基因与北京、兰州等地分离的人源铜绿假单胞菌处于同一分支。说明本次分离得到的菌株具有较强的致病性,其耐药基因在人与动物之间的传播会造成严重的公共卫生安全问题,因此临床上应加强人兽共患细菌性疾病的监测。
- 李慧敏李培德潘嘉臻马晓丹马晓丹任大喜王华南
- 关键词：铜绿假单胞菌药敏试验全基因组分析毒力基因
- 可视化检测Hobi‑like瘟病毒的反转录环介导等温扩增引物、试剂盒和检测方法
- 本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种可视化检测Hobi‑like瘟病毒的反转录环介导等温扩增引物、试剂盒和检测方法。本发明合成特异性LAMP引物上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3，所述...
- 史鸿飞阚云超姚伦广唐存多焦铸锦冷超粮冀君岳超马娜
- 2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化被引量：42
- 2020年
- 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。
- 张洪亮张文立许浒宋帅杰赵静相丽润冷超粮李真刘春晓汤艳东陈家锃彭金美王倩安同庆童光志蔡雪辉田志军
- 关键词：PRRSV细胞嗜性
- 一种基于人结直肠癌相关基因SEPT9甲基化检测的聚合酶螺旋扩增引物组和检测试剂盒
- 本发明提供一种基于人结直肠癌相关基因SEPT9甲基化检测的聚合酶螺旋扩增引物组、试剂盒及检测方法。本发明针对人结直肠癌基因组中SEPT9基因的启动子V2区域设计了一对用于人结直肠癌特异性甲基化检测的PSR引物和试剂盒。用...
- 冀君许鑫胡雯王雪雨冷超粮史鸿飞阚云超姚伦广
- 文献传递
- 一种猪流行性腹泻病毒的检测引物和荧光定量RT-PCR检测方法
- 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒的检测引物和荧光定量RT-PCR检测方法。本发明检测上游引物QPEDV-F，序列为：CTTCCCAGCGTAGTTGAG；下游引物QPEDV-R，序列为：TTGCC...
- 冷超粮翟洪月阚云超姚伦广王丛丛王娇玲冷玉敏史鸿飞冀君唐青海
- 文献传递
- 一株不能被高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗抗血清中和的HP-PRRSV的分离鉴定被引量：5
- 2014年
- 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异及流行情况，本研究采用猪肺泡巨噬细胞培养分离PRRSV野毒株，从某疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场的发病猪肺脏病料中分离了一株PRRSV，命名为HEL-12。并将该病毒测序分析，其基因组序列已提交到NCBI （序列号：KJ019330）。基因序列比对显示，该分离株与经典株相比其NSP2蛋白存在HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的典型特征，与HP-PRRSV代表株JXA1和HuN4株的同源性仅为97.3 %，其变异主要位于基因组编码的结构蛋白GP2～GP5和非结构蛋白NSP2。血清中和试验表明10份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该病毒株，表明HEL-12的抗原发生了较大变异，是一株新的HP-PRRSV变异株。本研究表明，PRRSV一直处于不断变异中，需要对其遗传变异持续监测。
- 陈家锃白云常丹张秋月王倩冷超粮张武超赵鸿远叶超李琳田志军彭金美安同庆童光志
- 关键词：病毒中和试验
- 鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
- 2017年
- 为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性。
- 冀君朱晨晨许鑫刘晓冷超粮史鸿飞姚伦广阚云超
- 关键词：凋亡素鸡贫血病毒高效可溶性表达活性分析
- 一种犬细小病毒IgG抗体检测试剂盒
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种犬细小病毒IgG抗体检测试剂盒。本发明所制备的试剂盒，在临床样品检测时操作流程简单，3.5小时之内可完成检测，结果判定只需要一台普通的倒置显微镜即可，不需要特殊的仪器，肉眼可见特异性染...
- 唐青海阚云超姚伦广唐存多毛倩倩焦铸锦史鸿飞冷超粮刘宗才刘飞
- 文献传递
- 北美型猪繁殖与呼吸综合征竞争ELISA抗体检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2019年
- 为建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的ELISA方法,本研究以纯化的PRRSV全病毒为包被抗原,利用抗北美型PRRSV M蛋白的特异性单克隆抗体为竞争抗体,经条件优化,建立了特异性检测北美型PRRSV的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示,最佳抗原包被量为660 ng/孔,待检血清样本稀释度为1∶2,竞争抗体最佳稀释度为1∶8。ELISA结果判定标准:血清样本抑制率PI≥25.65%时判定为阳性,PI<25.65%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测北美型PRRSV,与PRV、PCV2、CSFV、PEDV、TGEV等猪病毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出128倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法对黑龙江地区收集的546份临床血清样品进行检测,PRRSV抗体阳性率达95.1%,与商品化IDEXX PRRSV试剂盒的符合率为95.8%。本研究建立的C-ELISA方法为PRRS的流行病学调查、临床上疫苗评估及免疫前后抗体水平监测提供了有效的检测手段。
- 李宛生李敏华杨建伟田志军王倩冷超粮
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白竞争ELISA
