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POLD1基因CDS区突变及其对正常细胞的影响: 目的:　　DNA聚合酶δ(polymerasedelta，Polδ)是真核生物DNA复制最重要的DNA聚合酶之一，它由四个亚基组成，其中催化亚基p125同时具有聚合酶和外切酶功能。P125的编码基因为POLDI。癌细胞的...; 黄文涛; 关键词：肝癌基因突变细胞增殖; 文献传递

RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究被引量：2: 2014年; 目的应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索该技术干预肝癌的可行性。方法制备4个针对人POLD1基因的shRNA表达质粒,转染SMMC-7721细胞48 h后,荧光定量PCR法检测POLD1基因的表达,CCK-8检测细胞生长情况。结果测序鉴定证实4个shRNA表达质粒构建成功,将其转染SMMC-7721细胞后,NEO-POLD1-1和NEO-POLD1-4表达质粒抑制效果明显,使SMMC-7721细胞的增殖受到抑制,并且使POLD1基因表达在mRNA水平抑制,NEO-POLD1-1相对表达量为(0.1425±0.0205),NEO-POLD1-4相对表达量为(0.209±0.009)。结论针对POLD1基因设计的shRNA在体外有效地抑制了POLD1基因mRNA的表达和肝癌细胞的增殖,且实现RNA干扰具有序列选择性。; 吴琼黄文涛黄怡廖柳凤谭晓红徐恒; 关键词：肝肿瘤 RNA干扰技术

氯化两面针碱抑制前列腺癌的作用与机制的研究: 目的:　　前列腺癌(PCa)是男性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病隐匿，大部分患者出现症状就医时已是晚期。近年来我国男性人群中前列腺癌的发病率和死亡率呈现快速上升的趋势，目前临床上对晚期前列腺癌病无有效的治疗手段。氯化...; 黄文涛; 关键词：前列腺癌氯化两面针碱细胞凋亡信号通路

重组质粒BFP-cyclin D1的构建及表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响被引量：1: 2012年; 目的构建含人cyclin D1基因全长编码区的蓝色真核荧光表达载体BFP-cyclin D1,并观察cyclin D1的表达对MCF-7增殖和迁移能力的影响。方法以人乳腺癌MCF-7细胞总RNA为模板,经PCR扩增和酶切后与pEBFP-N1质粒连接,得到重组质粒BFP-cyclin D1。转染到人乳腺癌MCF-7细胞后分为3组:实验组转染BFP-cyclin D1,阴性对照组转染pEBFP-N1;空白对照组为MCF-7,以荧光定量PCR检测基因表达;MTT实验检测细胞生长速度;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功构建了BFP-cyclin D1,并在人乳腺癌MCF-7细胞中呈高表达,荧光定量PCR检测示实验组cyclin D1在转染后12h开始增高,48h达到高峰并持续高表达,与激光共聚焦显微镜观察实验组蓝色荧光表达量的趋势一致;MTT实验证实实验组细胞增殖速度(48、72、96h)显著高于对照组(P<0.01);细胞迁移实验表明实验组细胞迁移能力显著高于对照组细胞(P<0.01)。结论 cyclin D1的高表达促进了人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移,这可能与其缩短细胞周期、促进DNA合成和复制功能有关。; 李永继黄怡阮细玲廖柳凤吴琼黄文涛徐恒; 关键词：乳腺癌 CYCLIN MCF-7 细胞增殖迁移

人突变型CDK4真核荧光表达质粒的构建及对人肝细胞SMMC-7702中POLD1基因表达的调控被引量：2: 2012年; 目的:构建包含突变型CDK4基因的真核绿色荧光表达载体,作为POLD1基因依赖的细胞周期复制调控的模型,研究POLD1基因相关的癌性增殖的机制,为干预细胞恶性增殖提供新的思路.方法:设计人突变型CDK4基因全长特异性引物进行P C R扩增人肝癌细胞系SMMC-7721总cDNA,以pEGFP-C1质粒为模板连接,得到重组质粒GFP-CDK4后进行测序和生物信息学比对分析;转染细胞分3组:实验组(转染突变型CDK4重组真核表达质粒GFP-CDK4),阴性对照组(转染空载体pEGFP-C1组)和空白对照组(SMMC-7702).通过MTT试验分析细胞增殖变化;实时荧光定量PCR技术检测CDK4、POLD1及细胞周期相关因子的表达量,Western blot检测蛋白表达的差异.结果:成功构建了人突变型CDK4基因真核表达质粒GFP-CDK4,转染到肝细胞SMMC-7702后使细胞表达融合绿色荧光的C D K4蛋白;S M M C-7721细胞中突变型的C D K4存在5个碱基突变,4个碱基插入,2个碱基缺失,这使得5个氨基酸序列发生了改变;与空白对照组及阴性对照组相比,实验组细胞增殖明显升高(0.826±0.08vs0.596±0.06,0.609±0.10,F=7.033,均P<0.05);实验组CDK4mRNA表达水平差异明显(1.94±0.11vs1.01±0.00,1.05±0.12,F=54.046,P<0.01),POLD1mRNA相应地升高(2.47±0.25vs1.16±0.00,1.26±0.23,F=135.496,P<0.01);稳定转染细胞的蛋白水平变化趋势与基因相同,其中实验组CDK4(0.65±0.03vs0.41±0.03,0.39±0.05,F=14.665,均P<0.05),P125(0.54±0.04vs0.30±0.07,0.25±0.06,F=11.788,均P<0.05).结论:人突变型CDK4基因的真核表达载体GFP-CDK4显著促进肝细胞的增殖能力,这与POLD1基因及P125蛋白的高表达相关.; 李永继黄怡阮细玲廖柳凤吴琼黄文涛徐恒; 关键词：突变 CDK4

反义RNA技术对抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因表达的研究被引量：5: 2013年; 目的:应用反义RNA技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索采用该技术干预肝癌的可行性。方法:制备人POLD1基因的反义RNA表达质粒,同时建立空白对照组与阴性对照组,由此将实验分为阴性对照组(转染空载体的SMMC-7721细胞)、空白对照组(肝癌细胞SMMC-7721)和实验组(转染人POLD1基因反义RNA表达质粒的肝癌SMMC-7721细胞)3组。MTT实验分析细胞增殖变化,并在转染SMMC-7721细胞48h后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测POLD1基因的表达。结果:MTT实验显示,与空白对照和阴性对照组相比,转染了反义RNA的实验组细胞增殖受到明显抑制。在转染后24～72h,实验组吸光度24h为0.306 7±0.015 4,48h为0.459 2±0.033 2,72h为0.567 1±0.061 1,与空白和阴性对照组相比,P值均<0.05。实时荧光定量PCR实验显示,实验组POLD1的mRNA表达明显下调为0.142 5±0.020 5,阴性对照组为1.017±0.188,空白对照组为1.00±0.00(F=26.5,P<0.05),说明POLD1基因表达受抑制。蛋白质印迹实验显示,POLD1基因蛋白水平(p125)变化趋势与mRNA相同,均为下调,其中实验组为0.222 3±0.009 7,阴性对照组为0.237 9±0.005 9,空白对照组为0.235 4±0.003 4(F=1 365.754,P值均<0.05),说明反义RNA可抑制p125蛋白表达,结论与基因水平趋势一致。结论:针对POLD1基因设计的反义RNA体外抑制了肝癌细胞SMMC-7721的增殖,这与POLD1在基因和蛋白水平的表达下调有关。; 吴琼黄文涛黄怡徐恒; 关键词：肝肿瘤反义RNA 基因表达

POLD1基因反义RNA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用: 2021年; 目的研究DNA聚合酶δ催化亚基基因1(POLD1)反义RNA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及相应机制。方法将SMMC-7721细胞分为3组:实验组、阴性对照组、空白组。实验组及阴性对照组分别将POLD1基因反义RNA表达质粒及空质粒分别转染至SMMC-7721细胞,未经处理的SMMC-7721细胞为空白组。用聚合酶链反应法检测各组细胞POLD1基因表达情况;用细胞计数-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;用流式细胞术分析细胞凋亡率;用蛋白质印迹(Western blot)法检测p53、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等凋亡相关蛋白表达量。结果实验组、阴性对照组和空白组肝癌细胞POLD1基因相对表达量分别为0.18±0.03,1.03±0.18和1.00±0.00;转染72 h增殖情况(OD_(450)值)分别为0.57±0.06,0.73±0.09和0.77±0.12;凋亡率分别为(23.43±4.12)%,(9.12±1.03)%,(1.24±0.14)%,实验组的上述指标与阴性对照组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论POLD1基因反义RNA可显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,且能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。; 吴琼安娜廖柳凤黄文涛; 关键词：肝癌细胞反义RNA 细胞抑制

氯化两面针碱逆转DNA拓扑异构酶介导的肿瘤多药耐药作用研究: 刘华钢黄巨恩梁燕刘丽敏张华君冯燕英李俊威范玉琴汤婷婷黄文涛徐佳佳梁霜刘海燕罗丹成晓静廖柳凤陆游赵晶晶; 该项目获得国家自然科学基金资助，立项编号：81260657，资助金额49万元，于2013年1月开展，2016年12月顺利完成并结题。化学药物治疗是肿瘤综合治疗的主要方法之一。但随着化疗的开展，肿瘤细胞对化疗药物的耐药，...; 关键词：; 关键词：肿瘤综合治疗化学药物治疗氯化两面针碱

氯化两面针碱通过Rb/E2F途径抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用机制研究被引量：4: 2013年; 氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)是从芸香科植物两面针根部提取的一种天然生物碱,具有很好的抗肿瘤活性,在体外能抑制鼻咽癌,肺癌等细胞的增殖。研究表明NC可导致细胞周期G2/M期阻滞,并诱导细胞凋亡。E2F/RB在细胞周期调控中起重要作用,它们与CyclinD1、CDK4、CyclinE、CDK2构成复杂的反馈调控网路,调节细胞从G1期到S期的过渡,推动了细胞周期的转变。另外,研究表明E2F是重要的转录因子,参与了基因的转录调控。研究肝癌细胞SMMC-7721经两面针碱处理后RB/E2F通路的相关分子水平变化,以及氯化两面针碱在RB/E2F途径抑制肝癌细胞增殖,参与细胞凋亡作用的机制。应用CCK8方法测定NC对SMMC-7721细胞存活率的影响;Annexin-V和碘化丙碇(propidium i-odide,PI)双染法检测细胞凋亡和坏死情况;RT-PCR检测不同剂量NC对E2F、RB mRNA表达影响;WB检测E2F蛋白含量的变化。结果显示NC可抑制肝癌细胞增殖,降低细胞存活率,促进细胞凋亡,明显降低细胞中E2F、RB mRNA和E2F蛋白的表达,并呈浓度依赖性。NC通过作用于E2F/RB调控通路,抑制了E2F/RB的表达,参与了细胞的增殖抑制和诱导了细胞凋亡。; 黄怡廖柳凤黄文涛吴琼何洁梅李敏徐恒; 关键词：氯化两面针碱转录调控 E2F RB 肝癌

人肝癌SMMC-7721细胞中POLD1基因CDS突变的检测: 2013年; 目的检测人肝癌细胞株SMMC-7721中POLD1基因CDS的突变情况,以期从DNA复制最关键酶的编码基因POLD1的突变为干预细胞恶性增殖提供新的思路。方法设计人POLD1基因CDS特异性引物,以人肝癌细胞株SMMC-7721总RNA为模板进行RT-PCR扩增,将扩增产物纯化后加入"腺嘌呤"并与T载体连接,将连接产物进行测序,与数据库中的序列进行比对。结果成功扩增了人肝癌细胞中POLD1基因的CDS片段。SMMC-7721细胞中POLD1基因的CDS存在11个碱基替换,1个碱基缺失。结论人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的CDS发生了突变,进而导致其编码的氨基酸序列发生改变。; 黄文涛吴琼李锦源黄怡徐恒; 关键词：肝肿瘤突变

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黄文涛

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